Azido Nukleikoen Arazketa Sistema Automatizatua

Azido nukleikoak bizitzako substantziarik oinarrizkoenetako bat dira eta bi kategoriatan bana daitezke: DNA eta RNA. Azido nukleikoak oso ugariak dira izaki bizidun guztietan, hala nola animalia eta landare zeluletan eta mikroorganismoetan. Informazio genetikoa gordetzeko eta transmititzeko zeregina ez ezik, proteina-biosintesian ere posizio garrantzitsua betetzen du, eta, beraz, paper erabakigarria betetzen du bizitzako fenomeno nagusi batzuetan, hala nola hazkuntza, herentzia eta mutazioa. Azido nukleikoa erauztea DNA erauzketa, RNA erauzketa eta plasmidoen erauzketa barne hartzen ditu. Azido nukleikoak informazio genetikoaren eramaileak dira, gene-adierazpenaren oinarri materialak eta biologia molekularraren ikerketaren objektu nagusia. Azido nukleikoen azterketa estrukturalak edo funtzionalak eginez, lehenik atera eta araztu behar dira. Azido nukleikoak arazteko sistemak Laginetatik azido nukleikoen erauzketa automatikoki osatzen duten tresnak dira, bat datorren azido nukleikoen erauzketa erreaktiboa aplikatuz. Bi motatako azido nukleikoen erauzgailuak daude: automatizatu handiak, orokorrean likido-estazio automatizatuak deitzen direnak eta txikiak. azido nukleikoak arazteko sistema automatizatuak kapsulatutako erreaktiboak erabiltzen dituztenak erauzketa eta arazketa prozesua automatizatzeko. Neurri handi batean automatizatutako lan-estazio likidoak gero eta gutxiago erabiltzen dira, ekipoen kostu altuagatik, funtzionamendu-kostu altuengatik eta espezie bereko milaka ale aldi berean ateratzeko egokitasunagatik, eta tresna automatizatu txikiak gero eta gehiago erabiltzen dira, kostu baxuagatik. ekipamendua eta funtzionamendua, eta funtzionatzeko erraztasuna.

1869an azido nukleikoak aurkitu zirenetik, ikertzaile askok etengabeko ahaleginak egin dituzte azido nukleikoen erauzketa metodoak aztertzeko eta hainbat material eta erreaktibo hobetu dituzte. azido nukleikoak. Azido nukleikoak erauzteko esperimentuetan hainbat erreaktibo aplikatu dira, hala nola sodio dodecil sulfatoa, fenola, urea eta guanidina gatzak, eta azido nukleikoak erauzteko hainbat kit komertzial garatu dira. Horien artean, ohiko erauzketa-metodoek fenol-erauzketa, alkalino-lisia, CTAB erauzketa eta EtBr-CsCl gradientearen zentrifugazioa barne hartzen dituzte. Erauzketa-metodo tradizional hauek ehun-lagin ezberdinetatik DNA eta RNA isolatu ditzakete, baina teknika horien artean prezipitazioa eta zentrifugazioa daude, lagin biologikoen bolumen handia eskatzen dutenak, eta erauzketa-urratsak neketsuak, denbora asko eta neketsuak dira, eta etekina ez da. altua, eragiketa automatizatzea zailduz. Gainera, metodo tradizional gehienek erreaktibo kimiko toxikoen erabilera eskatzen dute, eragileen osasunerako kaltegarriak izan daitezkeenak. Hori dela eta, biologia molekularra eta material polimerikoak garatzearekin batera, azido nukleikoak fase likidoko sistemetatik bereizteko teknika tradizionalak ordezkatzen ari dira pixkanaka fase solidoko eramaileetan oinarritutako metodo berriekin.

Azido nukleikoak erauzteko metodo berriak fase solidoko sorbente-eramaileak besteak beste, zutabe zentrifugo birakaria erauztea, beirazko aleen adsortzioa, silize-matrizearen metodoa, anioien truke metodoa eta nano-aleen erauzketa metodoa. Metodo horien funtzionamendu-urratsak hiru zati nagusitan bana daitezke.

a. Erabili lisi-soluzioa zelulen haustura eragiteko, fase likidoan azido nukleikoak askatzeko.

b. Eramaileak azido nukleikoekiko duen afinitate eta adsortzio handia erabiliz, askatutako azido nukleikoak berariaz lotzen dira eramaile espezifikoarekin, eta, beraz, beste ezpurutasun batzuk, hala nola proteinak, polisakaridoak eta lipidoak, fase likidoan aske geratzen dira eta kentzen dira. gainditzailea.

c. Araztutako azido nukleikoak eluentearen indar ionikoa eta pH-a egokituz lortzen dira eramailean adsorbatutako azido nukleikoak elutzeko.

Horien artean, zutabe zentrifugoen metodoa DNA erauzteko kitak oso erabiliak dira merkatuan, prezio baxuagatik eta funtzionamendu nahiko erosoagatik. Hala ere, DNA erauzteko eskaria handitu ahala, DNA erauzteko zutabe zentrifugoaren metodoaren desabantailak gero eta nabarmenagoak dira. Beharrezko lagin-bolumen handia, lagin asko galtzea eta lagin arraroekin lan egiteko ezintasuna zutabe zentrifugoaren metodoaren desabantaila saihestezin bihurtu dira, zutabe zentrifugoaren metodoaren DNA erauzteko prozesuak, berriz, zentrifugazio errepikatua eskatzen du, eta hori ez da komeni altuetarako. -erritmoa eta funtzionamendu automatizatua eta ez da bateragarria biologia modernoko esperimentuen eskakizunekin.

DNA erauzteko ale magnetikoak nanoteknologiaren eta bioteknologiaren arteko konbinazio ezin hobea da, beste abantaila paregabeak dituena DNA erauzteko beste metodo batzuen aldean.

Azido nukleikoen kontzentrazio handiak aipa daitezke material kopuru txiki batekin.

Eragiketa-prozesu osoa bost urratsetan banatzen da (lisia, lotzea, garbitzea, lehortzea eta eluzioa), eta prozesu osoa 30 ~ 60 minutuko epean osa daiteke gehienbat eragiketa zentrifugorik gabe.

Doako ale magnetikoek azido nukleikoarekin gehiago lotzen dute, lotura espezifikoak azido nukleikoen purutasuna handiagoa egiten du eta azido nukleikoen berreskurapenaren zenbatekoa egokitu daiteke ale magnetikoen gainazaleko taldeak kontrolatuz.

Azido nukleikoen erauzgailuaren erabilerak errendimendu handiko funtzionamendu automatikoa gauzatu dezake, hasiera gakoa, dozenaka edo ehunka lagin ateratzeaz konturatu zaitezke.

Erreaktiboak ez ditu fenol, kloroformo eta beste erreaktibo kimiko toxikorik, ingurumena babesteko kontzeptu modernoekin erabat betetzen duena.

Ale magnetikoen ezaugarri nagusia likidoan barreiatu daitezkeela da, eta, gainera, fase likidotik bereiz daitezke egoera solidoan aplikatutako eremu magnetikoaren eraginez. Edozein erreaktibo-sistematan, ale magnetikoen eta likidoaren arteko erlazioak atalase jakin bat izan behar du, proportzio jakin batetik haratago, ale magnetiko gehiegik dispertsio-ezaugarriak galduko dituzte, ezin direlako likidoan uniformeki sakabanatu, eta horrek garbiketa-prozesua ezingo du. guztiz areagotu azido nukleikoen ale magnetikoen eta kontaktu likidoen eraginkortasuna. Gehiegizko ale magnetikoek ezpurutasun gehiago xurgatuko dituzte, eta horrek eragin handia izango du desbridatzearen eragina. Badaude ale magnetiko gehiegiek sistema likidoan zeregin handia duten osagai funtzionalak xurgatuko dituztenean, hala nola proteasa eta lisozima, eta ondorioz kit osoaren eraginkortasunik eza da. Askotan, arazketa eraginkorra ez denean, erabilitako ale magnetikoen kopurua murriztea da arazte efektua hobetzeko modurik egokiena.

Normalean, ale magnetikoen metodoaren kitak emandako erreferentziazko aleen dosia apur bat gehiegizkoa da, beraz, ez dago kasu asko adsortzio-eraginkortasuna hobetzeko aleen dosia handitu behar den kasuetan, baina arazketa eskasa eragindakoa dela zehazten bada. aleen dosia nahikoa ez da, arazketa hobetu daiteke aleen dosia handituz tarte jakin batean.

Ale magnetikoen metodorako, bolumen likidoaren zati baten gehikuntza bakoitzak aleen talka gehiago izateko aukera murrizten du eta aleak talka egiteko aukera murrizteak adsortzio-tasa nabarmen murrizten du. Hori dela eta, kasu askotan, lisi-disoluzioa eta garbiketa-soluzioa handitzeak lisiaren hobekuntzan eta garbiketa hobetzen badu ere, ale magnetikoen metodoaren arazketaren muina ale magnetikoek azido nukleikoen xurgapenaren eraginkortasuna eta bermatzeko ezintasuna da. ale magnetikoen talkaren eraginkortasunak ezin du azido nukleikoaren arazketa eraginkorra bermatu, beraz, arazketa-efektua hobetzeko erabilitako erreaktiboen kopurua handitzea ez da zertan guztiz eraginkorra izan.

Garbiketa kopurua handitzea onuragarria da azido nukleikoen arazketarako, baina garbiketa bakoitzak azido nukleiko kopuru jakin bat galtzen duela eta azido nukleikoen haustura eta hidrolisi aukera areagotzen duela kontuan hartuta, orokorrean egokia da garbiketa kopurua 2ra kontrolatzea. ~4 aldiz.

Lagina nahikoa freskoa ez denean edo azido nukleikoaren edukia bera oso txikia denean, sarritan lagin gehiago hartzen dira azido nukleikoaren erauzketa bolumena handitzeko azido nukleikoaren erauzketa eraginkorra ez denean. Hala ere, laginaren laginketa-bolumena handitzeak batzuetan ezpurutasun gehiegi sar ditzake lisataren lisi-ahalmenetik haratago eta erauzketa-eraginkortasuna ere murrizten du; beraz, ez da gomendagarria erauzketa-bolumena handitzea laginaren laginketa-bolumena handituz besterik gabe. Erauzketa-bolumena baxuegia bada laginaren tamaina nahikoa ez delako, aberaste- edo kontzentrazio-urrats bat igarotzea gomendatzen da aurretratamenduan erauzketa hasi aurretik. Bestela, lisiaren osotasuna areagotzea, azido nukleiko gehiago agerian egon daitezen ere irtenbide bat da.

a. Erauzketa-printzipioa

b. Printzipio mekanikoa

c. Erauzketa-denbora

d. Laginaren errendimendua

e. Lagin-hodiaren edukiera

f. Punta-buruaren edukiera

g. Punta-buru kopurua

h. Interfazea

i. Instrumentuaren pisua

j. Instrumentuaren tamaina

Ia laborategi guztietan, oso garrantzitsua eta ezinbestekoa da biomolekularekin lotutako bereizketa eta arazketa lanak. Hala ere, oraindik nahiko zaila da lagin anitz arazteko, eta horrek arazketa-teknika egokiak hautatzeaz gain, lan-karga aparteko altua ere eskatzen du, eta horrek zaildu egiten du errendimendu handiko laginak erauzteko eta arazteko gaur egungo eskariari erantzutea.

The azido nukleikoak arazteko sistema automatizatua aproposa da genomika ikerketarako. Laginak mikrobio, animalia, landare edo biral iturrietatik atera daitezke. Odol osoko DNA genomikoaren erauzketa-kitak, leukozito-geruzako odol osoko erauzketa-kitinak eta animalia-ehunak/zelulak DNA genomikoaren erauzketa-kitak erabil daitezke DNA edo RNA kantitate eta garbitasun nahikoan azkar arazteko.

The azido nukleikoak arazteko sistema automatizatua A gripearen H1N1 azpimota birusaren, haurtzaroko esku, oinetako eta ahoko gaixotasunen eta elgorriaren birusen epidemia automatizatuen zaintzarako sistema azkarrak aurre egiteko erabil daiteke, epidemia handietarako erantzun gaitasunak hobetzeko.

The azido nukleikoak arazteko sistema automatizatua lagin klinikoak azkar eta errendimendu handiarekin prozesatu ditzake, eta ateratako azido nukleikoak ondorengo diagnostiko molekularra egiteko erabil daitezke.

The azido nukleikoak arazteko sistema automatizatua hegazti-gripearen birusa, Newcastle gaixotasunaren birusa, txerri-sukar klasikoaren birusa (CSFV), behien beherako birusa birusa, rickettsiae, etab. eraginkortasun eta sentikortasun handiz atera ditzake. beherako birusa), rickettsiae (Coxiella burnetii), etab.

Azido nukleikoaren erauzketaren eraginkortasuna eta egonkortasuna oso garrantzitsuak dira auzitegi-lanetarako. The azido nukleikoak arazteko sistema automatizatua Auzitegiko laginetatik azido nukleikoen erauzketarako ale magnetiko erreaktibo espezializatuekin batera egiten du lan, jatorri ezberdinetako materialetatik kalitate handiko DNA arazteko, besteak beste, zigarro-muturrak, ile-sustraiak, kartilagoak, azazkalak, odol arrastoak, etab.

Gurea interesatzen bazaizu azido nukleikoak arazteko sistema automatizatua edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.