Zer erabiltzen da presio altuko ponpa HPLCn?
Errendimendu handiko kromatografia likidoa (HPLC) Oro har, infusio-sistema (ponpa), injekzio-sistema, bereizketa-sistema (zutabea), detekzio-sistema eta datuak prozesatzeko sistemaz osatuta dago. Ponpa bat HPLC tresnaren funtzionamendu normala bermatzeko ekipo garrantzitsuena da. Bereizketa-kopurua infusio-sistemak fluxu-abiadura zehatza eta egonkorra lortzeko duen gaitasunaren mende dago. Fluxu-tasa zehatzak atxikipen-denbora zehatzak esan nahi ditu. Fase mugikorraren fluxu eta konposizio erreproduzigarririk gabe, ezin dira emaitza kuantitatiboak eman. HPLCn erabiltzen diren zutabeak oso meheak dira (1-6 mm) eta erabilitako fase geldikorraren tamaina ere oso txikia da (μm gutxi batzuetatik hamarnaka μm), beraz, fase mugikorrak zutabearen fluxuarekiko erresistentzia handia du. . Presio atmosferikoan, fase mugikorreko emaria oso motela da, eta zutabearen eraginkortasuna baxua eta denbora eskatzen du. Bereizketa azkarra eta eraginkorra lortzeko, fase mugikorrari presio handia egin behar zaio zutabean bere emaria bizkortzeko. Horretarako, presio handiko ponpa bat erabili behar da presio handiko infusiorako. HPLCn erabiltzen den presio handiko ponpa fase mugikorrari presio handia aplikatzea da, zutabean bere fluxua bizkortzeko. Presio handia eta abiadura handia dira HPLCren ezaugarrietako bat.
HPLCn erabiltzen diren presio altuko ponpak baldintza hauek bete behar ditu.
a. Emari konstantea, pultsaziorik gabe eta doikuntza-tarte zabala (orokorrean 1~10 mL/min).
b. Disolbatzaileen korrosioarekiko erresistentea.
c. Infusio-presio altua izatea.
d. Banaketa orokorrerako, 60×10^5Pa-ko presioa nahikoa da, eta eraginkortasun handiko banantzerako, berriz, 150~300×10^5Pa-ko presioa behar da.
HPLCn erabiltzen den presio altuko ponparen funtzionamendu-printzipioa
The HPLCn erabiltzen den presio handiko ponpa tresnaren osagai nagusietako bat da eta printzipioaren arabera bi motatan banatzen da. Bata da fluxu etengabeko ponpa, eta bestea presio konstanteko ponpa bat da.
Zutabearen erresistentzia nola aldatzen den kontuan hartu gabe, kanpoko eraginak gorabehera, fluxu konstanteko ponparen irteerako fase mugikorreko emaria funtsean aldatu gabe mantendu daiteke, eta horixe da, hain zuzen ere, ponparen funtzionamendurako oinarrizko baldintza. HPLC sistema.
Presio konstanteko ponparen irteera presio konstantea da funtsean. Baldintza normaletan HPLC sistemaren erresistentzia ez da aldatzen, beraz, presio konstanteak fluxu konstantea lor dezake. Hala ere, zutabea eta tenperatura alda daitezkeenez, emari-abiadura aldatzea eragin dezake.
HPLCn erabiltzen den presio altuko ponpa mota
| HPLCn erabiltzen den ponpa | Deskribapena |
|---|---|
| Etengabeko ponpa | Aldizkako ponpek etengabe disolbatzaile bolumen jakin bat eman dezakete disolbatzailea agortu arte, beraz, xiringa-ponpa gisa ere ezagutzen dira. Ponpa mota hau zehaztasun handiko emari-tasa mantendu behar denean erabili ohi da. Aldizkako ponpen artean xiringa-ponpak eta abiarazteko ordezko ponpak daude. |
| Etengabeko ponpa | Etengabeko ponpak erabiltzen dira gehien eta etengabe disolbatzaileak eman ditzakete. Pistoi-ponpa alkartekoak eta diafragma-ponpa hidraulikoak ponpa mota honetakoak dira. |
| Plunger bikoitzeko ponpa paraleloa | Bi enbalagailu paraleloko ponpa batek fase mugikorra etengabe elikatzen du zutabean. Ponpak 180 graduko bi plotsekin funtzionatzen du, eta bi plotsoien elkarreraginaren ondorioz sortutako pultsazioek pultsazio osoa murrizten dute. Pistoia bat fase mugikorra zutabean elikatzeko lanean ari den bitartean, bestea fase mugikorra ponpa-ganbara sartu eta betetzeko lanean ari da. |
| Pistoia bikoitzeko tandem ponpa | Pistoia bikoitzeko tandem ponpa batek 2:1 disolbatzailea du lehen eta bigarren mailako ponparen barrunbeetan. Bigarren mailako ponpak fase mugikorra zutabean elikatzen duenean, ponpa nagusiak likidoa xurgatzen du ponpa primarioaren barrunbea betetzeko. Bigarren mailako ponparen barrunbea husten denean, ponpa nagusiak bigarren mailako ponparen barrunbea betetzeko likidoa infusatzen ez ezik, fase mugikorra zutabean elikatzen du. |
| Pistoi-ponpa/diafragma-ponpa bikoikorra | Pistoi-ponpa/diafragma-ponpa alternatiboak erabileran zehar enboloa fase mugikor kaltegarriarekin kontaktuan ez mantentzearen abantaila du eta enboiaren lubrifikazio hobea du. Altzairu herdoilgaitzezko mintz xaflatzearen alde batek olioa gordetzen du, bestea fase mugikorrarekin kontaktuan dagoen bitartean. Alboko plostak olioa diafragmaren aurka gidatzen duenean, fase mugikorra zutabean sartzen da. Pistoia atzera egiten denean, presioa desagertzen da eta fase mugikorra diafragmaren mendebaldeko ponpa-ganberara sartzen da. Pistoi-ponpa aldakor batean bola-balbula bat dago. Bola-balbula edo kontrol-balbula bat erabiltzearen helburua fase mugikorra noranzko batean isurtzen dela ziurtatzea da. Bola-balbularen osagaiak zafirozko junta bat, errubizko bola bat eta tentsioa ematen duen malgukia dira. Pistoia fase mugikorreko biltegitik disolbatzailea ateratzeko mugitzen den heinean, sarrerako errubi bola malgukiak gora bultzatzen du, eta horrek disolbatzaileak disolbatzaile-ganbera betetzeko aukera ematen du. Irteeran dagoen errubi-bola junturaren kontra eusten da, eta horrek aldez aurretik zutabean sartutako disolbatzailearen atzera-fluxua eragozten du. Pistoia aurrera egiten duen heinean, fase mugikorrak errubi-bola bultzatzen du juntaren irteeran. Aldi berean, fase mugikorrak sarreran dagoen errubi-bola junturaren aurka bultzatzen du, fase mugikorra biltegira itzuli ez dadin. |
Ponparen enboloa zafiro sintetikoz egina izan ohi da, eta aldian-aldian egiaztatu behar da marradurarik dagoen. Atxikipen-denbora eta gailur-eremuaren erreproduzigarritasuna mantentzeko, aldian-aldian ordeztu behar da ploter-zigilua.
Infusio sistema gehienak (HPLCn erabiltzen diren presio altuko ponpak) lerroan hornituta daude iragazi edo iragazki-tapoia injektorearen aurretik. Iragazki edo bahe honek ponparen zigiluaren higadurak sortutako partikulak kontuan hartzen ditu, eta horrek partikulek injekzio-balbula edo beste osagai batzuk kaltetzea eragozten du. Aldizka ordezkatu behar da.
Motelgailuaren helburua ponparen funtzionamenduak eragindako presio-pultsioa murriztea da. Motelgailuak fase mugikorra likido konprimigarritik bereizten duen diafragmaz osatuta dago eta ponpa ganber primarioaren eta sekundarioaren artean kokatuta dago, pisaketa bikoitzeko konpentsatutako ponpa batean.
HPLCn erabiltzen den presio altuko ponparen ezaugarria
HPLC ponparen presioaren ezaugarriak
A. Presio handiko erresistentzia
Presio handiko erresistentzia HPLC sistemaren oinarrizko eskakizunetako bat da presio handiko ponpak. Orokorrean, infusio-ponparen gehienezko lan-presioa 34.47-41.36Mpa (5000-6000psi) da, fase mugikorreko emaria 1-3 ml/min denean, 4µm inguruko batez besteko partikulen tamaina eta 5mm inguruko barne-diametroa duen zutabe bat erabiliz. .
B. Egonkortasun ona eta pultsazio txikia
Infusioaren egonkortasuna eta pultsazio-tamaina presio handiko ponpa zuzenean eragingo du HPLC sistemaren egonkortasunean (noraeza eta errepikakortasuna), sistemaren zaratari eragingo dio eta sentsibilitatea murriztuko du. Egonkortasuna eta pultsazio txikia mantentzea garrantzitsuagoa da detektagailu elektrokimikoak eta diferentzialak bezalako detektagailuak erabiltzen dituzten HPLC sistemetarako edo gradienteen bereizketarako. Hori dela eta, korronte askoren presio-pultsioa presio handiko ponpak %1aren barruan kontrola daiteke.
C. Jarraian erregulagarria den emari-tasa eta emari-tarte zabala
Gaur egun, emari-tartea HPLC presio handiko ponpa 0.001-10.0 ml/min-ra irits daiteke, eta kromatografia prestatzailearen emaria are handiagoa da, batzuetan milaka ml/min behar ditu, eta horrek aldi berean barne-diametro desberdinak dituzten hainbat zutaberen lan analitikoen eskakizunak bete ditzake.
D. Emari-tasaren errepikakortasun ona
HPLCn erabiltzen den presio altuko ponparen fluxuaren errepikakortasuna % 0.07ra irits daiteke (RSD), baina errepikakortasuna proba metodoarekin lotuta dago.
a. Pisuaren metodoa
Ponparen denbora-unitateko irteera-fluidoa bildu eta zuzenean balantzan pisatzen da errepikagarritasuna epaitzeko.
b. Atxikipen-denboraren metodoa
Emariaren errepikakortasuna atxikipen-denboraren iraupenaren arabera epaitzen da.
HPLCren lan analitikoan, bere analisi kualitatiboa, oro har, atxikipen denboran oinarritzen da. Errepikagarritasuna presio handiko ponpa (RSD) adierazle garrantzitsuenetako bat da, HPLC sistema osoaren errepikakortasunari eragiten dion errendimendu adierazle oso garrantzitsua ere bada.
E. Bolumen hil txikia
Bolumen hila presio handiko ponpa HPLCren zehaztasun analitikoan eta zehaztasunean eragiten du, batez ere gradientearen eluzioaren eragina. Presio handiko ponparen bolumen hil txiki batek disolbatzaileak azkar ordezkatzeko eta sistematik aire-burbuilak garaiz deskargatzeko lagungarria da. Beraz, hildako bolumena zenbat eta txikiagoa izan, orduan eta hobeto.
F. Emari-tasa handiko zehaztasuna
HPLC presio handiko ponpa emari-abiaduraren zehaztasuna garrantzitsua da, proba analitikoen datuen errepikakortasunari zuzenean eragiten diolako (fidagarritasuna). Egungo etxeko eta atzerriko HPLC ponparen fluxuaren errepikakortasuna, oro har, % 1 ingurukoa da (proba metodoarekin lotuta), onena % 0.06ra irits daiteke.
G. Gradiente eluzio funtzioarekin
Eluzio isokratikoa erabiliz konpondu ezin den analisi-lanaren kasuan, arazoa ondo konpondu daiteke gradiente-eluzio-metodoa erabiliz. Beraz, HPLCren erabiltzaileek askotan tresnaren presio handiko ponpak emari-tasa programa bat eta gradiente-eluzio programa bat izan behar ditu.