Aminoazidoen analisia
Zer da aminoazidoen analizatzailea?
Proteinen, peptidoen eta bestelako farmazia-prestakinen aminoazidoen konposizioa edo edukia zehazteko erabiltzen den tresna deritzo. aminoazidoen analizatzailea.
Aminoazidoen analizatzailea erabilerak katioien truke kromatografia ninhidrina erabiliz bereizketa eta zutabe osteko deribatizazioa proteina hidrolizatuaren eta hainbat aminoazido osagai askeen edukia aztertzeko. Tresnaren oinarrizko egitura HPLC arruntaren antzekoa da, baina aminoazidoen analisi zehatzetarako optimizatuta dago, hala nola nitrogeno babesa, hodi geldoak, lineako desgasifikazioa, eluzio gradientea eta zutabearen tenperatura gradientearen kontrola.
Aminoazido analizatzailearen funtzionamendu-printzipioa
Aminoazidoen osagaien egitura, azidotasuna, polaritatea eta tamaina molekularra duten desberdintasunak direla eta, katioi-trukearen zutabetik bereiz daitezke. The aminoazidoen osagaiak pH ioi-kontzentrazio ezberdineko bufferak erabiliz sekuentzialki eluatu daiteke, eta, ondoren, banan-banan nahastu daiteke ninhidrina erreaktiboko beste korronte batekin, eta ondoren elkarrekin isurtzen dira erreakzio espiral-hodira. Kolorearen garapen erreakzioa tenperatura jakin batean egiten da, normalean 115 eta 120 gradu Celsius artean, eta ondorioz 570 nm-tan xurgapen maximoa duen produktu urdin-morea sortzen da. Hidroxiprolinak ninhidrinarekin erreakzionatzen du 440 nm-tan xurgapen handiena duen produktu horia sortzeko.
Aminoazidoen analizatzaileak normalean bi sistematan banatuta daude, proteina-hidrolisiaren analisi-sistema (sodio-gatzaren sistema) eta aminoazido askearen analisi-sistema (litio-gatzaren sistema). Horien artean, aminoazido askeak aztertzeko sistemak sodio edo litio zitratoarekin gradiente eluzioa erabiltzen du kontzentrazio eta pH balio desberdinetan.
Sodio-gatzaren sistemak aldi berean 25 aminoazido inguru aztertzen ditu, azkarragoa eta oinarrizko zuzentasun hobea duena. Litio gatz sistemak 50 aminoazido inguru aztertzen ditu aldi berean, eta bere abiadura motelagoa da eta oinarri-lerroa, oro har, ez da sodio gatz sistemarena bezain ona.
Aminoazidoen analizatzailearen sailkapena
Ohiko aminoazidoen analisia 20 proteina hidrolizatutako aminoazidoren eta 40 aminoazido aske baino gehiagoren analisiari egiten dio erreferentzia. 1958an sortu zenetik, aminoazidoen analizatzailea etengabe eguneratu da hardware eta software modernoarekin eta gaur egun ohiko proba automatikoko ekipamendu bihurtu da elikagaien, pentsuen, bioteknologiaren, medikuntzaren eta osasunaren eta bizitzaren zientzien industrietan aminoazidoen analisirako ezinbestekoak.
Aminoazidoen analizatzaileak bi motatan banatu daitezke bereizketa eta detekzio metodoen arabera.
Lehenengo mota katioien truke-zutabearen bereizketan eta zutabe osteko ninhidrina deribatuen fotometria-determinazioan oinarritutako metodo klasikoa da — ioien truke-zutabearen kromatografia (IEC). Metodo mota honek Nobel saria jaso zuen 1972an eta gaur egun nazioarteko eta estatuko estandarra da, baita arbitraje- eta atzerriko metodoa ere.
Bigarren kategoria errendimendu handiko kromatografia likidoaren (HPLC) metodo guztiak dira, alderantzizko faseko bereizketa kromatografikoan, zutabeen aurreko deribazioan, fluoreszentzian edo UV detekzioan eta anioi-trukearen bereizketaren detekzio amperometriko zuzena duten kromatografia ioikoen (IC) metodoak.
Aminoazidoen analisi-metodoen ezaugarrien alderaketa
| IEC | HPLC | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| Printzipioa | Katioi-trukearen bereizketa, zutabearen osteko ninhidrina derivatizazioaren determinazio fotometrikoa | Errendimendu handiko kromatografia likidoa, zutabeen aurreko deribazioa, metodo fotometrikoa zehaztea | |||
| Erreaktibo deribatua | Ninhidrina | PITC | OPA | FMOC | AQC |
| Substratuaren interferentzia | / | BAI | BAI | BAI | BAI |
| Gehiegizko erreaktiboa | Interferentziarik eza | Kendu beharra | Interferentziarik eza | Kendu beharra | Interferentziarik eza |
| Detector | Argi ikusgai | UV | Fluoreszenteak | Fluoreszenteak | Fluoreszenteak |
| Detekzioaren muga | 3p eta 50p mol | 50p mol | 1-5p mol | 1p mol | 3p mol |
| Abantaila | Metodoa heldua eta fidagarria da, HPLC metodoa baino egonkortasun, erreproduzigarritasun eta linealtasun hobearen abantailekin, matrizearen interferentziarik gabe, zutabe-bizitza luzea eta 43 aminoazido aldi berean aztertzeko gaitasunarekin. | Tresna multifuntzionala da eta aminoazido batzuen aurrean sentsibilitate handia du, analisi denbora laburrean. | |||
| desabantaila | Makina osorako errendimendu handiko eskakizunak, kontzentrazio- eta tenperatura-gradiente bikoitzak eskatzen dituena Kontrol programatua. Instrumentuen espezializazioa. | Derivatizazio-erreakzioen eta produktuen egonkortasuna sarritan nahasten da matrizeak eta gehiegizko erreaktiboek. Metodoaren egonkortasuna, erreproduzigarritasuna, linealtasuna eta fidagarritasuna ez dira ninhidrina metodoarenak bezain onak. Zutabe-bizitza laburra. Derivatizazio erreaktiboak, oro har, garestiak dira eta metodoa teknikoki zorrotza da. | |||
Orokorrean, IEC HPLC baino handiagoa da, eta IEC tresna a da aminoazidoen analizatzaile automatizatu dedikatua.
Aminoazidoen analizagailuaren aplikazioa
Aminoazidoen analizatzaile automatikoa
A. Aplikazioak industria farmazeutikoan
Fisiologia zelularra ikertzeko zelula bizitzaren jardueraren oinarrizko unitatea da. Proteina mota askoz osatuta dago, eta proteinen edukia eta konposizioa eta edukia aminoazidoak horietan aldatzen dira baldintza fisiologiko ezberdinekin. Horregatik, zelulen fisiologiaren azterketan, beharrezkoa da zelularen proteina aminoazidoak aminoazido analizatzaile batekin aztertzea.
Biokimika laborategian, aminoazidoen analisia proteinen osaera eta egitura eta entzimen ekintzaren mekanismoa aztertzeko behar da.
B. Nekazaritzako aplikazioak
Labore-barietate onak lantzean, errendimendu handia eta lurzoruari, hezetasunari, klimari eta abarrekiko moldagarritasuna kontuan hartu behar dira. Garrantzitsua da ere proteina edukia hobetzeari arreta jartzea. aminoazidoak hazietan.
Elikatzeko aminoazidoak gehitzeak ekoizpena bizkortu dezake, beraz, erabilera aminoazidoen analizatzaileak aminoazidoen edukia zehazteko formula doitzen edo pentsu gehigarriak gehitzen lagun dezake.
Pestizidek ingurumena kutsatzen dutenez, kutsatzen ez duten pestiziden garapenak arreta handia jaso du. Azken urteotan, erabilera aminoazidoak pestiziden ikerketarako lehengaiek aurrerapen handia egin baitute, eta gaur egun glizinaz egindako herbizidak daude. Aminoazidoen lehengaiak garatzeko pestiziden garapenean, erabilera aminoazidoen analizatzaileak asko egiten laguntzen du aminoazidoen analisiak.
C. Aplikazioak elikagaien industrian
Elikagaien prozesamendua hobetzeko eta produktu berriak garatzeko orduan, garatzaileek elikagaien nutrizio-balioa eta zaporetsua kontuan hartu behar dituzte. Eta janariaren goxotasunari lotuta dago aminoazidoak, hala nola azido glutamikoa eta azido metilikoa azidoak dira, bere sodio gatza garratza da, eta glizina eta alanina gozoak dira. Elikagaien nutrizio-balioa proteinek eta aminoazidoek zehazten dute batez ere, eta, beraz, garrantzitsua da elikagaien prozesatzeko aminoazidoen edukia neurtzea.
Prozesuaren hobekuntzan, aminoazidoen analisia prozesuaren hobekuntza aurretik eta ondoren alderatu behar da prozesu berria bideragarria den zehazteko. Produktu berrien probako ekoizpenean, aminoazidoen analizatzaileak produktu berriaren aminoazido kopurua zehazteko ere beharrezkoak dira bere nutrizio-balioa eta zapore ona zehazteko. Gainera, elikagaiak gotortzeak elikagaiari aminoazidoak gehitzea ere eskatzen du, beraz, aminoazidoen analisia ere egin behar da.
D. Aplikazioak larruaren industrian
Larruaren leuntasuna eta iraunkortasuna daukan hidroxiprolina kantitatearekin lotuta daude, beraz aminoazidoen analizatzaileak ontze-prozesuaren ikerketan beharrezkoak dira hidroxiprolina eta beste aminoazidoen kopurua zehazteko.
E. Aplikazioak petrolio-esplorazioaren arloan
Petrolio-arroketako aminoazidoen edukia petrolio-biltegien aberastasuna zehazteko datu garrantzitsuetako bat da, beraz. aminoazidoen analizatzaileak petrolio-arroken aminoazidoen edukia zehazteko erabili ohi dira petrolioaren garapenaren ikerketan.
Aminoazidoen analizagailuaren erabilerak
Aminoazidoen analizatzailea slideshare
A. Laginaren tratamendua
Laginetako aminoazido askeen hainbat eduki zehazteko, gantz-ezpurutasunak kendu eta zuzenean zutabean azter daitezke.
-ren zehaztapenerako aminoazidoen konposizioa proteinen, lagina azidoz hidrolizatu behar da, proteina guztiz aminoazido bihur dadin zutabean aztertu aurretik.
B. Laginaren analisia
Tratatutako laginak zutabean kargatzen dira aztertzeko. Zutabean kargatu beharreko lagin-kopurua erabilitako autoanalizadorearen sentsibilitatearen arabera zehazten da. Oro har, aminoazido bakoitzaren 0.1 μ mol ingurukoa da, eta hidrolizatutako laginaren pisu lehorra 0.3 mg ingurukoa da. Determinazioa pH 5-5.5, 100 °C-tan egin behar da, eta erreakzio-denbora 10-15 minutukoa da.
Lortutako material morea kolorimetrikoki neurtzen da 570 nm-tan. Sortzen den konposatu horia kolorimetrikoki neurtzen da 440 nm-tan. Ordubete inguru besterik ez da behar osoa egiteko aminoazidoen analisia. Dozenaka lagin kargatu daitezke tresnan aldi berean eta automatikoki sekuentzian aztertu, eta emandako datuak automatikoki kalkulatzen dira amaieran. Instrumentuaren gradua % 1 eta 3 artekoa da. Aminoazidoen bereizketa eta determinazioa katioi-trukearen zutabearen bidez.
neurri
a. Tresnak 15 minutuko prestaketa prozedura du piztu ondoren. Fase hau, batez ere, tresnak osagai bakoitzaren funtzionamendu egoera eta parametroak automatikoki ezartzeko, lan-estazioko eta osagai bakoitzaren komunikazio egoera probatzeko eta tenperatura eta presioa ezartzeko da, beraz, ez eten prozesu hau artifizialki.
b. Aminoazido proteolitikoak eta fluido fisiologikoetako aminoazidoak (20 eta 43) etengabe azter daitezke laginketa automatikoa, tresnak automatikoki ezagutzen eta grabatzen duena, erabiltzaileak beste eragiketarik egin gabe.
c. Lagin multzo bat aztertu ondoren, tresnak automatikoki programazio bat abiaraziko du sistema mantentzeko, beraz, mesedez, ez amaitu programa hau artifizialki.
d. Ziklo programa lehenetsia automatikoki gaitzen da itxarote moduan tresna mantentzeko. Ziklo programaren erreaktibo kontsumoa oso txikia da (1 ml/ordu), beraz, erabiltzaileak ez luke ezarpen hau aldatu behar.
e. Tresnak 0.4 bar-eko nitrogeno-presioarekin funtzionatzen du; nitrogeno-presioa altuegia bada, tresna kaltetu egingo da.
f. Egiaztatu eluentearen eta deribatu erreaktiboaren fluxu-bidearen presioa aminoazidoen analizatzaile automatikoa normala da.
g. Tresnaren mantentze-lan hobea lortzeko, garbiketa-prozedura bat edo bi gehitzea edo sistema eskuz garbitzea gomendatzen da lagin-sorta bakoitzaren ondoren programa ostekoa baino lehen.
h. Tresna aldi baterako alde batera uzten bada, gomendagarria da zutabea kentzea eta tresnaren hodia emari handiarekin garbitzea, eta hodia % 40ko isopropil alkoholarekin betetzea.
i. Injekzio-kontzentrazio-tartea 0.4-4 nmol da. Makinaren sentikortasun handia dela eta, injekzio-kontzentrazioa altuegia bada, analisi-emaitzetan eragina izango du eta erreaktorea erraz buxatuko da.
Nola erosi aminoazidoen analizatzailea?
Gurea interesatzen bazaizu Aminoazidoen analisia edo zalantzaren bat baduzu, idatzi e-mail bat info@antiteck.com helbidera, ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.