Aminoazidoen analisia

Proteinen, peptidoen eta bestelako farmazia-prestakinen aminoazidoen konposizioa edo edukia zehazteko erabiltzen den tresna deritzo. aminoazidoen analizatzailea.

Aminoazidoen analizatzailea katioi-trukearen kromatografiaren bereizketa eta zutabearen osteko deribatua erabiltzen ditu ninhidrinarekin proteina hidrolizatuaren eta aminoazido askeen hainbat osagairen edukia aztertzeko. Tresnaren oinarrizko egitura HPLC arruntaren antzekoa da, baina zehatz-mehatz aminoazidoen analisirako optimizatuta dago, hala nola nitrogenoaren babesa, hodi inerteak, lineako desgasifikazioa, eluzio-gradientea eta zutabeen tenperatura-gradientearen kontrola.

Aminoazidoen osagaien egitura, azidotasuna, polaritatea eta tamaina molekularra duten desberdintasunak direla eta, katioi-trukearen zutabetik bereiz daitezke. The aminoazidoen osagaiak pH ioi-kontzentrazio ezberdineko bufferak erabiliz sekuentzialki eluatu daiteke, eta, ondoren, banan-banan nahastu daiteke ninhidrina erreaktiboko beste korronte batekin, eta ondoren elkarrekin isurtzen dira erreakzio espiral-hodira. Kolorearen garapen erreakzioa tenperatura jakin batean egiten da, normalean 115 eta 120 gradu Celsius artean, eta ondorioz 570 nm-tan xurgapen maximoa duen produktu urdin-morea sortzen da. Hidroxiprolinak ninhidrinarekin erreakzionatzen du 440 nm-tan xurgapen handiena duen produktu horia sortzeko.

Aminoazidoen analizatzaileak normalean bi sistematan banatuta daude, proteina-hidrolisiaren analisi-sistema (sodio-gatzaren sistema) eta aminoazido askearen analisi-sistema (litio-gatzaren sistema). Horien artean, aminoazido askeak aztertzeko sistemak sodio edo litio zitratoarekin gradiente eluzioa erabiltzen du kontzentrazio eta pH balio desberdinetan.

Sodio-gatzaren sistemak aldi berean 25 aminoazido inguru aztertzen ditu, azkarragoa eta oinarrizko zuzentasun hobea duena. Litio gatz sistemak 50 aminoazido inguru aztertzen ditu aldi berean, eta bere abiadura motelagoa da eta oinarri-lerroa, oro har, ez da sodio gatz sistemarena bezain ona.

Ohiko aminoazidoen analisia 20 proteina hidrolizatutako aminoazidoren eta 40 aminoazido aske baino gehiagoren analisiari egiten dio erreferentzia. 1958an sortu zenetik, aminoazidoen analizatzailea etengabe eguneratu da hardware eta software modernoarekin eta gaur egun ohiko proba automatikoko ekipamendu bihurtu da elikagaien, pentsuen, bioteknologiaren, medikuntzaren eta osasunaren eta bizitzaren zientzien industrietan aminoazidoen analisirako ezinbestekoak.

Aminoazidoen analizatzaileak bi motatan banatu daitezke bereizketa eta detekzio metodoen arabera.

Lehenengo mota katioi-trukerako zutabeen bereizketan eta zutabe osteko ninhidrina deribatuaren determinazio fotometrikoan oinarritutako metodo klasikoa da -- ioi-truke zutabeen kromatografia (IEC). Metodo mota hau 1972an Nobel Saria eman zioten eta nazioarteko eta nazioko estandarra da, baita arbitrajea eta atzerriko metodoa gaur egun ere.

Bigarren kategoria errendimendu handiko kromatografia likidoaren (HPLC) metodo guztiak dira, alderantzizko faseko bereizketa kromatografikoan, zutabeen aurreko deribazioan, fluoreszentzian edo UV detekzioan eta anioi-trukearen bereizketaren detekzio amperometriko zuzena duten kromatografia ioikoen (IC) metodoak.

Orokorrean, IEC HPLC baino handiagoa da, eta IEC tresna a da aminoazidoen analizatzaile automatizatu dedikatua.

Fisiologia zelularra ikertzeko zelula bizitzaren jardueraren oinarrizko unitatea da. Proteina mota askoz osatuta dago, eta proteinen edukia eta konposizioa eta edukia aminoazidoak horietan aldatzen dira baldintza fisiologiko ezberdinekin. Horregatik, zelulen fisiologiaren azterketan, beharrezkoa da zelularen proteina aminoazidoak aminoazido analizatzaile batekin aztertzea.

Biokimika laborategian, aminoazidoen analisia proteinen osaera eta egitura eta entzimen ekintzaren mekanismoa aztertzeko behar da.

Labore-barietate onak lantzean, errendimendu handia eta lurzoruari, hezetasunari, klimari eta abarrekiko moldagarritasuna kontuan hartu behar dira. Garrantzitsua da ere proteina edukia hobetzeari arreta jartzea. aminoazidoak hazietan.

Elikatzeko aminoazidoak gehitzeak ekoizpena bizkortu dezake, beraz, erabilera aminoazidoen analizatzaileak aminoazidoen edukia zehazteko formula doitzen edo pentsu gehigarriak gehitzen lagun dezake.

Pestizidek ingurumena kutsatzen dutenez, kutsatzen ez duten pestiziden garapenak arreta handia jaso du. Azken urteotan, erabilera aminoazidoak pestiziden ikerketarako lehengaiek aurrerapen handia egin baitute, eta gaur egun glizinaz egindako herbizidak daude. Aminoazidoen lehengaiak garatzeko pestiziden garapenean, erabilera aminoazidoen analizatzaileak asko egiten laguntzen du aminoazidoen analisiak.

Elikagaien prozesamendua hobetzeko eta produktu berriak garatzeko orduan, garatzaileek elikagaien nutrizio-balioa eta zaporetsua kontuan hartu behar dituzte. Eta janariaren goxotasunari lotuta dago aminoazidoak, hala nola azido glutamikoa eta azido metilikoa azidoak dira, bere sodio gatza garratza da, eta glizina eta alanina gozoak dira. Elikagaien nutrizio-balioa proteinek eta aminoazidoek zehazten dute batez ere, eta, beraz, garrantzitsua da elikagaien prozesatzeko aminoazidoen edukia neurtzea.

Prozesuaren hobekuntzan, aminoazidoen analisia prozesuaren hobekuntza aurretik eta ondoren alderatu behar da prozesu berria bideragarria den zehazteko. Produktu berrien probako ekoizpenean, aminoazidoen analizatzaileak produktu berriaren aminoazido kopurua zehazteko ere beharrezkoak dira bere nutrizio-balioa eta zapore ona zehazteko. Gainera, elikagaiak gotortzeak elikagaiari aminoazidoak gehitzea ere eskatzen du, beraz, aminoazidoen analisia ere egin behar da.

Larruaren leuntasuna eta iraunkortasuna daukan hidroxiprolina kantitatearekin lotuta daude, beraz aminoazidoen analizatzaileak ontze-prozesuaren ikerketan beharrezkoak dira hidroxiprolina eta beste aminoazidoen kopurua zehazteko.

Petrolio-arroketako aminoazidoen edukia petrolio-biltegien aberastasuna zehazteko datu garrantzitsuetako bat da, beraz. aminoazidoen analizatzaileak petrolio-arroken aminoazidoen edukia zehazteko erabili ohi dira petrolioaren garapenaren ikerketan.

Laginetako aminoazido askeen hainbat eduki zehazteko, gantz-ezpurutasunak kendu eta zuzenean zutabean azter daitezke.

-ren zehaztapenerako aminoazidoen konposizioa proteinen, lagina azidoz hidrolizatu behar da, proteina guztiz aminoazido bihur dadin zutabean aztertu aurretik.

Tratatutako laginak zutabean kargatzen dira aztertzeko. Zutabean kargatu beharreko lagin-kopurua erabilitako autoanalizadorearen sentsibilitatearen arabera zehazten da. Oro har, aminoazido bakoitzaren 0.1 μ mol ingurukoa da, eta hidrolizatutako laginaren pisu lehorra 0.3 mg ingurukoa da. Determinazioa pH 5-5.5, 100 °C-tan egin behar da, eta erreakzio-denbora 10-15 minutukoa da.

Lortutako material morea kolorimetrikoki neurtzen da 570 nm-tan. Sortzen den konposatu horia kolorimetrikoki neurtzen da 440 nm-tan. Ordubete inguru besterik ez da behar osoa egiteko aminoazidoen analisia. Dozenaka lagin kargatu daitezke tresnan aldi berean eta automatikoki sekuentzian aztertu, eta emandako datuak automatikoki kalkulatzen dira amaieran. Instrumentuaren gradua % 1 eta 3 artekoa da. Aminoazidoen bereizketa eta determinazioa katioi-trukearen zutabearen bidez.

a. Piztu ondoren tresnak 15 minutuko prestaketa prozedura du. Fase hau, batez ere, tresnak osagai bakoitzaren lan-egoera eta parametroak automatikoki ezartzeko, lan-estazioko komunikazio-egoera eta osagai bakoitzaren probatzeko eta tenperatura eta presioa ezartzeko, beraz, ez amaitu prozesu hau artifizialki.

b. Aminoazido proteolitikoak eta aminoazido fluido fisiologikoak (20 eta 43) etengabe azter daitezke laginketa automatikoan, eta tresnak automatikoki ezagutzen eta erregistratzen du erabiltzaileak inolako eragiketa gehigarririk gabe.

c. Lagin-multzo bat aztertu ondoren, tresnak automatikoki post-programa bat hasiko du sistema mantentzeko, beraz, mesedez ez amaitu programa hau artifizialki.

d. Ziklo-programa lehenetsia automatikoki gaituta egoteko moduan dago tresna mantentzeko. Ziklo-programaren erreaktiboen kontsumoa oso txikia da (1 ml/orduko), beraz, erabiltzaileak ez du ezarpen hori aldatu behar.

e. Tresnak 0.4 bar-ko nitrogeno-presioarekin funtzionatzen du; nitrogenoaren presioa altuegia bada, tresna kaltetu egingo da.

f. Egiaztatu eluentearen eta erreaktibo deribatuaren fluxu-ibilbidearen presioa aminoazidoen analizatzaile automatikoa normala da.

g. Tresnaren mantentze-lanak hobeto egiteko, lagin-lote bakoitzaren ondoren, lagin-lote bakoitzaren ondoren programaren ondorengo programaren aurretik garbiketa-prozedura bat edo bi gehitzea edo sistema eskuz garbitzea gomendatzen da.

h. Tresna aldi baterako albo batera uzten bada, zutabea kentzea eta tresna-hodiak fluxu-abiadura handian garbitzea gomendatzen da eta kanalizazioa % 40ko isopropil alkoholarekin betetzea.

i. Injekzioaren kontzentrazio-tartea 0.4-4 nmol da. Makinaren sentsibilitate handia dela eta, injekzio-kontzentrazioa altuegia bada, analisiaren emaitzei eragingo zaie eta erreaktorea erraz igurtziko da.

Gurea interesatzen bazaizu aminoazidoen analizatzailea edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.