Bira Zutabea

Edukia
1. Zer da spin zutabea?
2. Spin zutabearen ezaugarriak
3. Spin zutabearen aplikazioak
    3.1 Spin zutabeak DNA arazteko
    3.2 Spin-zutabeen proteina-araztea
4. Nola erosi spin zutabea?

katalogoa: Biratu Zutabeak

Spin zutabeak DNA/RNA erauzteko eta hainbat material fintzeko erabil daitezke. The bira-zutabea anioiak eta katioiak trukatzeko erretxina ditu. Ioi-trukearen erreakzioan, uretako katioiak (adibidez, Na+) erretxinara transferitzen dira, eta ioi-trukeko erretxinan dagoen H+ trukagarria uretara transferitzen da. Na+ uretatik erretxinara transferitzeko prozesua ioien ordezkapen prozesua da. Eta erretxinan H+ ura trukatzeko prozesuari askapen prozesua deitzen zaio. Horrela, ordezkapen eta askapen prozesuaren ondorioz, Na+ eta H+ lekuak trukatzen dira, eta aldaketa horri ioi-truke deitzen zaio. Era berean, erretxina negatiboak OH- desplazatzen du H2O ekoizteko. Erretxina-trukea truke-ahalmen handia, ur-fluxuaren erresistentzia baxua, erresistentzia mekaniko handia eta egonkortasun kimiko ona ditu. Aldi berean, erretxina-trukeak truke-erreakzio itzulgarria du, eta horrek birsortzea eta hainbat ioi-adsortzio aukeratzea errazten du gatza kentzeko eta arazteko helburua lortzeko.

Bira-zutabea funtzionamendu sinplea, berreskuratze tasa altua eta errendimendu egonkorra ditu. Gaur egun, spin zutabeak laborategi eta enpresa gehienetan ezagunak dira etxean eta atzerrian. Silice-mintzak azido nukleikoetarako material xurgatzaile espezifiko gisa erabiltzen dituzte, neurri handi batean, beste material biologiko batzuekin xurgatzen ez duten bitartean. Honek DNA\RNA laginaren gehienezko berreskurapena bermatzen du, beste ezpurutasun batzuk kentzen dituen bitartean.

Bilketa-hodiak medikuntza-mailako polipropilenoz eginak daude, 2 ml eta 50 ml-ko bolumenetan.

Zutabea maila medikoko polipropilenoz egina dago, sareko hondoarekin edo konektore batekin eta gutxi gorabehera 1ml edo 25ml-ko edukiera du.

Junta zuntz-material berezi bat da, azido eta base eta disolbatzaile organiko gehienekiko erresistentea dena eta biomolekula gehienetan xurgatzen ez dena.

Inportatutako lehengaiez egindako silikonazko edo beira-zuntz bereziki optimizatutako mintzek azido nukleikoen molekulak xurga ditzakete neurri handienean.

A. Biratu zutabeak DNA arazteko.

B. Spin zutabeak RNA arazteko.

C. Lotura-gaitasuna 45-50µg.

D. Zatiren tamaina 65bp eta 10kbp bitartekoa da.

E. Buffer formulazioak egokiak dira kantitate txikietan plasmidoak prestatzeko, gelen erauzketa eta PCR garbiketa egiteko.

F. The bira-zutabea beira-zuntzezko mintz ugariz beteta dago, hau da, azido nukleikoak azkar erauzteko beira-zuntzaren erauzketa metodoan oinarritutako teknika.

Biraketa-zutabea eta bilketa-hodia erabilera asko dituzte laborategian, adibidez:
a. RNA arazketa,
b. DNA plasmidoen erauzketa,
c. DNA genomikoaren erauzketa,
d. PCR anplifikazio produktuen arazketa azkarra,
e. Agarosa geletatik DNA kateak berreskuratzea,
f. Erreakzio-nahasteetatik DNA espezifikoa isolatzea,
g. PCR produktuen arazketa,
h. Kate bakarreko edo bikoitzeko DNA edo RNAaren purifikazioa ezpurutasunetan, hala nola gatza, disolbatzailea, entzima edo proteina.
i. Beste batzuk.

Etidio bromuroa DNAri lotzen zaio baseen artean txertatuz, eta, aldi berean, helize bikoitza askatzea eragiten du, DNA linealaren luzera handituz. Konpentsatzeko, begizta itxiko DNA plasmidoan unitate superhelikorrak sartzen dira. Unitate superhelikorrak nabarmen handitzen dira, eta horrela etidio bromuroaren molekula gehiago barneratzea eragozten dute. Molekula lineala, ordea, ez da mugatua eta etidio bromuro gehiago lotzen jarraitu dezake saturazioa lortu arte (gutxi gorabehera 1 etidio bromuro molekula 2 base-pare bakoitzeko). Etidio bromuro kantitate aseak dituzten zesio kloruro graduko DNA molekulen dentsitate flotagarria desberdina da loturiko koloratzaile kantitatearen desberdintasunengatik. Urte askotan, zesio kloruroa-etidio bromuroa gradientearen oreka zentrifugazioa izan da DNA plasmido kopuru handiak prestatzeko aukeratutako metodoa. Hala ere, prozesu hau garestia eta denbora asko behar da, eta horretarako metodo alternatibo asko garatu dira. Plasmidoaren DNA eta ostalariaren DNA bereiztea barne hartzen zuten ioi-truke kromatografia erabiliz, gel-iragazte-kromatografia, prezipitazio mailakatua, etab. Horien artean, Polietilenglikol mailakatuko prezipitazio metodoa da erabiliena.

PCR anplifikazioa amaitu ondoren, produktua agarosa gel elektroforesiaren bidez detektatu behar da. Beste banda ezpururik gabeko banda bakar baten kasuan, produktua zuzenean araz daiteke. Ohiko arazketa-metodoak silize gelaren kromatografia-zutabeen metodoa, ale magnetikoen metodoa eta beste arazte-metodo batzuk dira.

Zutabe zentrifugo gehienetan DNA xurgatzen duena spin zutabe zentrifugatzailea silize-mintza da, hau da, beira-zuntzen geruza bat. Bere gainazalean silizio-hidroxilo talde eraldatuen (Si-OH) kopuru handia dago. Silice-hidroxilo taldea disoluzioan disoziatu ondoren negatiboki kargatuta dago, eta, ondoren, zubi elektriko bat osatzen du positiboki kargatutako gatz-ioiekin eta negatiboki kargatutako DNArekin, hau da, DNA xurgatzen duena, DNA kate bikoitzeko kate bakarrekoa bihurtuz eta disolbatzaile biomolekularrek ez dute elutzen. Hala ere, ur-disolbagarrien buffer bidez hidratatu daiteke eta, ondoren, kuantitatiboki berreskuratu, horrela arazketa eta bereizketa lortuz.

PCR anplifikazioa amaitu ondoren, DNA zatiak izan ezik, ioiak, dNTP, abiarazleak eta polimerasa ere badaude erreakzio-sisteman, eta horrek ondorengo klonazio eta sekuentziazio esperimentuetan eragingo du, beraz, produktuen arazketa ezinbesteko urratsa da.

Proteinen isolamendua eta arazketa asko erabiltzen dira ikerketa biokimikoko aplikazioetan. Zelula eukarioto tipiko batek milaka proteina ezberdin izan ditzake, batzuk oso ugariak eta beste batzuk kopia gutxikoak. Proteina jakin bat aztertzeko, lehenik eta behin proteina hori beste proteina eta proteina ez diren molekula batzuetatik araztu behar da. -ren helburua proteinen arazketa Helburuko proteina lisatuaren osagai guztietatik bereiztea da, proteinaren jarduera biologikoa eta osotasun kimikoa mantenduz. Proteinen bereizketa eta arazketa lan zaila eta zorrotza da, eta arazteko metodo egokia aukeratu behar duzu lortutako proteina produktuen purutasuna proteinaren ezaugarrien arabera.

Proteina ezberdinen aminoazidoen sekuentzia eta egitura espazial desberdinek propietate fisiko, kimiko eta biologikoetan desberdintasunak eragiten dituzte. Isolatu beharreko proteinaren eta beste proteinen arteko propietateen desberdintasunak erabiliz, arrazoizko proteina arazteko eskema bat diseinatu daiteke.

Proteina jakin bat isolatzeko eta arazteko prozedura orokorra hiru urratsetan bana daiteke: aurretratamendua, kalifikazio lodia eta zatiketa.

Proteina bat isolatzeko eta arazteko, proteina lehenik eta behin jatorrizko ehun edo zelulatik askatu behar da egoera disolbagarrian eta bere jatorrizko egoera naturalean geratu behar da jarduera biologikoa galdu gabe. Hori dela eta, animalia-materialak ehun konektibo eta gantzetatik kendu behar dira lehenik, hazi-materialak lehenik eta behin haziaren estalkitik kendu behar dira, taninoek eta beste substantziek kutsatzea saihesteko, eta olio-haziak hobe irakiten baxuarekin koipegabetu behar dira. disolbatzaile organiko puntuala, hala nola eterra. Ondoren, ehunak eta zelulak birrindu egiten dira kasu bakoitzerako aukeratutako metodo egokiaren arabera. Animalien ehunak eta zelulak birringailu edo homogeneizatzaile elektrikoekin xehatu daitezke edo ultrasoinu tratamenduarekin birrinduta. Landare-ehunek eta zelulek, zelulosaz, hemizelulosaz eta pektinaz osatutako zelulen hormak dituztelako, oro har, kuartzozko harea edo beira-hautsarekin ehotzeko metodo bat behar dute, eta elkarrekin ateratako edo zelulasarekin tratamendu egokiak ere balio dezakete. Bakterioen zelulen zatiketa arazotsuagoa da bakterioen hormaren hezurdura osoa lotura kobalenteen bidez konektatuta dagoen peptidoglikano zaku itxurako makromolekula bat delako, oso gogorra dena. Bakterioen zelulen hormak hausteko ohiko metodoak hauek dira: ultrasoinuen birrintzea, harearekin ehotzea, presio handiko estrusioa edo lisozima tratamendua. Ehunen eta zelulen zatiketaren ondoren, nahi den proteina erauzten da tampon egokia hautatuz. Disolbaezina den materiala, esate baterako, zelulen hondakinak kentzen dira zentrifugazio edo iragazketa bidez.

Nahi den proteina frakzio zelularrean kontzentratzen bada, hala nola nukleoan, kromosoman, erribosoman edo zitoplasma disolbagarri batean, zentrifugazio diferentzialaren bidez bereiz daitezke eta frakzio zelularra hurrengo arazte-urratserako material gisa biltzen da. Nahi den proteina zelula-mintzari edo mintz-organuloei lotuta badago, mintzaren egitura ultrasoinu edo deskontaminatzaileen bidez despolimerizatu behar da eta, ondoren, euskarri egokiekin atera.

Proteina-estraktuak (batzuetan azido nukleikoekin, polisakaridoekin eta abarrekin nahastuta) lortutakoan, nahi den proteina beste proteina ezberdinetatik bereizteko metodo egokien multzoa aukeratu behar da. Orokorrean, bereizketa-urrats hau gazitzearen, prezipitazio puntu isoelektrikoaren eta disolbatzaile organikoekin bereizketa mailakatuaren bidez egiten da. Metodo hauek sinpletasuna eta prozesatzeko bolumen handia dute, eta horrek ezpurutasun kopuru handia kendu dezake eta proteina-soluzioa ere kontzentratzen du. Proteina-estraktu batzuk handiak dira eta ez dira egokiak prezipitazio edo gatz bidez kontzentratzeko; filtrazio, gel-iragazte, izozte-hutsean edo beste metodo batzuen bidez kontzentratu daitezke.

Lagina sailkapen lodiaren bidez banandu ondoren, bolumena txikia da orokorrean eta heteroproteina gehienak kendu egin dira. Arazketa gehiago lortzeko, metodo kromatografikoak, besteak beste, gel-iragazkia, ioi-trukearen kromatografia, adsortzio-kromatografia eta afinitate-kromatografia erabiltzen dira. Elektroforesia, zona-banda elektroforesia eta foku isoelektrikoa barne, azken arazketa-urrats gisa ere hauta daiteke beharrezkoa bada. Maila finko bereizketak egiteko erabiltzen diren metodoak, oro har, eskala txikiak dira baina bereizmen handikoak.

Kristalizazioa proteinak bereizteko eta arazteko azken urratsa da. Kristalizazio-prozesuak proteina nahitaez homogeneoa denik bermatzen ez badu ere, kristalizazioa disoluzioan proteina bat kuantitatiboki nagusi bada bakarrik gerta daiteke. Kristalizazio-prozesua bera arazte-maila batekin dator, eta birkristalizazioak harrapatutako proteina kopuru txikiak kentzen ditu. Kristalizazio garaian proteina desnaturalizaturik aurkitzen ez denez, proteina kristalizazioa garbitasunaren seinale ez ezik, produktua bere egoera naturalean dagoela adierazle sendoa ere bada.

Metodoa proteina spin zutabeak metodo kromatografiko bati erreferentzia egiten dio, zeinetan tampon edo disolbatzaile organiko bat erabiltzen den fase mugikor gisa eta xurgatzaile solido bat fase geldikor gisa erabiltzen den zutabearen konposizioa egiteko.

Gurea interesatzen bazaizu bira-zutabea edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.