Bira Zutabea
katalogoa: Biratu Zutabeak
Zer da spin zutabea?
Spin zutabeak DNA/RNA erauzteko eta hainbat material fintzeko erabil daitezke. The bira-zutabea anioiak eta katioiak trukatzeko erretxina ditu. Ioi-trukearen erreakzioan, uretako katioiak (adibidez, Na+) erretxinara transferitzen dira, eta ioi-trukeko erretxinan dagoen H+ trukagarria uretara transferitzen da. Na+ uretatik erretxinara transferitzeko prozesua ioien ordezkapen prozesua da. Eta erretxinan H+ ura trukatzeko prozesuari askapen prozesua deitzen zaio. Horrela, ordezkapen eta askapen prozesuaren ondorioz, Na+ eta H+ lekuak trukatzen dira, eta aldaketa horri ioi-truke deitzen zaio. Era berean, erretxina negatiboak OH- desplazatzen du H2O ekoizteko. Erretxina-trukea truke-ahalmen handia, ur-fluxuaren erresistentzia baxua, erresistentzia mekaniko handia eta egonkortasun kimiko ona ditu. Aldi berean, erretxina-trukeak truke-erreakzio itzulgarria du, eta horrek birsortzea eta hainbat ioi-adsortzio aukeratzea errazten du gatza kentzeko eta arazteko helburua lortzeko.
Bira-zutabea funtzionamendu sinplea, berreskuratze tasa altua eta errendimendu egonkorra ditu. Gaur egun, spin zutabeak laborategi eta enpresa gehienetan ezagunak dira etxean eta atzerrian. Silice-mintzak azido nukleikoetarako material xurgatzaile espezifiko gisa erabiltzen dituzte, neurri handi batean, beste material biologiko batzuekin xurgatzen ez duten bitartean. Honek DNA\RNA laginaren gehienezko berreskurapena bermatzen du, beste ezpurutasun batzuk kentzen dituen bitartean.
Spin zutabeen muntaketa-lerroa
Produktuaren osagaiak
a. Likido bilketa hodia
Bilketa-hodiak medikuntza-mailako polipropilenoz eginak daude, 2 ml eta 50 ml-ko bolumenetan.
b. Zutabea
Zutabea maila medikoko polipropilenoz egina dago, sareko hondoarekin edo konektore batekin eta gutxi gorabehera 1ml edo 25ml-ko edukiera du.
c. Junta
Junta zuntz-material berezi bat da, azido eta base eta disolbatzaile organiko gehienekiko erresistentea dena eta biomolekula gehienetan xurgatzen ez dena.
d. Iragazki-mintza
Inportatutako lehengaiez egindako silikonazko edo beira-zuntz bereziki optimizatutako mintzek azido nukleikoen molekulak xurga ditzakete neurri handienean.
Bira-zutabearen ezaugarriak
A. Biratu zutabeak DNA arazteko.
B. Spin zutabeak RNA arazteko.
C. 45-50 µg-ko lotura-ahalmena.
D. Zatiaren tamaina 65 bp-tik 10 kbp-ra bitartekoa da.
E. Buffer formulazioak egokiak dira plasmidoen prestaketarako kantitate txikietan, gelen erauzketarako eta PCR bidezko garbiketarako.
F. The bira-zutabea beira-zuntzezko mintz ugariz beteta dago, hau da, azido nukleikoak azkar erauzteko beira-zuntzaren erauzketa metodoan oinarritutako teknika.
Spin zutabearen aplikazioak
Biraketa-zutabea eta bilketa-hodia erabilera asko dituzte laborategian, adibidez:
a. RNA arazketa,
b. Plasmidoen DNA erauzketa,
c. DNA genomikoaren erauzketa,
d. PCR anplifikazio produktuen purifikazio azkarra,
e. Agarosa geletatik DNA kateak berreskuratzea,
f. Erreakzio-nahasteetatik DNA espezifikoen isolamendua,
g. PCR produktuen purifikazioa,
h. DNA edo RNA kate bakarreko edo bikoitzekoaren purifikazioa gatz, disolbatzaile, entzima edo proteina bezalako ezpurutasunetan.
i. Beste batzuk.
Biratu zutabeak DNA arazteko
A. Plasmidoen DNAren purifikazioaren printzipio esperimentalak
Etidio bromuroak DNAri lotzen zaio baseen artean txertatuz, eta horrek, aldi berean, helize bikoitza askatzen du, DNA linealaren luzera handituz. Konpentsatzeko, unitate superhelikoidal batzuk sartzen dira begizta itxiko DNA plasmidoan. Unitate superhelikoidal horiek nabarmen handitzen dira, eta horrela, etidio bromuro molekula gehiago txertatzea eragozten da. Molekula lineala, ordea, ez dago mugatuta eta etidio bromuro gehiago lotzen jarrai dezake saturaziora iritsi arte (gutxi gorabehera etidio bromuro molekula 1 2 base pare bakoitzeko). Zesio kloruro gradutan, etidio bromuro kantitate saturagarriak dituzten DNA molekula linealen eta begizta itxikoen dentsitate flotatzailea desberdina da lotutako koloratzaile kopuruaren desberdintasunengatik. Urte askotan, zesio kloruro-etidio bromuro gradiente orekatze zentrifugazioa izan da plasmido DNA kantitate handiak prestatzeko aukeratutako metodoa. Hala ere, prozesu hau garestia eta denbora asko eskatzen duena da, eta metodo alternatibo asko garatu dira horretarako. Ioi-truke kromatografia erabiliz plasmido DNA eta ostalariaren DNA bereiztea barne hartzen zuten metodoak, gel-iragazketa kromatografia, prezipitazio mailakatua, etab. Horien artean, polietilen glikolaren prezipitazio mailakatuaren metodoa da gehien erabiltzen dena.
B. PCR purifikazio zutabea
a. Produktuaren zuzeneko arazketa
PCR anplifikazioa amaitu ondoren, produktua agarosa gel elektroforesi bidez detektatu behar da. Banda bakarra beste banda faltsurik gabe badago, produktua zuzenean purifikatu daiteke. Purifikazio metodo ohikoenak silize gela dira. kromatografia zutabea metodoa, ale magnetikoen metodoa eta beste arazketa-metodo batzuk.
b. Silize zutabea DNA erauztea
Silize-mintzaren spin-zutabearen printzipioa
Zutabe zentrifugo gehienetan DNA xurgatzen duena bira-zutabea Zentrifugazio silize-mintza da, hau da, beira-zuntzen geruza bat. Bere gainazalean silizio-hidroxilo talde eraldatuen (Si-OH) kopuru handia dago. Silice-hidroxilo taldea disoluzioan disoziatu ondoren negatiboki kargatuta dago, eta, ondoren, zubi elektriko bat osatzen du positiboki kargatutako gatz-ioiekin eta negatiboki kargatutako DNArekin, hau da, DNA xurgatzen duena, DNA kate bikoitzeko kate bakarrekoa bihurtuz eta disolbatzaile biomolekularrek ez dute elutzen. Hala ere, ur-disolbagarrien buffer bidez hidratatu daiteke eta, ondoren, kuantitatiboki berreskuratu, horrela arazketa eta bereizketa lortuz.
PCR anplifikazioa amaitu ondoren, DNA zatiak izan ezik, ioiak, dNTP, abiarazleak eta polimerasa ere badaude erreakzio-sisteman, eta horrek ondorengo klonazio eta sekuentziazio esperimentuetan eragingo du, beraz, produktuen arazketa ezinbesteko urratsa da.
Spin zutabe proteina arazketa
Proteinen isolamendua eta arazketa asko erabiltzen dira ikerketa biokimikoko aplikazioetan. Zelula eukarioto tipiko batek milaka proteina ezberdin izan ditzake, batzuk oso ugariak eta beste batzuk kopia gutxikoak. Proteina jakin bat aztertzeko, lehenik eta behin proteina hori beste proteina eta proteina ez diren molekula batzuetatik araztu behar da. -ren helburua proteinen arazketa Helburuko proteina lisatuaren osagai guztietatik bereiztea da, proteinaren jarduera biologikoa eta osotasun kimikoa mantenduz. Proteinen bereizketa eta arazketa lan zaila eta zorrotza da, eta arazteko metodo egokia aukeratu behar duzu lortutako proteina produktuen purutasuna proteinaren ezaugarrien arabera.
Proteina ezberdinen aminoazidoen sekuentzia eta egitura espazial desberdinek propietate fisiko, kimiko eta biologikoetan desberdintasunak eragiten dituzte. Isolatu beharreko proteinaren eta beste proteinen arteko propietateen desberdintasunak erabiliz, arrazoizko proteina arazteko eskema bat diseinatu daiteke.
Proteina jakin bat isolatzeko eta arazteko prozedura orokorra hiru urratsetan bana daiteke: aurretratamendua, kalifikazio lodia eta zatiketa.
Pre-tratamendua
Proteina bat isolatu eta purifikatzeko, proteina lehenik jatorrizko ehun edo zelulatik askatu behar da egoera disolbagarrian eta bere jatorrizko egoera naturalean mantendu behar da jarduera biologikoa galdu gabe. Horregatik, animalia-materialak lehenik ehun konektibo eta gantz-ehunetatik kendu behar dira, hazi-materialak lehenik azala kendu edo hazi-estalkitik ere kendu behar dira taninoen eta beste substantzien kutsadura saihesteko, eta olio-haziak, hobe da, lehenik irakite-puntu baxuko disolbatzaile organiko batekin, hala nola eter batekin, koipegabetu behar dira. Ondoren, ehunak eta zelulak kasu bakoitzerako aukeratutako metodo egokiaren arabera xehatu egiten dira. Animalia-ehunak eta zelulak xehatu daitezke birringailu elektrikoekin edo... homogeneizatzaileak edo ultrasoinu bidezko tratamenduarekin xehatuta. Landare-ehunek eta zelulek, zelulosa, hemizelulosa eta pektinaz osatutako zelula-hormak dituztenez, normalean kuartzozko harea edo beira-hautsarekin ehotzeko metodo bat behar dute, eta egoki diren erauzketek elkarrekin edo zelulosa bidezko tratamenduek ere balio dezakete helburu hori. Bakterio-zelulen zatikatzea arazo handiagoa da, bakterio-zelulen hormaren eskeleto osoa lotura kobalenteen bidez lotutako peptidoglikano-zaku itxurako makromolekula bat baita, eta hori oso gogorra da. Bakterio-zelulen hormak hausteko metodo ohikoenen artean daude ultrasoinu bidezko xehatzea, hareaz ehotzea, presio handiko estrusioa edo lisozimaren tratamendua. Ehunen eta zelulen zatiketaren ondoren, nahi den proteina buffer egokia hautatuz ateratzen da. Zelula-hondakinak bezalako material disolbaezina zentrifugazio edo iragazketa bidez kentzen da.
Nahi den proteina frakzio zelularrean kontzentratzen bada, hala nola nukleoan, kromosoman, erribosoman edo zitoplasma disolbagarri batean, zentrifugazio diferentzialaren bidez bereiz daitezke eta frakzio zelularra hurrengo arazte-urratserako material gisa biltzen da. Nahi den proteina zelula-mintzari edo mintz-organuloei lotuta badago, mintzaren egitura ultrasoinu edo deskontaminatzaileen bidez despolimerizatu behar da eta, ondoren, euskarri egokiekin atera.
Bereizketa lodia
Proteina-estraktuak (batzuetan azido nukleikoekin, polisakaridoekin eta abarrekin nahastuta) lortutakoan, nahi den proteina beste proteina ezberdinetatik bereizteko metodo egokien multzoa aukeratu behar da. Orokorrean, bereizketa-urrats hau gazitzearen, prezipitazio puntu isoelektrikoaren eta disolbatzaile organikoekin bereizketa mailakatuaren bidez egiten da. Metodo hauek sinpletasuna eta prozesatzeko bolumen handia dute, eta horrek ezpurutasun kopuru handia kendu dezake eta proteina-soluzioa ere kontzentratzen du. Proteina-estraktu batzuk handiak dira eta ez dira egokiak prezipitazio edo gatz bidez kontzentratzeko; filtrazio, gel-iragazte, izozte-hutsean edo beste metodo batzuen bidez kontzentratu daitezke.
Banaketa fina
Lagina sailkapen lodiaren bidez banandu ondoren, bolumena txikia da orokorrean eta heteroproteina gehienak kendu egin dira. Arazketa gehiago lortzeko, metodo kromatografikoak, besteak beste, gel-iragazkia, ioi-trukearen kromatografia, adsortzio-kromatografia eta afinitate-kromatografia erabiltzen dira. Elektroforesia, zona-banda elektroforesia eta foku isoelektrikoa barne, azken arazketa-urrats gisa ere hauta daiteke beharrezkoa bada. Maila finko bereizketak egiteko erabiltzen diren metodoak, oro har, eskala txikiak dira baina bereizmen handikoak.
Kristalizazioa proteinak bereizteko eta arazteko azken urratsa da. Kristalizazio-prozesuak proteina nahitaez homogeneoa denik bermatzen ez badu ere, kristalizazioa disoluzioan proteina bat kuantitatiboki nagusi bada bakarrik gerta daiteke. Kristalizazio-prozesua bera arazte-maila batekin dator, eta birkristalizazioak harrapatutako proteina kopuru txikiak kentzen ditu. Kristalizazio garaian proteina desnaturalizaturik aurkitzen ez denez, proteina kristalizazioa garbitasunaren seinale ez ezik, produktua bere egoera naturalean dagoela adierazle sendoa ere bada.
Proteina kontzentratzailearen spin zutabea
Metodoa proteina spin zutabeak metodo kromatografiko bati erreferentzia egiten dio, zeinetan tampon edo disolbatzaile organiko bat erabiltzen den fase mugikor gisa eta xurgatzaile solido bat fase geldikor gisa erabiltzen den zutabearen konposizioa egiteko.
Spin zutabea muntatzeko makina txertaketarekin iragazi
Nola erosi spin zutabea?
Gurea interesatzen bazaizu Bira Zutabea edo zalantzaren bat baduzu, idatzi e-mail bat info@antiteck.com helbidera, ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.