Elektroforesi aparatua

Edukia
1. Zer da elektroforesi aparatua?
    1.1 Elektroforesi aparatuen funtzionamendu-printzipioa
    1.2 Elektroforesi aparatuen historia
2. Elektroforesi aparatu mota
    2.1 Gel elektroforesi-aparatua
3. Elektroforesi aparatuak erabiltzea
    3.1 Elektroforesi aparatuen erabilerari buruzko oharrak
    3.2 Elektroforesi aparatuen ohiko arazoen konponketa
4. Nola erosi elektroforesi aparatua?

Elektroforesi aparatua konturatzen den tresna da analisi elektroforetikoa. Oro har, elikadura-iturri, elektroforesi-tanga, detekzio-unitate eta abarrez osatuta dago. Elektroforesi deritzonak eremu elektrikoan partikulen kargatutako mugimenduari egiten dio erreferentzia. Eremu elektrikoan substantzia desberdinak abiadura ezberdinetan mugitzen dira, beren karga eta pisu molekular desberdinak direla eta, horren arabera substantzia desberdinak kualitatiboki edo kuantitatiboki aztertu daitezke, nahaste jakin bat osagaietan analiza daiteke edo osagai indibidualak atera eta prestatu daitezke.

Elektroforesi aparatua erabili ahal izango da analisi kualitatiboa edo kuantitatiboa substantzia ezberdinen, nahaste jakin baten osagaien analisia edo osagai indibidualen erauzketa eta prestaketa. Medikuntza klinikoko laborategiko probetan edo ikerketa esperimental zientifikoetan erabili ohi da.

Masa kargatuak xurga ditzaketen edo disoluzioan talde disoziagarriak izan ditzaketen substantzien partikulak, proteinak eta aminoazidoak, adibidez, propietate elektriko kontrako elektrodoek erakartzen dituzte eta DC eremu elektriko batean mugitzen dira pH baldintza jakin batzuetan. Kargatutako egoeraz eta eremu elektrikoaren indarraz gain, eremu elektrikoko substantzia ezberdinen partikulen higidura-abiadura ere lotuta dago partikulen tamaina, forma eta biskositate ertainearekin. Ezaugarri honen arabera, elektroforesiaren aplikazioa substantzia ezberdinen analisi kualitatibo edo kuantitatibo bat izan daiteke edo osagaien analisirako edo osagai indibidualak erauzteko prestatzeko nahasketa jakin bat, elektroforesi tresna goiko printzipioan oinarrituta diseinatu eta fabrikatzen da.

Elektroforesian eragiten duten faktore asko daude, batez ere bereizitako substantziaren karga-kopurua, eremu elektrikoaren indarra, tamponaren pH-a eta indar ionikoa eta euskarriaren inertzia kimikoa.

1946an Tiselius kimikari fisiko suediarrak muga-aldaketaren elektroforesi sistema merkaturatu zuenetik, elektroforesi analizatzaileen garapena oso azkarra izan da. 1970eko hamarkadaz geroztik, gero eta elektroforesi analizatzaile automatizatu gehiago sartu dira laborategi klinikoetan eta gero eta garrantzi handiagoa dute hainbat gaixotasunen diagnostiko klinikoan eta tratamenduan.

Bi euskarri mota nagusiak zelulosa azetato filma (azetato filma deitzen zaio) eta agarosa gela dira. elektroforesi aparatuak aldi honetan gehienbat proteinak aztertzeko erabiltzen ziren, hala nola serum proteinak, lipoproteinak, hemoglobina eta beste elementu batzuk.

Aldi honetan, elektroforesi aparatuak Batez ere argi ikusgaia/fluoreszente sistema bikoitzeko elektroforesi eskaner automatikoak ziren. Erreaktibo fluoreszenteak eta eskaner fluoreszenteak sartzeak asko erraztu zuen praktika klinikoan laktato deshidrogenasa (LD) eta kreatina kinasa (CK) isoentzimak zehaztea.

Garai honetan, elektroforesi aparatuak automatizazioan oinarritzen ziren.

Elektroforesia elektroforesi askean eta elektroforesi zonaletan banatzen da elektroforesian euskarri bat erabiltzen den ala ez.

Elektroforesi askeak ez du euskarririk erabiltzen, eta elektroforesia disoluzioan egiten da. Elektroforesi mota hau bi kategoriatan banatzen da: interfaze askeko elektroforesia eta interfaze askeko elektroforesia. Interfaze askerik gabeko elektroforesiak esan nahi du soluzioan esekita dauden partikula kargatu guztiak (esaterako, hainbat zelula) elektrifikazioaren ondoren mugitzen direla eta ez dela interfazerik agertzen, mikroelektroforesia adibidez. Interfaze askeko elektroforesian, bereizitako substantziak geruza jakin batean kontzentratzen dira eta haien interfazea osatzen dute analisi kualitatibo edo kuantitatiborako. Interfaze askeko elektroforesiak egungo tresna garesti eta sofistikatuak behar ditu eta elektroforesi aplikazio berezi batzuetan bakarrik erabiltzen da, hala nola fokatze isoelektrikoko elektroforesi eta elektroforesi isotropoan.

Elektroforesi zonal guztiek euskarri euskarria erabiltzen dute, iragazki-paperaren elektroforesi, azetato mintzaren elektroforesi, geruza meheko elektroforesi eta gel elektroforesi euskarriaren arabera banatuta. Horrez gain, euskarriaren gailuen forma desberdinak plaka horizontaleko elektroforesi, plaka bertikaleko elektroforesi, disko bertikaleko elektroforesi, elektroforesi kapilarra, zubi elektroforesi eta fluxu jarraituko elektroforesi eta abar bereiz daitezke.

Hainbat mota arrunt elektroforesi aparatua honako hauek dira.

Fluoreszentzia automatikoa/argi ikusgarria sistema bikoitza elektroforesi tresna fluoreszentzia/argi ikusgarria du sistema bikoitza du, erreaktibo fluoreszenteak elementuak erabiliz, hala nola CK eta LD isoentzimak. Sentikortasun handiko eta zehaztasun handiko abantailak ditu eta presio handiko eta tenperatura baxuko sistema hartzen du, oso azkarra dena.

Binilo-filmaren elektroforesi-tresna guztiz automatizatua argi ikusgaiko sistema bakarra da. Binilo-mintzaren elektroforesi xafla bat erabiltzen du eta automatizazio handiagoaren abantaila du. Tresna hau serum proteina elektroforesiaren azterketa klinikorako erabiltzen da batez ere.

Agarosa elektroforesi tresna automatikoa argi ikusgaiko sistema bakarra da. Agarosa gel elektroforesi filma erabiltzen du, sentsibilitate handiko abantaila duena eta kontzentrazio baxuko proteina probak egiteko erabil daitekeena, hala nola gernuaren proteina eta likido zerebroespinalaren proteina. Isoentzimen bereizketa ere nahiko ona da, eta sentikortasun handiagoko elementu gehiago egin ditzake.

The elektroforesi tresna goiko tresnen abantailak kontzentratzen ditu, automatikoki antzematea, elektroforesia, koloreztatzea (edo tindatzea, deskolorizazioa) eta lehortzea. Elektroforesi xafla ezberdinetarako erabil daiteke, besteak beste, agar xaflak, azetato xaflak, poliakrilamida eta abar. Argi ikusgaiaren eta fluoreszentzia kolorearen aurkezpen sistema bikoitza hartzen du, hau da, elektroforesi tresna idealagoa da.

a. Konektatu elektroforesi-tangako bi elektrodoak elektroforesi-tresnaren DC irteerara hariekin, arreta jarri polaritatea ez aldatzeko.

b. Egokitu elektroforesi tresnaren etengailua itzali posizioan, biratu tentsioaren botoia minimora eta aukeratu tentsio eta korronte tartea lan beharraren arabera.

c. Piztu elektrizitatea, biratu poliki-poliki tentsioa doitzeko botoia beharrezko tentsiora iritsi arte, ezarri elektroforesiaren amaiera-denbora eta, ondoren, hasi elektroforesia.

d. Lana amaitu ondoren, biratu botoiak eta etengailuak zerora edo itzali, eta markatu elektroforesi-entxufea.

a. Ondoren elektroforesi aparatua lan-egoeran energizatuta dago, debekatuta dago giza gorputzak elektrodoa, elektroforesi objektua eta elektrikoki kargatutako beste atal posibleak ukitzea, eta gauzak elektroforesi deposituan ez hartzea eta ez jartzea, behar izanez gero, energia deskonektatu behar da lehenik. saihestu shock elektrikoa. Aldi berean, tresnak lurrerako mutur ona izan behar du ihesak saihesteko.

b. Tresna piztu ondoren, ez gehitu edo markatu aldi baterako irteerako kablearen entxufea zirkuitu laburren fenomenoa saihesteko, nahiz eta tresna barneko fusiblea duen, zirkuitu laburren fenomenoak tresna kaltetu dezake.

c. Euskarri ezberdinen erresistentzia-balioa desberdina denez, elektroforesiaren bidezko fluxu elektrikoa ere desberdina da, eta bere igeriketa-abiadura eta amaieraraino igeri egiteko behar den denbora ere desberdinak dira, beraz, euskarri desberdinen elektroforesia ez da egin behar. elektroforesi tresna berean aldi berean.

d. Korronte osoak tresnaren korronte nominala gainditzen ez duenean (korronte maximoa), posible da hainbat zirrikitu batera erabiltzea, baina kontuz gainkargatu gabe, bestela tresnaren bizitzari erraz eragingo dio.

e. Egoera berezi batzuetan, batez ere tresnak elektroforesiaren sarrera egiaztatu behar duenean, makina kargarik gabe abiaraztea onartzen da tentsioaren egonkortze egoeran, baina korronte egonkortze egoeran, karga konektatu behar da makina martxan jarri aurretik. , bestela voltmetro-erakusleak nabarmen jauzi egingo du, eta horrek erraz eragingo du alferrikako makinen kalteak.

f. Erabiltzean fenomeno anormalak aurkitzen badira, hala nola, zarata handia, isurketa edo usain anormala, berehala moztuko da energia elektrikoa eta berrikusi egingo da istripuak ekiditeko.

Irteerako balioaren egoera elektroforesi aparatua "Ohm-en legea" jarraitzen du: tentsioa U=korrontea I×(elektroforesi depositua) erresistentzia R

R erresistentzia konstante samarra bada, U, I eta P-ren edozein parametro (potentzia P=korronte I×U tentsioa) konstantea da, beste parametro batzuk ere konstanteak dira; eta parametroren bat aldatzen bada, beste parametro batzuk ere proportzionalki aldatzen dira.

Elektroforesi-tresnaren irteerako U-tentsioa aurrez ezarritako baliora iristen ez bada, lehenik eta behin I edo P konstantea izan den edo elektroforesi-tresnak zehaztutako I edo P maximora iritsi den ikusi beharko zenuke (JY elektroforesi-tresnek seinale adierazle argiak dituzte). ). Muga-balioa oraindik iritsi ez bada, igo dagoeneko konstante I edo P-ren ezarpena (beharrezkoa bada muga-balioraino) tentsio-irteera handitu ahal izateko.

Elektroforesi-tresnaren I korrontea aurrez ezarritako baliora iristen ez bada, egokitu U tentsioa edo P potentzia. Elektroforesi-tresnaren P potentzia aurrez ezarritako baliora iristen ez bada, doitu U tentsioa edo I korrontea.

a. Egiaztatu kargarik gabe erabiltzen den.

b. Elektroforesi depositua bufferz betetzen ez ote den.

c. Elektroforesi-tangako platinozko haria hautsi den ala ez.

a. Elektroforesi deposituan zirkuitulaburrik dagoen ala ez.

b. Buffera gaizki hautatuta dagoen ala ez.

a. Tresnaren barrualdean edo irteerako interfazean likidoa isuri den ala ez.

b. Ea tresnaren barrura hauts asko erortzen den.

Gurea interesatzen bazaizu elektroforesi aparatua edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.