HPLC-MS

Edukia
1. Zer da HPLC-MS?
2. HPLC-MS aplikazioa
3. HPLC-MS funtzionamendu-printzipioa
4. HPLC-MS erabiltzearen abantailak
5. HPLC-MS motak
6. HPLC-MS zehaztapenak eta ezaugarriak
7. Kutsatzaileen eragina HPLC-MSan
8. Nola erabili HPLC-MS?
9. Nola mantendu HPLC-MS?
10. Nola eskatu HPLC-MS?

Ren izen osoa HPLC-MS is errendimendu handiko kromatografia likidoa-masa espektrometria, bereizketa sistema gisa kromatografia likidoa eta detekzio sistema gisa masa espektrometria erabiltzen dituena. Lagina fase mugikorretik bereizten da masa-espektrometria zatian, ionizatu egiten da, eta, ondoren, ioi-zatiak masa-zenbakiaren arabera bereizten dira masa-espektrometriaren masa-analizzadoreak, eta masa-espektroak detektagailuak lortzen ditu. Masa likido-likidoaren espektrometriak kromatografiaren eta masa-espektrometriaren abantaila osagarriak islatzen ditu, lagin konplexuetarako kromatografiaren bereizketa-gaitasun handia eta MS-ren abantailekin selektibitate handiko, sentikortasun handiko eta masa molekular erlatiboa eta egitura-informazioa emateko gaitasunarekin konbinatuz. oso erabilia izan da alor askotan, hala nola drogen analisian, elikagaien analisian eta ingurumenaren analisian.

ren aplikazioak kromatografia likidoa-masa espektrometria (LC-MS) hainbat arlotan honako hauek dira.

Biokimikan
Izaki bizidunetako konposatuak oso polarrak dira, hegaztizatzeko zailak eta ezegonkortasun termiko nabarmena dute, eta, aldi berean, konposatu hauek askotan proteina, peptido eta azido nukleikoen nahasketa batean agertzen dira, HPLC-MS, berriz, lurrunkorra ez den bereizteko gai da. , oso polarrak, termikoki ezegonkorrak eta pisu molekular handiko konposatuak; masa-espektrometriak nahaste konplexuetan konposatuak zehaztasunez karakterizatu ditzake, beraz, masa-espektrometria likidoa analisi biokimiko gisa. Horregatik, kromatografia likidoa gero eta arreta handiagoa hartzen ari da analisi biokimikorako tresna indartsu gisa.

Analisi farmazeutikoan
Droga-analisiaren ikerketaren arloan, farmazia gehienak konposatu polaragoak dira, eta kromatografia likidoaren analisiaren aukera zabalak eta masa-espektrometriaren espezifikotasun handiak egiturazko informazio kualitatiboagoa eta detekzio-sentsibilitate handia hobetu ditzakete. Masa-espektrometria likidoa exzimer ioien zatiketa anitzeko gai da, eta horrek konposatuen pisu molekular erlatiboak eta zatiketa informazio aberatsa eskaintzen ditu. Drogen garapenaren ezpurutasunen azterketa eta azterketa farmakokinetikoko faseetan, non ezpurutasunen eta lagin farmakokinetikoen odol-kontzentrazioa normalean baxua den eta analisia zaila eta interferentziazkoa den, masa-espektrometria likidoak azkar eta zehaztasunez zehaztu ditzake droga-analisian aztarna-substantzia, selektibitate handia dela eta. eta sentsibilitatea.

Ingurumenaren jarraipenan
Industriaren eta nekazaritzaren garapen azkarrarekin, ingurumen-kutsadura-arazo desberdinak gertatzen dira maiz, hala nola edateko uretan dauden antibiotiko-hondakinak, hidrokarburo aromatiko poliziklikoak, bifenilo polikloratuak, pestizida-hondarrak, etab. Hori dela eta, oso sentikorrak diren hondakin anitzeko analitiko fidagarriak garatzea. metodoak ingurumen-kimika analitikoko helburu estrategiko garrantzitsu bat bihurtu da. 1980ko hamarkadaren amaieran, ikertzaileek arrakastaz aplikatu zuten presio atmosferikoko ionizazio-masa-espektrometria kromatografia likidoarekin konbinatuta, eta harrezkero, LC-MS ingurumena kontrolatzeko tresna indartsuena bihurtzen hasi zen pixkanaka.

The printzipioa LC-MS tresna gas-kromatografiaren antzekoa da, kromatografia likidoa bereizketa-sistema gisa eta masa-espektrometria detekzio-sistema gisa erabiltzen dituena. Lagina fase mugikorretik bereizten da masa-espektrometria atalean, ionizatuta, eta, ondoren, ioi-zatiak masa-espektrometroaren masa-analisiatzaileak karga eta masa erlazioaren arabera bereizten ditu, eta masa-espektroa detektagailuak lortzen du.

Konposatu oso polarrak, lurruntzeko zailak eta termikoki ezegonkorrak aztertzeko gaitasunaz gain, errendimendu handiko kromatografia likidoa-masa espektrometria abantaila hauek ditu:

1. Sorta analitiko zabalarekin, HPLC-MS-k ia konposatu guztiak detektatu ditzake, eta horrek konposatu termikoki ezegonkorrak aztertzeko arazoa erraz konpondu dezake.

2. Aztertutako nahasteak kromatograman guztiz bereizten ez badira ere, HPLC-MSren ioi-masa-kromatograma bereizgarria erabil daiteke dagozkien kromatogramak helburu kualitatibo eta kuantitatiboetarako emateko.

3. Analisi kualitatiboko emaitza fidagarriak, LC-MS-k osagai bakoitzaren pisu molekularra eta egitura-informazio aberatsa eman ditzake aldi berean.

4. Detekzio-muga baxua da eta HPLC-MS-ren sentsibilitatea handia da, eta detekzio-ahalmena handitu daiteke magnitude-ordena bat baino gehiago ioiak detektatzeko metodoa hautatuz.

5. Analisi-denbora azkarra da eta LC-MS-n erabiltzen den kromatografia-zutabe likidoa diametro estua den zutabea da, eta horrek analisi-denbora laburtzen du eta bereizketa-efektua hobetzen du.

6. Oso automatizatua, LC-MS-k automatizazio maila handia du.

ren garapenarekin batera HPLC-MS interfaze-teknologia, masa-espektrometro likidoaren tresna bera ere eboluzionatzen ari da, masa-espektrometria-detektagailu mota askoren sorrerarekin. Gehien erabiltzen diren masa-espektrometro likidoak hauek dira:

Masa-espektrometria kuadrupoloa oraindik erabiliena da, eta erreakzio selektiboen monitorizazio modua (SRM) hiru faseko kuadripoloko masa espektrometroaren modua egokia da ohiko eta errendimendu handiko bioanalisirako. Masa-espektrometro kuadripoloaren prozesuan egindako hobekuntzek eta RF-ren egonkortasun sendoak masa-espektroen bereizmena asko hobetu dute, masa-zenbakien zabalerak 0.1 Da arte ebatziz eta aztertutako konposatuen selektibitatea hobetuz. Masa-espektrometria analizatzaile guztien artean, masa-espektrometro kuatripoloak analisi kuantitatiboen emaitzen zehaztasun eta zehaztasun onena eskaintzen du.

Matriz lagundutako laser desortzio ionizazioaren etorrerarekin eta ordenagailuen garapenarekin, TOP azkar garatu zen 1990eko hamarkadan. Gaur egun, hegaldiaren denbora-masa-espektrometrorik onenak 20,000 Da arteko bereizmenak lortzeko gai dira eta molekula-kopuruak oso zehaztasun handiz neurtzen dituzte. Hegaldi-denborako masa-espektrometroek bereizmen handiko foku bikoitzeko haizagailu magnetikoen analizagailuak ordezkatu dituzte neurri handi batean, baina ezin dituzte analisirako hautatutako ioien monitorizazio moduak eraginkortasunez erabili.

FT-ICR-MS tresna eraginkorra bihurtu da gas-faseko ioi-molekular erreakzioen oinarrizko ikerketan. Masa-espektrometria hau oso erabilia da makromolekula biologikoen azterketan ESI ioi-iturri batekin akoplatzen denean, eta bere bereizmen eta zehaztasun handiko abantailak aprobetxatzen ditu.

Mota: Masa espektrometro laukupolokoa
Ezaugarriak:
1. Masa espektrometro laukupolokoa analisi kuantitatiborako beharrezkoa den sentsibilitatea, errendimendua eta sistemaren egonkortasun orokorra eskaintzen ditu.
2. Masa-espektrometro kuatripoloak egokiak dira analisi kuantitatiboko aplikazioetarako ikerketan, biomarkatzaileen baliozkotzean, azterketetan, elikagaien probak eta ingurumen-analisian.
3. Masa espektrometro laukupoloek zure behar analitikoetara egokitutako eraginkortasuna, errendimendua eta balioa eskaintzen dituzte.

Sentsibilitatea, selektibitatea, erreproduzigarritasuna eta bereizketa LC-MS analisiek ioi metalikoek, ftalatoek, polietilenglikola (PEG), irristatze sustatzaileek, ura eta hainbat iturritatik sisteman sartzen diren partikulek eragiten dute. barne:
* Erreaktiboak eta disolbatzaileak
* Bufferak prestatzeko erabiltzen den ura
* Beira-ontzietatik lixibiatutako produktu kimikoak
* Mikrozentrifuga-hodiak
* Sarrerako iragazkiak
* Disolbatzaile-lerroak
* Tresnen osagaiak, adibidez, ponparen zigiluak
* Iturburuan eta talka-ganberan eluatua desolventizatzeko gasak
*Lagina bera

Beraz, kutsatzaileek analisian oztopatu dezakete:
a. Iturburuan analitoaren ionizazioa inhibitzea edo areagotzea
b. Analitoarekin aduktuak sortzea
c. Analitoen gailurrak maskaratzea edo/eta kromatograman mamu-gailur gisa agertzea
d. Oinarrizko lerroa zaratatsua egitea
e. Eskalatzeko sistemak eta zutabeak, maiz mantentze-lanak eta ordezko piezak behar dituztenak

Kutsadura gutxitzeko
a. Fase mugikorra garbitasun handiko disolbatzaileak, ura eta erreaktiboak erabiliz prestatu behar da.
b. Prestatu berri diren fase mugikorrak erabili behar dira fase mugikor urtsuen eta azetonitrilo (ACN) polimerizatzeko mikrobioen kutsaduraren aukera minimizatzeko.
c. Saihestu egin behar da beira-tresnak xaboiarekin edo detergenteekin garbitzea, zailak izan daitezkeelako kentzen eta interferentziak sor ditzakete analisian zehar.
d. Garbitasun handiko gasak erabili behar dira (adibidez, %95eko garbitasuneko nitrogeno arrunta).
e. Nitrogeno-sorgailua ondo mantendu behar da eta gas-bonbona ordezkatu behar da presioa maila onargarrietatik behera jaisten denean.
f. Analitoak lagin-matrizetik atera behar dira eta parametro kromatografikoak optimizatu behar dira, analitoen gailurrak interferentziaren gailurren bereizketa hobetzeko.

1. Egiaztatu likido-kromatografoaren zutabearen irteeraren eta masa-espektrometroaren ioi-iturburuan sartzen den populazioaren arteko hodiak konektatuta eta deskonektatuta daudela, hala badagokio.

2. Likido-kromatografoaren etengailu nagusia eta autolagingailuaren etengailua itzalita dauden ala ez, eta ez bada, itzali.

3. Masa espektrometroaren etengailu nagusia eta plaka nagusiko etengailua itzalita dauden ala ez, eta ez bada, itzali.

4. Egiaztatu ponparen olioaren kolorea eta masa espektrometroko huts baxuko ponparen olio maila.

5. Ireki nitrogeno likidoaren deposituaren balbula nagusia eta egiaztatu N2 gas iturriaren presioa, 1MPa baino handiagoa izan behar duena, eta ireki booster balbula baldintzak betetzen ez baditu. Egiaztatu presio-neurgailuaren seinalea behar den lan-presioara iristen den. Nitrogeno-makina erabiltzen baduzu, piztu makina funtzionamendu-prozeduraren arabera eta egiaztatu N2 deposituaren presioa normala den.

1. Piztu LC-MS tresnaren autotestaren etengailu nagusia; hala ere, oinarrizko metodoa antzekoa da. Hau da, lehenengo hasi.

2. Hutseko sistema abiarazteko prozedura ezberdina izango da LC-MS tresna desberdinetarako, baina oinarrizko metodoa antzekoa da. Hau da, lehenik ponpa mekanikoa abiarazi eta huts baxuko eskakizunera iritsi ondoren edo automatikoki turbina molekularreko ponpa martxan jarri, edo lehenik masa-espektrometroaren etengailua piztu eta ponpa molekularra huts handia ponpatzen hastea.

3. Piztu ordenagailua eta egin klik pantailan dagokion softwarearen logotipoan masa likidoaren espektrometroaren hasierako orrian sartzeko. Hutsune handia aurrez zehaztutako eskakizunetara iristen denean bakarrik, masa-espektrometroaren auto-proba burutu daiteke eta, ondoren, masa-espektrometroaren zati funtzionalak funtziona daitezke. Tresna batzuek masa espektrometroaren plaka nagusiaren potentzia piztu behar dute goiko funtzionamendua lortzeko.

4. Kromatografo likidoaren eta masa-espektrometroaren autotesta gainditzen denean, tresnaren pizteko fasea amaitzen da.

5. Aktibatu softwarea sistemaren softwareak kromatografia likidoa masa espektrometroarekin lotzen duela ziurtatzeko.

Eguneroko lanaren ondoren tresna gauean uzteko prest zaudenean, egoera hau sartu beharko zenuke:
1. Lehenik eta behin, deskonektatu LC eta MS arteko konexio-lerroa, aldatu IC-ren fluxu-balbula, 1C isuria hondakin-biltegira sartzeko.

2. Itzali ordenagailuaren pantailako tentsio biderkatzailea eta utzi masa-espektrometroaren berokuntza-osagaiak (baldin badago) zehaztutako tenperaturaren azpitik hozten, eta, ondoren, irten dagokion lan-interfazetik.

3. Itzali laneko gas-lerro guztiak, N. behar den gas-fluxuari eusteko behar duten gas-lerro batzuk izan ezik, eta itzali nitrogeno likidoaren deposituaren booster-balbula.

4. Masa espektrometroaren huts-sistema martxan utzi.

5. Fase mugikorrak azidoak, baseak edo gatzak baditu LC ponpa itzali aurretik, plunger-ponpa eta zutabea aldez aurretik prestatutako fase mugikorrekin garbituko dira gehigarri horiek gabe (LC ponpa emari baxuetan erabiltzen bada gau osoan, LC ponpa ez da itzali behar eta azido, base edo gatzdun fase mugikorra ez da ordezkatu behar). Garbitu autolagingailua zehaztutako garbiketa-soluzioarekin.

Jarri LC-MS tresna goian aipatutako gaueko egoeraren ondoren, hasiera beroa deitzen den hurrengo egunean.

1. HPLC-MS erabiltzean, erabili erregulatutako elikadura-hornidura UPS bat tresna-hornidura-tentsioa egonkorra eta etengabea dela ziurtatzeko. Batez ere, elektrizitate-hutsaren eragina kromatografia likido-masa espektrometroan.

2. Garbitu LC-MS sistema eta garbitu nebulizazio-ganbera alkohol isopropilikoaren soluzioarekin egunero, eta ireki kolpe-balbula aldizka airea kolpatzeko. ESI iturrietarako, egin hau gutxienez astean behin. APCI iturrirako, egin ezazu egunean behin kapilarra garbi dagoela ziurtatzeko.

3. Fase mugikorraren emaria ez da altuegia izan behar, ez 0.5 ml/min baino gehiago ESI ioi iturriarentzat eta 1.0 ml/min baino gehiago APCIrako.

4. Ordezkatu huts-ponparen olioa kromatografia likido-masa espektrometrotik urtean behin edo urte erdian.

5. Kontrolatu lagina exekutatzeko ingurunea, tenperatura eta hezetasuna barne.

6. Garbitu kromatografo likido-masa espektrometroaren injekzio-orratza eta injekzio-balbula esperimentua amaitu ondoren. Azidoa duen fase mugikorra erabili ondoren, zutabea eta ioi iturria metanolarekin edo urarekin garbitu behar dira.

7. Aldian behin garbitu kromatografia likido-masa espektrometroaren lagin-kono-zuloa, itxi isolamendu-balbula eta kendu lagin-kono-zuloa, lehenik eta behin, erabili metanola: ura: azido formikoa (45:45:10) disoluzioa ultrasoikoki garbitzeko. 10 minutuz, eta, ondoren, ultrasoinuz garbitu irtenbide bakoitza ur ultrapuruarekin eta metanolarekin 10 minutuz hurrenez hurren, eta, ondoren, instalatu tresnan lehortu ondoren.

8. Fase mugikorrak erabiltzeko prest egon behar du, ahal dela egun batetik bestera, eta freskoa izan behar du.

9. Ordezkatu aldian-aldian kromatografo likido-masa espektrometroaren elektroi biderkatzailea.

10. Hobe da akoplazioa egitean fluxua zatitzea, a ohiko zutabea erabiltzea, b analisi-denbora laburtzeko eta c masa-analisiaren bizitza luzatzeko.

11. Itzali tenperatura kapilarra kromatografo likido-masa espektrometroa behera aldatu aurretik, eta egonkortu denbora pixka bat itzali aurretik, haizagailuak bero-difusioaren periferia kapilarren biraketa geldiaraztea ekiditeko, erraz eragiteko. barne-zirkuitua eta osagai elektronikoen zahartzea bizkortu egin da.

Gurea interesatzen bazaizu HPLC-MS edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.