ANTITECK - Laborategiko ekipamendua, industria automatizazioa, moldaketa medikoa eta giltza eskuan irtenbidea ematea.
hplc-sistema

HPLC Sistema

Laborategian erabiltzen den HPLC sistema

Edukia
1. Zer da HPLC sistema?
    1.1 HPLC printzipioa
    1.2 HPLC diagrama
    1.3 HPLC sistemaren osaera
2. HPLC vs FPLC
    2.1 Zer da FPLC kromatografia?
    2.2 HPLC sistemen eta FPLC sistemen arteko antzekotasunak eta desberdintasunak
3. Nola erosi HPLC sistema?

Zer da HPLC sistema?

fplc-kromatografia
Errendimendu handiko kromatografia likidoaren sistema (HPLC sistema) errendimendu handiko kromatografia likidoaren printzipioa aplikatzen duen laborategiko tresna da. Batez ere, lurrunkorrak ez diren, beroagatik ezegonkorrak eta pisu molekular handia duten konposatu organikoak aztertzeko aplikatzen da.

Errendimendu handiko kromatografia likidoa (HPLC) kromatografiaren adar garrantzitsu bat da. Aplikazio sorta zabala du eta ez du mugatzen analitoen hegazkortasuna eta egonkortasun termikoa. Ia konposatu guztiak, irakite-puntu altua, konposatu polarrak, ionikoak eta makromolekulak barne, HPLC bidez aztertu eta zehaztu daitezke, eta horrela gas-kromatografiaren gabeziak konpontzen dituzte. Ezagutzen diren konposatu organikoen % 20 inguru gas-kromatografiaren bidez azter daitezke, eta % 80 errendimendu handiko kromatografia likidoaren bidez aztertu behar dira. HPLC bereizketa-eraginkortasun handia, analisi-abiadura azkarra, detekzio-sentsibilitate ona eta lurrundu ezin diren irakite-puntu altuak dituzten substantzia fisiologikoki aktibo termiko ezegonkorrak aztertzeko eta bereizteko gaitasuna ditu. HPLC asko erabiltzen da bizitza-zientzietan, ingurumen-ikerketetan, ikerketa farmazeutikoan, elikagaien zientzian eta ikerketa farmazeutikoan.

HPLC printzipioa

Kromatografiaren bereizketa-printzipioa fase mugikorrean disolbatutako osagaiak fase geldikorrean igarotzen direnean, estazio-fasearekin duen ekintzaren tamaina eta indar desberdinak direla eta, adsortzioa, banaketa, bazterketa, afinitatea eta atxikipen desberdinak izan daitezke. fase geldikorrean denbora, eta horrela, segidan, fase geldikotik irteten da.

Errendimendu handiko likido kromatografia likido-kromatografia klasikoan oinarritutako metodoa da, non likidoa fase mugikor gisa erabiltzen den eta presio handiko infusio-sistema erabiltzen den fase mugikorrak, esate baterako, polaritate ezberdineko disolbatzaile bakarrekoak edo proportzio ezberdinetako disolbatzaile eta buffer nahasiak zutabez hornitutako zutabe batean ponpatzeko. partikula oso finen fase geldiko oso eraginkorra. Metodo hau erabiliz, zutabeko osagaiak banandu eta gero detektagailuak detektatzen ditu, horrela laginaren analisia ahalbidetzen du.

HPLC diagrama

fplc

HPLC sistemaren osaera

The HPLC sistema oro har, ponpa kromatografiko batek, laginak, zutabeak, detektagailuak eta datuak prozesatzeko sistemak osatzen dute. Horien artean, ponpa kromatografikoa, zutabea eta detektagailua dira funtsezko osagaiak. Horrez gain, gradientea elutzeko gailua, lineako desgasifikatzailea, laginketa automatikoa, aurre-zutabea edo babes-zutabea, zutabe-tenperatura-kontrolatzailea eta abar, HPLC tresna modernoen eta mikroordenagailuen kontrol-sistemen beharren arabera konfigura daitezke tresna automatizatuen kontrola eta datuak prozesatzeko. . Prestaketa HPLC tresnak frakzioak biltzeko gailu automatikoekin ere hornituta daude.

A. Ponpa kromatografikoa

Ponpa kromatografikoa osagai garrantzitsuenetako bat da HPLC sistema. Kromatografia-ponpak presio konstanteko ponpetan eta fluxu konstanteko ponpetan banatzen dira irteera konstanteko likidoaren faktorearen arabera. Ponpen errendimenduak zuzenean eragiten du sistema osoaren kalitatean eta analisien emaitzen fidagarritasunean. Kromatografia-ponpak ponpa pneumatikoetan eta ponpa mekanikoetan banatzen dira funtzionamendu-moduaren arabera. Ponpa mekanikoen artean, torlojua gidatzeko xiringa-ponpak, pistoi bakarreko ponpak, pistoi bikoitzak eta diafragma-ponpak.
a. Presio handiko ponpa ezberdinen errendimenduen konparaketa
izenaTentsio konstantea/korronte konstanteaPulseFase mugikorraren ordezkapenaGradientearen eluzioaBirzirkulazioaKostua
Anplifikazio-ponpa pneumatikoaTentsio konstanteaEzEragozpenakBi ponpa behar diraEzHigh
Torlojua gidatzeko xiringa-ponpaKorronte konstanteaEzEragozpenakBi ponpa behar diraEzErtaina
Pistoi bakarreko ponpa aldakorraKorronte konstanteaBaiErosotasunaBaiBaiBehe-
Pistoi bikoitzeko ponpa aldakorraKorronte konstanteaSmallErosotasunaBaiBaiHigh
Diafragma alboko ponpaKorronte konstanteaBaiErosotasunaBaiBaiErtaina

B. Desgasifikatzeko gailua

Fase mugikorreko disoluzioan burbuilak oxigeno disolbatuaren edo aire mistoaren presentziaren ondoriozkoak dira. Aire-burbuilak detektagailura sartzen direnean, soinu-puntu zorrotz gisa agertuko dira kromatograman. Burbuila txikiak poliki-poliki pilatzen dira eta burbuila handi bihurtzen dira, fluxu-bidean edo zutabean sartzen direnak eta fase mugikorraren emari-abiadura moteltzen dutenak edo emari-abiadura ezegonkorra izatea eragiten dutenak, oinarri-lerro aldakor bat eraginez. Hori gutxi balitz, aire-burbuilak zutabean sartzen direnean, denbora asko eskatzen du kanporatzeak. Fluoreszentzia detektatzeko, disolbatutako oxigenoak fluoreszentzia ere itzal dezake. Disolbatutako gasek lagin batzuen oxidazioa ere eragin dezakete edo disoluzioaren pH-a alda dezakete. Gaur egun, lineaz kanpoko ultrasoinu-oszilazio-desgasifikazioa, lineako gas geldoen burbuilen garbiketa-desgasifikazioa eta lineako huts-desgasifikazioa erabili ohi dira kromatografia likidoaren fase mugikorra kentzeko.

C. Gradientea elutzeko gailua

HPLC eluzio isokratikoan eta gradientean eskuragarri dago. Eluzio isokratikoa analisi-ziklo berean fase mugikorren konposizioa konstante mantentzea da eta osagai kopuru txikia eta propietateen alde txikia duten laginetarako egokia da. Gradientearen eluzioa fase mugikorraren konposizioa kontrolatzea da, hala nola disolbatzailearen polaritatea, indar ionikoa eta pH-a, analisi-ziklo baten barruan eta osagai ugari eta propietate desberdinak dituzten lagin konplexuetarako erabiltzen da. Gradientearen eluzioa erabiltzearen abantailak analisi-denbora laburragoa, bereizketa hobea, gailurraren forma hobetua eta detekzio-sentsibilitate handiagoa dira, eta desabantaila, berriz, sarritan oinarri-lerroa eragiten duela eta erreproduzigarritasuna murrizten du. Bi disolbatzailez osatutako eluzio gradientea edozein mailatan nahas daiteke, eta, ondorioz, hainbat eluzio-profilak sortzen dira, hots, gradiente lineala, gradiente ahurra, gradiente ganbila eta gradiente mailakatua.

D. Sampler

HPLC sistemak normalean sei bideko injekzio balbulaz hornituta daude. Sei bideko balbularen injekzio metodoak bi mota ditu: likido partziala kargatzeko metodoa eta likido osoa kargatzeko metodoa.
a. Karga partziala injekzio metodoa
Injekzio-bolumenak kuantifikazio-eraztunaren bolumenaren % 50 (gehienez % 75) izan behar du eta injekzio-bolumen bakoitza zehatza eta berdina izan behar du. Injekzio-metodo honen zehaztasuna eta errepikakortasuna xiringaren laginketaren trebetasunaren arabera zehazten da, eta injekzioak eragindako hedapen gailurra erraz ekoizteko.
b. Likidoa kargatzeko metodo osoa injekzioa
Injekzio-bolumena kuantifikazio-eraztunaren bolumena baino 5 ~ 10 aldiz txikiagoa izan behar da (gutxienez 3 aldiz), eraztunaren fase mugikorra guztiz ordezkatzeko, hormaren efektua ezabatzeko eta injekzioaren zehaztasuna eta errepikakortasuna bermatzeko. .

E. Bereizketa sistema

Bereizketa sistemak zutabea, guardiako zutabea eta zutabearen tenperatura-ganbera ditu.

Kromatografia bereizteko eta aztertzeko bitarteko bat da. Bereizketa da teknikaren muina, beraz, bereizketaz arduratzen den zutabea sistema kromatografikoaren muina da. Zutabe kromatografiko bat zutabe-hodi bat, presio-txapela, ferrula (zigilatzeko eraztuna), bahe-plaka (iragazkia-plaka), juntadura, torlojua eta abarrez osatuta dago. Paketatze kromatografikoa material partikulak dira, normalean 5-10 partikula-tamaina duten partikula esferikoak. prestaketa-prozesuaren ondoren zutabea betetzeko erabiltzen dira. Zutabe kromatografikoak erabileraren arabera analitiko eta prestatzaile motatan bana daitezke, eta tamainaren zehaztapenak ere desberdinak dira.

Babes-zutabearen funtzioa oso xurgatutako ezpurutasunek zutabearen kutsadura saihestea da, horrela zutabearen bizitza luzatzea. Zutabe mota desberdinetarako, dagokion paketatzea duten babes-zutabeak hautatu behar dira. Erreparatu zutabe-nukleoaren iraungitze-datari, aldizka ordezkatu behar dena.

Zutabearen tenperatura-ganberaren helburua zutabearen tenperatura konstantea mantentzea da, atxikipen-denboran aldaketak saihesteko eta bereizketaren egonkortasuna bermatzeko.

F. Detektagailua

Detektagailua zutabeak banandu ondoren isuriaren konposizioa eta edukiaren aldaketak etengabe kontrolatzeko erabiltzen den gailua da eta hiru osagai nagusietako bat da. HPLC tresna. HPLC detektagailuak sentsibilitate handia, zarata txikia, gama lineal zabala, errepikakortasun ona eta aplikazio sorta zabala behar ditu.

G. Datuak tratatzeko sistema

Laginak bereiztea, prestatzea edo identifikatzea behar bezala egin ahal izateko saiakuntza-datuak biltzeko, gordetzeko, bistaratzeko, inprimatzeko eta prozesatzeko eragiketak dira datuak prozesatzeko sistemaren funtzioak.

2. HPLC vs FPLC

hplc-fplc

Zer da FPLC kromatografia?

FPLC proteina azkarren kromatografia likido gisa ere ezagutzen da. FPLCren printzipioa errendimendu handiko kromatografia likidoaren antzekoa da. Likido-kromatografia modernoa da, zutabe-kromatografia klasikotik gas-kromatografia-teoria sartuz eta fase-gorputza erreformatuz, presio handiko infusio-ponpa batekin, sentikortasun handiko detektagailuarekin, gradientezko eluzio-gailuarekin, bilketa automatikoko gailuarekin eta mikroordenagailuarekin.

FPLC sistema proteinak, peptidoak eta polinukleotidoak bereizteko bereziki diseinatuta dago, eta hori azken urteotan FPLCren berrikuntza garrantzitsua da. HPLCren ezaugarriak mantentzen ditu, hala nola bereizmen azkarra eta altua, baina zutabe-ahalmen handia, berreskuratze-eraginkortasun handia eta makromolekula biologikoen desaktibazio txikiagoaren ezaugarriak ditu. Hori dela eta, azken urteotan asko erabili da proteinak, peptidoak eta oligonukleotidoak bereizteko.

HPLC sistemen eta FPLC sistemen arteko antzekotasunak eta desberdintasunak

antzekotasunakDesberdintasunakAplikazio
HPLCBiak infusio-ponpak, sentsibilitate handiko detektagailuak, gradientea elutzeko gailuak, bilketa automatikoko gailuak eta kontrol informatikoa dituzte, eta biak bizkortasuna, bereizmen handia eta bereizketa eraginkortasun handia dute.a. HPLC kanalizazio-sistema batez ere metalezkoa da.
b. Fase mugikorra ponpa alternatiboek edo diafragma-ponpak gidatzen dute.
c. Presio handia, zutabearen barne-diametro txikia eta zehaztasun analitiko handia ditu.
d. Gehienezko emaria normalean ez da 20 ml/min gainditzen (HPLC prestatzaile batzuk 300 ml/min irits daitezke).
e. Batzuetan disolbatzaile organiko kontzentrazio jakin bat erabiltzea eskatzen du, eta mikrolaginak detektatzeko edo arazketa kopuru txikiak prestatzeko egokia da.
HPLCk irakite-puntu baxuko masa molekular erlatibo baxuko molekulak, irakite-puntu ertaineko molekulak, konposatu organiko molekular altuak (polarrak eta ez-polarrak barne), konposatu ioniko ez-organikoak eta termikoki ezegonkorrak diren biomolekulak azter ditzake.
FPLCa. FPLC-ren hodi sistema presio handiko plastikozko hodiez osatuta dago.
b. Fase mugikorra, batez ere, enbolo-ponpa batek gidatzen du.
c. Presio ertain eta baxuaren eta zutabearen barne-diametro handiaren ezaugarriak ditu.
d. Fluxu-abiadura 0-100 ml/min (gehienezko emaria 1,000 ml/min arte).
e. Zehaztasun analitikoa ez da HPLCrena bezain handia, eta ohiko gatz-disoluzio ez-organikoak soilik erabiltzen dira.
f. Laginak eskala handiko arazketarako egokia da.
FPLC proteinak, peptidoak eta polinukleotidoak bereizteko eta arazteko bereziki diseinatuta dago.

Nola erosi HPLC sistema?

ANTITECK ematen laborategiko ekipoak, laborategiko kontsumigarriak, bizitza zientzien sektoreko ekipamenduak fabrikatzeko.
Gurea interesatzen bazaizu HPLC sistema edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.


    Cookieak erabiltzen ditugu gure webgunean ahalik eta esperientzia onena eskaintzeko. Gune hau erabiltzen jarraituz gero, cookieen erabilera onartzen duzu.
    Onartu
    Pribatutasun politika