Krio Hodiak

Edukia
1. Zer dira kriohodiak?
    1.1 Hodi krio-tamainak
2. Kriohodien ezaugarriak
    2.1 Kriohodien segurtasuna
    2.2 Kriohodien estalkiak
    2.3 Kriohodien abantailak
3. Kriohodiak erabiltzea
4. Nola erosi kriohodiak?

Ikerketa eta prozesu biomedikoetan emaitzen erreproduzigarritasuna eta jarraitutasuna bermatzeko, gaur egungo zientzialariek zelula eta organismo bizidunak bideragarritasun optimoarekin zaintzeko eta azido nukleikoak eta proteinak bezalako osagai azpizelularrak aldatu gabe mantentzen dituzte. Kriohodiak, ere ezaguna biltegiratze kriogenikoak, saio-hodi mota berezi bat dira. Laginak kriogenikoki gordetzeko erabil daitezke, odol osoa, seruma, zelulak eta abar bezalako laginak kontserbatzeko. Oro har, industria biologikoan, farmazia industrian eta elikagaien industrian aplikatzen dira tenperatura baxuko material biologikoak garraiatzeko eta biltegiratzeko eramaile gisa.

Kriohodi guztiak ezin dira nitrogeno likidorako erabili, kriogenikoak nitrogeno likidorako ontziak nitrogeno likidoaren tenperatura eskakizunei erantzuteko diseinatuta daude. Zigilatze handiko eta tenperatura baxuko erresistentzia duten kriohodi bereziak dira.

Ez dago sailkapen zehatzik krio hodi, oro har, ahalmenaren arabera banatzen da honela:

Kriohodiak Laginak tenperatura baxuetan gordetzeko erabiltzen diren laborategiko hodiak dira. Erabilera desegokia kriotudioa leherketak eragin ditzake, eta, ondorioz, material arriskutsuak isurtzen dira eta, kasu larrietan, baita zauriak ere. Arriskua murrizteko krio hodi leherketa, mesedez jarri arreta jarraibide hauek erabiltzean.

a. Krio-tutua normalean dentsitate handiko polietilenoz edo polipropilenoz egina dago. Bi kategoriatan bana daiteke erabilera eszenatoki ezberdinen arabera. Bat da zelula-hazkuntzarako kriohodiak eta bestea da nitrogeno likidorako kriohodiak. Bi mota hauek kriohodiak arretaz bereizi behar dira erosi eta erabili aurretik, aplikatzekoak diren tenperaturak bereziki desberdinak baitira.

b. Denak kriotudiak silikonazko junta bat, gomazko junta bat edo O-ring junta bat izan behar du, zigilu estua bermatzeko. Kontuan izan tapoia gehiegi estutzeak zigilua deformatu dezakeela.

c. Kriohodiak nitrogeno likidoaren gainetik gas fasean gorde behar da eta ez likidoan murgildu nitrogeno likidoa hodietan sartzea ekiditeko. Biltegiratzeko edukiontziak gainezka egotea saihestu behar da. Laginak fase likidoan gorde behar badira, kanpoko zigilu osagarria eskaintzen duen hornitzaile fidagarri baten babes-manuka profesional bat erabiltzea gomendatzen da.

d. Zelulak izoztean eta biltegiratzean, hodien izozte-tenperatura uniformea ​​izan behar da. Izozte irregularrak hodian izotz-tapoiak sortuko dira. Izotz tapoiek fluidoen tenperaturaren transferentzia eragotzi dezakete bi aldeetatik, presio arriskutsu altuak sortuz eta hodiari kalteak eraginez.

e. Ez izoztu lagin gehiago lan-bolumen maximoa baino krio hodi muga.

f. Denak cryo hodiak lehertzeko aukera dute. Batez ere, kriohodiak nitrogeno likidoaren azpian gordetako laginak edukitzeko erabiltzen dena, abisurik gabe eztanda egin dezake. Hodiaren leherketa uste da nitrogeno likidoa pitzadura txikietatik sartu eta gero hodia desizoztu ahala azkar hedatu zelako. Beraz, segurtasun-ekipoak erabili behar dira funtzionamendu osoan zehar krio-ontzia izotz-out. Eragiketa hau egiterakoan aurpegiko ezkutua, betaurrekoak, eskularru astunak eta botoidun laborategiko bata eraman behar dituzu praka edo gona luze baten gainean. Kriohodiak desizoztean, atera eta berehala 37 °C-ko ur-bainu batean jarri behar dituzu. Ondoren, astiro-astiro astindu behar duzu hodia minutu 1 barru desizozteko. Kontuz ibili urak izozkailuko hodiaren estalkiaren ertza gainditzen ez duela, bestela, kutsadura gerta daiteke. Udan barruko tenperatura altua denez, kontu handiz ibili behar da hozkailu hodietara sartzerakoan.

Lekuaren estalkia krio hodi bi motatan banatzen da: barruko torloju-tapa eta kanpoko torloju-tapa.

Kriohodiak barne torlojuzko tapoiekin lagin biologikoak nitrogeno likidoan izozteko erabiltzen dira. Hodiaren ahoan dagoen silikonazko juntagailuak hodiaren zigilatzea hobetzen du, nitrogeno likidoaren infiltrazioa modu eraginkorrean geldiarazteko.

Hozkailuan laginak izozteko kanpoko torlojuzko tapoiak dituzten kriohodiak erabiltzen dira. Kanpoko torlojuzko tapoi hariztatua laginak manipulatzean kutsatzeko probabilitatea murrizten du.

a. Txapela erraz biratu eta irekitzeko diseinatuta dago.

b. Bi hodi-kapa eta hodi-gorputza lote eta polipropilenozko (PP) material beretik ekoizten dira. PP iraunkorra eta kimikoki erresistentea da. Hedapen-koefiziente berak bermatzen du krio-hodiaren zigilatzea edozein tenperaturatan.

c. Markatzeko eremu zabala erraz idazteko.

d. Hodia gardena da, lagina erraz ikusteko.

e. Irakiten eta autoklabea, RNasa/DNasarik gabekoa, bero-iturririk gabe.

f. Kriohodiaren hondo biribilaren diseinuak likidoak isurtzea errazten du eta hondarrak murrizten ditu.

Funtzioa kriohodiak laginak tenperatura baxuetan kontserbatzea da. Tenperatura baxuko erresistentzia hobea du EP hodiak baino. Orokorrean, materiala hauskorra bihurtzen da tenperatura jaitsi ahala, eta izoztutako hodiaren hauskortasun tenperatura baxuagoa da.

Zelulak denbora luzez kontserbatzeko egungo metodoa nitrogeno likidoan (-196 °C) izoztea da, urtebetez edo hainbat urtez. Erabiltzeko unean desizoztuta daudenean oraindik zelula gehienak hazi eta ugal daitezke. Biltegiratze egokia lortzeko, zelulak suspertu eta hazi behar dira urtebete izoztu ondoren eta, ondoren, berriro izoztu. Zelulak izoztean babes-agenteak gehitu behar dira, bestela, zelulen barruko eta kanpoko urak izotz kristalak sortuko ditu eta zelulak kalte mekanikoak eragingo ditu. Izozte-puntua jaitsi daiteke babes-agente bat gehituz. Izozte geldoaren baldintzapean, zelula barruko ura izoztu aurretik isurtzen da izotz kristalak kalteak saihesteko. Gainera, liofilizazio-soluzioari kultura-fluidoa gehitzen zaio elikadura, presio osmotikoa eta pH-a emateko. Zelula berreskuratzeak izoztutako zelulak desizozteari egiten dio erreferentzia. Desizozte zelulak azkarra izan behar du -5 ℃ eta 0 ℃ ahulenetatik azkar igaro daitezen.

Erabilera krio hodi ez da lehen bezalako prozesu sinple bat, nitrogeno likidoaren depositua irekitzea; bigarrena, hodiak jartzea; hirugarrena, depositua ixtea. Erabiltzerakoan segurtasun arrisku batzuk daude cryo hodiak, beraz, horien erabilera zientifiko eta zuzenak laginak galtzea saihestu eta probako langileen segurtasuna babestu dezake.

a. Garbitu zelulak aurrez berotutako PBS soluzio batekin. Aspirazioaren unean tripsina eta EDTA dituen disoluzio batekin estali zelulak, likido geruza mehe bat nahikoa da. Tripsinaren eta EDTAren kontzentrazioa zelularen lerroaren arabera zehaztu behar da.

b. Inkubatu zelulak 37 °C-tan 3-5 minutuz.

c. Zelulak behetik kendu ondoren, amaitu inkubazioa. Gehitu seruma duen medioa eta astiro-astiro eseki zelulak pipeta batekin.

d. Zentrifugatu zelulen esekidura (500 xg, 5 min) eta suspentsatu berriro seruma duen medio batekin.

e. Zelula zenbaketa.

f. Zentrifugatu zelula esekidura (500 xg, 5 min). Kendu gainditzailea eta suspendatu berriro zelulak seruma duen medio bolumen egoki batekin.

g. Zelulak eta liofilizazio-soluzioa (% 60 ertaina, % 20 fetal behi-seruma, % 20 DMSO) 1:1 bolumen proportzioan nahasten dira eta hodi kriogenikoetara transferitzen dira. Izoztutako zelulen dentsitatea 1-5 × 106 zelula/ml da.

h. Zelulak dituzten kriohodiak -1 K/min-ko abiaduran hoztea gomendatzen da eta isopropanola duen ontzi batean jar daitezke -70 °C-tan. Hodiak beste lagin batzuk gordetzeko erabiltzen badira, zuzenean -20 °C, -70 °C edo nitrogeno likidoaren gas fasean jar daitezke. Laginak izozte uniformea ​​bermatzeko, 4 ml eta 5 ml kriohodiak -20 °C-ko hozkailuan jarri behar dira gau osoan -70 °C-ra edo nitrogeno likidora igaro aurretik, gas fasean.

i. Ondoren, transferitu hodiak nitrogeno likidoko depositu batera. Kutsadura saihesteko eta segurtasun arrazoiengatik, hobe da kriohodiak nitrogeno likidoaren gas fasean jartzea, ez zuzenean fase likidoan jartzea. (Kontuz: biltegiratze-metodo okerrak erabiltzen badituzu, krio-hodian geratzen den nitrogeno likidoa substantzia arriskutsu biologikoen leherketa edo isurketa eragingo du lurruntzearen ondorioz).

a. Atera kriohodia nitrogeno likidotik pinza handiekin eta jarri uretan 37 ℃ eta 42 ℃ arteko tenperaturan. Astindu noizean behin -5 eta 0 ℃ azkar igaro dadin. Etengabe astindu -5 eta 0 ℃ azkar igarotzeko.

b. Mahai ultra-garbian, kriotudiaren lepoa gurpil urratzaile batekin igurtzi eta alkoholdun kotoi bolekin esterilizatu behar da. Ondoren, ireki kriohodia, aspiratu zelula esekidura kultiboko matraz batean, diluitu 10×tan eta inkubatu CO2 inkubagailu batean. Hurrengo egunean, izozte-medioa kultura-euskarri fresko batekin ordezkatu behar da.

Gurea interesatzen bazaizu cryo hodiak edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.