Krio Hodiak
Zer dira kriohodiak?
Ikerketan eta prozesu biomedikoetan emaitzen erreproduzigarritasuna eta jarraitutasuna bermatzeko, gaur egungo zientzialariek zelula eta organismo bizidunak bideragarritasun optimoarekin kontserbatzea eta azido nukleikoak eta proteinak bezalako osagai subzelularrak aldatu gabe mantentzea dute helburu. Kriohodiak, ere ezaguna biltegiratze kriogenikoak, mota berezi bat dira hodi probaLaginak kriogenikoki gordetzeko, odol osoa, seruma, zelulak eta abar bezalako laginak kontserbatzeko erabil daitezke. Oro har, industria biologikoan, industria farmazeutikoan eta elikagaien industrian erabiltzen dira, material biologikoak tenperatura baxuko garraio eta biltegiratzeko euskarri gisa.
Kriohodi guztiak ezin dira nitrogeno likidorako erabili, kriogenikoak nitrogeno likidorako ontziak nitrogeno likidoaren tenperatura eskakizunei erantzuteko diseinatuta daude. Zigilatze handiko eta tenperatura baxuko erresistentzia duten kriohodi bereziak dira.
Hodi krio-tamainak
Ez dago sailkapen zehatzik krio hodi, oro har, ahalmenaren arabera banatzen da honela:
| Kriohodien tamainak |
|---|
| 0.5 ml-ko ontzi kriogenikoak |
| 1 ml-ko hodi kriogenikoak / 1 ml-ko hodi kriogenikoak |
| 1.5 ml hodi kriogenikoak / viales kriogenikoak 1.5 ml / hodi kriogenikoak 1.5 ml |
| 1.8 ml kriotubo / criotubo 1.8 ml |
| 2 ml-ko hodi kriogenikoak / kriobial 2ml / kriohodiak 2ml / 2ml viales kriogenikoak / viales kriogenikoak 2ml / 2ml kriohodiak |
| 4 ml-ko hodi kriogenikoak |
| 5 ml kriobial / 5 ml hodi kriogenikoak / 5 ml kriohodi / kriotutu 5 ml / kriobial 5 ml |
| 7 ml-ko hodi kriogenikoak |
| 10 ml-ko hodi kriogenikoak |
Kriohodien ezaugarriak
Kriohodien segurtasuna
Kriohodiak Laginak tenperatura baxuetan gordetzeko erabiltzen diren laborategiko hodiak dira. Erabilera desegokia kriotudioa leherketak eragin ditzake, eta, ondorioz, material arriskutsuak isurtzen dira eta, kasu larrietan, baita zauriak ere. Arriskua murrizteko krio hodi leherketa, mesedez jarri arreta jarraibide hauek erabiltzean.
a. Krio-tutua normalean dentsitate handiko polietilenoz edo polipropilenoz egina dago. Bi kategoriatan bana daiteke erabilera eszenatoki ezberdinen arabera. Bat da zelula-hazkuntzarako kriohodiak eta bestea da nitrogeno likidorako kriohodiak. Bi mota hauek kriohodiak arretaz bereizi behar dira erosi eta erabili aurretik, aplikatzekoak diren tenperaturak bereziki desberdinak baitira.
| Kriohodien tamainak |
|---|
| 0.5 ml-ko ontzi kriogenikoak |
| 1 ml-ko hodi kriogenikoak / 1 ml-ko hodi kriogenikoak |
| 1.5 ml hodi kriogenikoak / viales kriogenikoak 1.5 ml / hodi kriogenikoak 1.5 ml |
| 1.8 ml kriotubo / criotubo 1.8 ml |
| 2 ml-ko hodi kriogenikoak / kriobial 2ml / kriohodiak 2ml / 2ml viales kriogenikoak / viales kriogenikoak 2ml / 2ml kriohodiak |
| 4 ml-ko hodi kriogenikoak |
| 5 ml kriobial / 5 ml hodi kriogenikoak / 5 ml kriohodi / kriotutu 5 ml / kriobial 5 ml |
| 7 ml-ko hodi kriogenikoak |
| 10 ml-ko hodi kriogenikoak |
b. Guztiak kriotudiak silikonazko junta bat, gomazko junta bat edo O-ring junta bat izan behar du, zigilu estua bermatzeko. Kontuan izan tapoia gehiegi estutzeak zigilua deformatu dezakeela.
c. Kriohodiak nitrogeno likidoaren gainetik gas fasean gorde behar da eta ez likidoan murgildu nitrogeno likidoa hodietan sartzea ekiditeko. Biltegiratzeko edukiontziak gainezka egotea saihestu behar da. Laginak fase likidoan gorde behar badira, kanpoko zigilu osagarria eskaintzen duen hornitzaile fidagarri baten babes-manuka profesional bat erabiltzea gomendatzen da.
d. Zelulak izoztu eta biltegiratzean, hodien izozte-tenperatura uniformea izan behar da. Izozte irregularrak izotz-tapoiak sortzea eragingo du hodian. Izotz-tapoiek fluidoaren tenperaturaren transferentzia oztopatu dezakete bi aldeetan, presio arriskutsuak sortuz eta hodiari kalteak eraginez.
e. Ez izoztu lagin gehiago lan-bolumen maximoa baino. krio hodi muga.
f. Guztiak cryo hodiak lehertzeko aukera dute. Batez ere, kriohodiak nitrogeno likidoaren azpian gordetako laginak edukitzeko erabiltzen dena, abisurik gabe eztanda egin dezake. Hodiaren leherketa uste da nitrogeno likidoa pitzadura txikietatik sartu eta gero hodia desizoztu ahala azkar hedatu zelako. Beraz, segurtasun-ekipoak erabili behar dira funtzionamendu osoan zehar krio-ontzia izotz-irteera. Jantzi beharko zenuke aurpegia, betaurrekoak, eskularru astunak eta botoidun bat laborategiko armarria Eragiketa hau egiterakoan, praken edo gona luze baten gainetik eraman behar da. Kriohodiak desizoztean, 37 °C-ko ur-bainu batean sartu behar dira atera bezain laster. Ondoren, hodia astiro-astiro astindu behar da minutu 1ean desizozteko. Kontuz ibili urak izozkailu-hodiaren estalkiaren ertza ez gainditzeko, bestela kutsadura gerta daiteke. Udan barruko tenperatura altua denez, kontu handiz ibili behar da hoztutako hodietara sartzean.
Cryohodien estalkiak
Lekuaren estalkia krio hodi bi motatan banatzen da: barneko torloju-tapoia eta kanpoko torloju-tapoia.
Cryohodien barneko torloju-kapa
Kriohodiak barne torlojuzko tapoiekin lagin biologikoak nitrogeno likidoan izozteko erabiltzen dira. Hodiaren ahoan dagoen silikonazko juntagailuak hodiaren zigilatzea hobetzen du, nitrogeno likidoaren infiltrazioa modu eraginkorrean geldiarazteko.
Cryohodien kanpoko torloju-kapa
Hozkailuan laginak izozteko kanpoko torlojuzko tapoiak dituzten kriohodiak erabiltzen dira. Kanpoko torlojuzko tapoi hariztatua laginak manipulatzean kutsatzeko probabilitatea murrizten du.
Cryohodien abantailak
a. Tapoia erraz biratu eta irekitzeko diseinatuta dago.
b. Bai hodiaren tapa, bai hodiaren gorputza polipropileno (PP) material eta multzo berdinarekin ekoizten dira. PP iraunkorra eta kimikoki erresistentea da. Hedapen-koefiziente berak kriogen hodiaren zigilua bermatzen du edozein tenperaturatan.
c. Idazketa errazteko markatze-eremu handia.
d. Hodia gardena da, lagina erraz ikusteko aukera emanez.
e. Irakiteko eta autoklabatzeko modukoa, RNasa/DNasarik gabekoa, bero-iturririk gabea.
f. Kriohodiaren hondo biribilduaren diseinuak likidoak isurtzea errazten du eta hondakinak murrizten ditu.
Kriohodiak erabiltzea
Funtzioa kriohodiak laginak tenperatura baxuetan kontserbatzea da. Tenperatura baxuko erresistentzia hobea du EP hodiak baino. Orokorrean, materiala hauskorra bihurtzen da tenperatura jaitsi ahala, eta izoztutako hodiaren hauskortasun tenperatura baxuagoa da.
Zelulak denbora luzez kontserbatzeko egungo metodoa nitrogeno likidoan (-196 °C) izoztea da, urtebetez edo hainbat urtez ere. Zelula gehienak hazi eta ugaldu daitezke erabiltzen direnean desizozten direnean ere. Biltegiratze egokia lortzeko, zelulak berpiztu eta urtebete izoztu ondoren landu behar dira, eta gero berriro izoztu. Babes-agenteak gehitu behar dira zelulak izoztean, bestela, zelulen barruko eta kanpoko urak izotz kristalak sortuko ditu eta kalte mekanikoak eragingo dizkie zelulei. Izozte-puntua jaitsi daiteke babes-agente bat gehituz. Izozte motelaren baldintzetan, zelularen barruko ura isurtzen da izoztu aurretik, izotz kristalen kalteak saihesteko. Horrez gain, hazkuntza-fluidoa gehitzen zaio... liofilizazioa disoluzioa nutrizioa, presio osmotikoa eta pHa emateko. Zelulen berreskurapenak zelula izoztuak desizoztea esan nahi du. Zelulak desizoztea azkarra izan behar da, -5 ℃ eta 0 ℃ arteko tenperatura zaurgarrienak azkar igaro daitezen.
Erabilera krio hodi ez da lehenik irekitzea bezalako prozesu sinple bat nitrogeno likidoaren depositua; bigarrenik, hodiak sartzea; hirugarrenik, depositua ixtea. Segurtasun arrisku batzuk daude erabiltzean cryo hodiak, beraz, horien erabilera zientifiko eta zuzenak laginak galtzea saihestu eta probako langileen segurtasuna babestu dezake.
Zelulak izozteko urratsak
a. Garbitu zelulak aurrez berotutako PBS soluzio batekin. Estali zelulak tripsina eta EDTA dituen soluzio batekin xurgatzen duzunean, likido geruza fin bat nahikoa da. Tripsina eta EDTAren kontzentrazioa zelula-lerroaren arabera zehaztu behar da.
b. Inkubatu zelulak 37 °C-tan 3-5 minutuz.
c. Zelulak hondotik askatu ondoren, amaitu inkubazioa. Gehitu seruma duen medioa eta jarri zelulak pipeta batekin astiro-astiro esekituta.
d. centrifuge Zelulen esekidura (500 xg, 5 min) eta seruma duen ingurune batekin berriro eseki.
e. Zelulen zenbaketa.
f. Zelulen esekidura zentrifugatu (500 xg, 5 min). Gainnatzailea kendu eta zelulak berriro eseki seruma duen medio bolumen egoki batekin.
g. Zelulak eta liofilizazio-soluzioa (% 60 medioa, % 20 behi-fetuaren seruma, % 20 DMSO) 1:1 bolumen-erlazioan nahasten dira eta hodi kriogenikoetara eramaten dira. Izoztutako zelulen dentsitatea 1-5×106 zelula/ml da.
h. Zelulak dituzten kriohodiak -1 K/min-ko abiaduran hoztea gomendatzen da eta isopropanola duen ontzi batean jar daitezke -70 °C-tan. Hodiak beste lagin batzuk gordetzeko erabiltzen badira, zuzenean jar daitezke -20 °C-tan, -70 °C-tan edo nitrogeno likidoaren fase gaseosoan. Laginen izozketa uniformea bermatzeko, 4 ml-ko eta 5 ml-ko kriohodiak -20 °C-ko hozkailuan jarri behar dira gau osoan zehar, -70 °C-ra edo nitrogeno likidora fase gaseosoan transferitu aurretik.
i. Ondoren, hodiak nitrogeno likidoaren depositu batera eraman. Kutsadura saihesteko eta segurtasun arrazoiengatik, hobe da krio-hodiak nitrogeno likidoaren gas-fasean jartzea, ez zuzenean fase likidoan jartzea. (Kontuz: biltegiratze-metodo okerrak erabiltzen badituzu, krio-hodian geratzen den nitrogeno likidoak leherketa edo substantzia bioarriskutsuen isuria eragingo du lurrunketaren ondorioz.)
Zelula berreskuratzeko urratsak
a. Atera kriohodia nitrogeno likidotik pintza handiekin eta sartu uretan 37 ℃ eta 42 ℃ arteko tenperaturan. Astindu noizean behin -5 eta 0 ℃ artean azkar igaro dadin. Astindu etengabe -5 eta 0 ℃ artean azkar igaro dadin.
b. Mahai ultragarbian, kriohodiaren lepoa gurpil urratzaile batekin igurtzi eta alkohol kotoizko bolekin esterilizatu behar da. Ondoren, ireki kriohodia, aspiratu zelula-suspentsioa kultura batera. matrazea, 10×-tan diluitu eta CO2 batean inkubatu haztegiHurrengo egunean, izozte-ingurunea hazkuntza-ingurune fresko batekin ordezkatu behar da.
Nola erosi krio hodiak?
Gurea interesatzen bazaizu Krio Hodiak edo zalantzaren bat baduzu, idatzi e-mail bat info@antiteck.com helbidera, ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.