Kromatografia Zutabea
Zer da kromatografia-zutabea?
Zutabe kromatografikoa paketatutako zutabeetan eta hodi irekiko zutabeetan bana daiteke. Gehienak zutabe kromatografikoak metalezko edo beirazkoak dira. Hodi zuzenak, kiribildutako hodiak, U itxurako hodiak eta beste forma batzuk daude. Kromatografia likidoa normalean pilatutako zutabeak erabiltzen ditu. Zutabe kromatografikoen bereizketa-efektua aukeratutako fase geldiaren araberakoa da, baita zutabeen prestaketa eta funtzionamendu-baldintzen araberakoa ere.
kromatografia bereizteko eta analisirako bitarteko bat da, eta bereizketa da muina, beraz, bereizketaz arduratzen den zutabea sistema kromatografikoaren bihotza da. Eskakizunak zutabe kromatografikoa zutabe-eraginkortasun handia, selektibitate ona, analisi-abiadura azkarra, etab. HPLCrako komertzialki eskuragarri dauden partikula-bilketa ugari daude, hala nola, silize porotsua eta silizean oinarritutako loturiko fasea, alumina, polimero organikoen mikroesfera (ion truke erretxinak barne), karbono porotsua. , etab., bere partikulen tamaina, oro har, 3,5,7,10μm, etab. izan arren, zutabearen eraginkortasunaren balio teorikoa 5 ~ 160,000 / m-ra irits daiteke. Azterketa orokorrak plaka kopuruaren 5000 zutabe-eraginkortasuna baino ez du behar; homologoen analisia 500 izan daiteke; material bikoteak bereizteko zailtasun gehiago erabil daitezke 20,000 zutabe arte. Hori dela eta, 10 ~ 30 cm inguruko zutabeen luzera nahikoa da nahaste konplexuak aztertzeko.
Zutabearen eraginkortasuna zutabearen barruko eta kanpoko faktoreek eragiten dute, eta zutabearen eraginkortasun onena lortzeko, zutabearen kanpoaldeko bolumen hil txiki batez gain, zutabe egitura zentzuzko bat (paketatutako ohetik kanpo hildako bolumena gutxituz) eta kargatzeko teknologia. beharrezkoak dira. Kargatzeko teknika onena izanda ere, zutabearen erdiko zatian eta hormaren zatian betetzea beti desberdina da. Hormaren ondoan dagoen zatia solteagoa da, lubaki-fluxua ekoizteko errazagoa eta fluxu-abiadura azkarragoa da, eta horrek garbiketa-agentearen fluxu-formari eragiten dio eta banda espektrala zabaltzen du, hau da, hormaren efektua. Hodiaren horma-eremu hau hodiaren hormatik barrurantz zenbatutako partikulen tamainaren lodiera baino 30 aldiz handiagoa da. Kromatografia likidoko sistema orokor batean, zutabetik kanpoko efektuak zutabearen eraginkortasunean duen eragina hodiaren hormaren eragina baino askoz handiagoa da.
Nahiz eta kargatzeko teknika onena izan, zutabearen erdiko zatian eta hormaren zatian betetzea beti desberdina da. Hormaren ondoan dagoen zatia solteagoa da, lubaki-fluxua ekoizteko errazagoa eta fluxu-abiadura azkarragoa da, eta horrek garbiketa-agentearen fluxu-formari eragiten dio eta banda espektrala zabaltzen du, hau da, hormaren efektua. Hodiaren horma-eremu hau hodiaren hormatik barrurantz zenbatutako partikulen tamainaren lodiera baino 30 aldiz handiagoa da. Kromatografia likidoko sistema orokor batean, zutabetik kanpoko efektuak zutabearen eraginkortasunean duen eragina hodiaren hormaren eragina baino askoz handiagoa da.
Kromatografia-zutabearen egitura
Zutabe kromatografikoa zutabe-hodi batez, presio-tapoi batez, ferrulaz (zigilatzeko eraztunez), bahe-plakaz osatuta dago (iragazi plaka), juntura, torlojuak, etab. zutabe-hodi gehienbat altzairu herdoilgaitzezkoa da, eta presioa 70 kg/cm2 baino handiagoa ez denean, horma lodiko beira edo kuartzozko hodiak ere erabil daitezke, eta hodiaren barruko hormak akabera maila handia behar du. Zutabe efektua hobetzeko eta hormaren efektua murrizteko, altzairu herdoilgaitzezko zutabeen horma leuntzeko. Fluorozko plastikoz estalitako altzairu herdoilgaitzezko zutabeen horman jendea ere badago barruko hormaren akabera hobetzeko, efektua leuntzearen berdina da. Silice fundituaren edo beirazko estalduraren erabilera ere badago, hodi finetako zutabeetarako. Zutabe kromatografikoaren bi muturretako zutabe-junturak bahe-plaka bat dute barruan, altzairu herdoilgaitzezko edo titaniozko aleazio sinterizatua 0.2~20μm (5~10&μm) irekidura duena, betegarriaren partikulen tamainaren arabera. betegarria isuri ez dadin.
Zutabe kromatografikorako bilgarriak
Zutabeen bilketa arrunta: karbono 18 zutabea [1] (ODS/C18), karbono 8 zutabea (MOS/C8), karbono 6 zutabea (Hexyl/C6), karbono 4 zutabea (Butyl/C4), karbono 1 zutabea (Metil/C1). ), anioi-trukearen zutabea (SAX), katioi-trukearen zutabea (SCX), fenilo-zutabea (feniloa), amino zutabea (Amino/NH2), zianuroan oinarritutako zutabeak (Cyano/CN/Nitrilo).
Adsortzio-zutabeen bilketa arrunta: silize gel zutabea.
Kromatografia-zutabe mota
Zutabe kromatografikoa analitiko eta prestatzaileetan banatu daitezke, haien erabileren eta tamaina ezberdinen zehaztapenen arabera, honela.
a. Ohiko zutabe analitikoa (zutabe konstantea), barne-diametroa 2~5 mm (normalean erabiltzen dena 4.6 mm, etxekoa 4 mm eta 5 mm), zutabe-luzera 10~30 cm.
b. Diametro estuko zutabea (zulo estua, hodi fineko diametroko zutabea, erdi-mikrozutabea bezala ere ezagutzen dena), barne-diametroa 1 ~ 2 mm, zutabearen luzera 10 ~ 20 cm.
c. Kapilar-zutabea (mikrozutabe ere deitua), barne-diametroa 0.2~0.5 mm-koa.
d. Zutabe erdi-prestatiboak, barne-diametroa >5 mm-koa.
e. 20~40 mm-ko barne-diametroa eta 10~30 cm-ko zutabe-luzera duten laborategiko prestaketa-zutabeak.
f. Ekoizpen-prestaketa zutabeen barne-diametroa hamarnaka zentimetro batzuetara irits daiteke. Zutabearen barne-diametroa, oro har, zutabearen luzeraren, paketatze-partikulen tamainaren eta tolestutako emari-tasaren arabera zehazten da, hodi-hormaren efektua saihesteko helburuarekin.
Kromatografia-zutabearen erabilera
Ioi-trukearen kromatografia
A. Instalazioa
a. Lehenik eta behin, zutabearen eta tresnaren konektoreak eta hodiak bat datozela baieztatu behar duzu. Bolumen hila murrizteko, erabili barne-diametro txikiena duen hodi bat injekzio-balbularen, zutabearen eta detektagailuaren arteko konexiorako, eta kontrolatu injektorearen, zutabearen eta detektagailuaren arteko konexio-hodiaren luzera. Zutabea instalatu aurretik, baieztatu fluxu-bideko sistemako disolbatzailea ondo dagoela. Lagin konplexuagoen analisietarako, babes-zutabe bat instalatzea gomendatzen da.
b. Zutabearen eta tresna-sistemaren arteko konexio onena egiteko, zutabearen interfazearekin bat datorren torloju-tapoia eta konektore konikoa erabiltzen saiatu beharko zenuke. Jatorrizko konektorea beste zutabe mota batzuekin bat etorri bada denbora luzez, komenigarria da bat etortzea egiaztatzea zutabe berria konektatu aurretik, zutabeari kalterik edo zutabearen bat ez etortzeak eragindako isuririk ez eragiteko.
c. Erabili osagarri unibertsalak, eskuz estutu behar direnak giltza espezifikorik gabe, 5000 psi-ko presioarekin; erabilera-tenperaturak ez du 100 ℃-tik gorakoa izan behar.
B. Fase mugikorra
a. Erabili a fase mugikorra zutabearen bolumena gutxienez 20 aldiz zutabea guztiz orekatzeko laginaren detekzioa egin aurretik. Erabili beti maila kromatografikoko disolbatzaile bat fase mugikorrerako. Fase urtsua erabiltzen baduzu, egunero prestatu behar da fresko mantentzeko bakterioen ekoizpena saihesteko.
b. Fase mugikorra erabili aurretik mintz mikroporotsu batetik iragazi behar da, fase mugikorreko partikulek kromatografia-sistemari eta zutabeari kalterik ez egiteko. Bufferra berriro iragazi behar da beste fase mugikor batzuekin nahastu ondoren, disolbagarritasun-aldaketek eragindako prezipitazio berriak saihesteko. Ez da ur purua erabili behar fase mugikor gisa C18 zutabea garbitzeko, zutabearen errendimenduari kalterik ez egiteko (% 5eko disolbatzaile organikoa gehitzeak buffer-gatza aldi berean garbitzeko efektua lor dezake. (Horrek zutabea orekatzea erraztu dezake, gainera).
c. Fase mugikorra desgasifikatu eta erabili egin behar da ponparen eta detektagailuaren funtzionamendu desegokia saihesteko, aire burbuilen ondorioz. Proban erabilitako fase mugikorra zutabea kontserbatzeko erabilitako fase mugikorrarengandik nabarmen desberdina bada, gainbanaketa modua erabiliz orekatu behar da. Saihestu zutabeari eta tresna sistemari kalteak eragitea fase mugikorrean bat-bateko aldaketek zutabearen presioaren gehiegizko igoerak edo fase mugikorreko buffer gatzen kristalizazioa eragiten dutenek. Fase normaleko zutabeek orekatze denbora luzeagoa behar dute alderantzizko faseko zutabeek baino.
C. Laginaren prestaketa
a. Lagina fase mugikorrarekin elkarren artean disolbagarria den disolbatzaile batean disolbatu behar da, ahal den guztietan. Bestelakorik zehaztu ezean, zutabearen bereizmena murriztu egingo da ziurrenik disolbatzaile sendo bat erabiltzen bada lagina disolbatzeko.
b. Lagin-disoluzioa orratz-iragazki bat erabiliz iragazi behar da lagina sartu aurretik. Fase mugikorraren konposizioan maiz gertatzen diren aldaketek zutabearen eraginkortasuna murriztea bizkortuko dute.
c. Kromatografia-zutabea presio handiko homogeneizazio-metodo batekin kargatzen da eta presio handia jasan dezake. Bereizketa-efektu onena lortzeko, ez gainditu 200 kgf erabiltzean, eta saihestu presio-igoera edo -aldaketa bat-batekoak, bestela, silize-paketatzea suntsitu eta zutabearen bizitza erabilgarria murriztuko da. Funtzionamendu-tenperatura maximoak ez du 60 °C gainditu behar, bestelakorik eskatu ezean.
D. Gorde eragiketa
a. Fase mugikorrak azidoak edo gatz ez-organikoak baditu, lehenik ur desionizatuarekin garbitu behar da (zutabearen bolumenaren 20 aldiz handiagoa). Ondoren, zutabea % 100eko azetonitrilo edo metanolarekin kontserbatzen da. Azkenik, zutabea junturekin zigilatu eta ingurune egonkor batean gorde.
b. Zutabearen errendimendua galtzea saihesteko, zutabearen eragin mekaniko zuzena edo erorketa saihestu behar da.
E. Kromatografia-zutabeen birsorkuntza
Zutabeak zutabearen bolumenaren 20 aldiz baliokide den disolbatzaile batekin garbitu ziren hurrengo hurrenkeran, eta zutabearen geziaren norabidean garbitzea gomendatzen da, ahal izanez gero atzera bota gabe. Garbiketan erabilitako disolbatzaileen erreferentzia-sekuentzia ura, metanola, kloroformoa eta isopropanola dira.
Nola erosi kromatografia zutabea?
Gurea interesatzen bazaizu Kromatografia Zutabea edo zalantzaren bat baduzu, idatzi e-mail bat info@antiteck.com helbidera, ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.