katalogoa: Elisa Kit Fabrikaziorako ekipamendua
Optimizazioan puntu kritikoetako bat ELISA garbiketa da ELISA mikroplaka. ELISA plaka garbitzeko urratsak lotu gabeko antigorputzek eragindako atzeko seinalea murrizten du, eta, horrela, analisiaren seinale-zarata erlazioa areagotzen du. Graduen artean garbitzeak lotura-gertaera zehatzak bakarrik mantentzen direla bermatzen du, azken urratsean seinale bat sortuz. Garbiketa desegokiak desadostasunak eta atzeko plano altua ekar ditzake, eta emaitza ezin hobeak izan daitezke.
ELISA esperimentuak egiterakoan, ELISA mikroplakak garbitzeko bi modu daude: eskuzko metodoa ELISA plakak garbitzea eta plaka garbigailuak ELISA plakak garbitzeko. Ez dago bien artean ezinbesteko alderik, funtzionamendua eskakizunekin bat datorren bitartean, biek emaitza zuzenak eta fidagarriak lor ditzakete.
Eskuzko garbiketa ELISA plaka giza faktorea nahiko handia da, esperimentatzaileak esperientzia izan behar du, garbiketa kopurua nahikoa izan dadin, eragina ez da handiegia, garbiketa-soluzio kopurua erreakzio-putzu osoetara gehitzea muga gisa entzima librearekin poro-ahoa huts egin ez dadin. garbitzeko, poroaren eta zuloaren arteko likido gurutzapena saihestuz. Garbitu ondoren lehorra eustea ere oso garrantzitsua da, bestela, positibo faltsuak sortzea erraza da. Garbitu bakoitzaren ondoren, astiro-astiro, lehortu plaka paper xurgatzaile batean eta lehortu plaka bertikalki infekzio gurutzatuak saihesteko. Indarrak ez du bortitza izan behar antigeno-antigorputz konplexua askatzea saihesteko; paper xurgatzailea behin erabili behar da, eta hondakinak botatzeko erraza ez den paper xurgatzailea erabili behar den moduan. Entzima konjokatua ez da lehortzeko erresistentea, batez ere tenperatura altuetan, litekeena da desaktibatuta egotea, beraz, erreakzio-plaka lehorra kolpatu behar da airean esposizio-denbora ahalik eta gehien laburtzeko, zenbat eta denbora luzeagoa izan, orduan eta txikiagoa. absorbantzia-balioa.
Murgiltzea
1. Aspiratu edo astindu lehortu erreakzio-soluzioa ELISA mikroplaka.
2. Garbitu plaka behin garbiketa-disoluzioarekin (putzuak garbiketa-soluzioarekin bete ondoren, ondoren astindu).
3. Beratu, hau da, bete putzuak garbiketa-soluzioarekin, jarri 1 ~ 2 minutuz, astindu tarteka, bustitzeko denbora ez da nahi gabe laburtu behar.
4. Zuloan dagoen likidoa xurgatuz lehortu. Xurgatze lehorra sakona, eskuragarri dagoen ponpa edo Hutsean ponpa xurgapena, likidoa eskuoihal garbi batean edo paper xurgatzaile batean lehortu daiteke.
5. Errepikatu 3. eta 4. urratsak, 3 eta 4 aldiz garbituz (edo argibideetan zehaztutako moduan). Zeharkako metodoan hondoa handiagoa bada, garbiketa kopurua handitu edo beratzen denbora luzatu dezakezu.
Mikro titulazio plaka murgiltze-garbiketa metodoaren bidez erabiltzen da batez ere. Garbiketa soluzioa detergente ez-ionikoa duen tampon neutroa da gehienetan. Poliestireno-eramailearen eta proteinaren konbinazioa hidrofoboa da, eta detergente ez-ionikoak talde hidrofoboak eta hidrofiloak ditu, zeinen talde hidrofoboak proteina-talde hidrofobikoekin konbinatzen diren lotura hidrofoboen bidez, horrela proteina eta fase solidoko garraiatzaileen konbinazioa ahulduz, eta talde hidrofiloen eta ur molekulen konbinazioarekin, proteina ur-disoluzio egoerara itzultzen da, eta, horrela, fase solidoko eramailetik bereizten da.
Garbiketa-soluzioko detergente ez-ionikoa, oro har, Tween 20 da, eta horren kontzentrazioa % 0.05 eta % 0.2 artean egon daiteke, % 0.2 baino handiagoa, fase solidoan kapsulatutako antigenoa edo antigorputza desortzioan eta sentikortasuna murriztu dezake. proba.
Ur-fluxu mota
Ur jarioaren garbiketa metodoa hasieran aleak eramaile txikiak garbitzeko erabiltzen da, eta garbiketa-soluzioa ura destilatua edo iturriko ura baino ez da. Garbitzean, gailu berezi bat eransten da, ale txikiak etengabe bota eta dutxatu daitezen ur korrontearen eraginpean, eta 2 minutuz etengabe garbitu ondoren, likidoa xukatzen da, eta, ondoren, ur destilatuan bustitzen da 2 minutuz eta xukatu. . Beratze mota bainuontzi bat bezalakoa da, ura garbitzeko mota dutxa bat bezalakoa da, garbiketa-efektua sakonagoa da, eta, gainera, sinplea eta azkarra.
Esperimentuek frogatu dute garbiketa mota ELISA mikro titulazio plaken garbiketarako ere aplikagarria dela. Garbitzean, saiatu ur-emaria handitzen edo uraren presioa handitzen, utzi urak plakaren zuloaren gainazalean eragina, garbiketa-efektua hobea da.
Plater-garbigailua garbitzen da ELISA plakak giza faktore gutxirekin, baldintza azkar eta konstanteekin, baina honako hiru puntu gako hauek kontuan izan behar dira plakak garbitzeko plakak garbitzeko erabiltzean.
ELISA mikroplakak garbitzeko parametro nagusia garbiketa-bolumena da. Plater-garbigailu automatikoak garbiketa-soluzioa ematen du. Aurretik atzeko plano handia izan baduzu, ez izan zalantzarik garbiketa bolumena altuan ezartzeko, ahal izanez gero gutun-azaleko bolumena baino handiagoa. Garbiketa-soluzio gutxiegiak aztertutako gainazalaren zati bat garbitu gabe utziko du, eta horrela atzealdea nabarmen handituko du. Garbiketa-bolumena berdina izan behar da erreakzio-hobi guztietan.
ELISA mikroplaken garbiketaren eraginkortasunari eragiten dion parametro nagusia garbiketa-zikloen kopurua da. Jakina, zenbat eta garbiketa kopurua handiagoa izan, orduan eta atzeko planoa txikiagoa da. Hala ere, garbiketa gehiegik seinalearen intentsitatea murrizten du eta azterketa zaila izan daiteke. Ohikoa da garbiketa hiru aldiz errepikatzea antigorputz edo antigenoaren inkubazio bakoitzaren ondoren. Hala ere, orokorrean, bildutako plakek erabiltzaileek bildutako plakek baino garbiketa gutxiago behar dute. Erabiltzaileek estalitako ELISA mikroplaketarako, garbiketen maiztasuna optimizatu behar da.
Garbiketa kopurua eta kopurua kontrolatzeko beste modu bat garbiketa-soluzio sobera gehitzea da. Normalean, 96 putzuko plaka batek 330 eta 460 µl ditu putzu bakoitzeko. hala ere, plaka-garbigailu automatizatu batzuk programatu daitezke garbiketa-soluzio kopuru hori baino askoz gehiago emateko, adibidez, 1 ml. nola egiten du hau? Izan ere, nahiko erraza da: aspirazio funtzioa aktibatzen da banatzearekin batera. Beste era batera esanda, banatzaileak likido gehiago ematen duen heinean, aspiratzaileak ere likidoa xurgatzen du. Teknika honek garbiketa kopurua handitzen du, baina beste putzuetara isuri gabe.
ELISA plaka baten garbiketa-urratsaren eraginkortasunari eragiten dioten parametro batzuk ere badaude. Parametro horien artean, aspirazio-altuera eta aspirazio-posizioa daude, biak ala biak atzeko planoa (hondar-bolumena) eta aldakuntza murrizteko.
Hondar-likidoek lotu gabeko antigenoak edo antigorputzak dituzte, atzeko seinalea areagotzen dutenak. Hondar bolumena zenbat eta txikiagoa izan, orduan eta gutxiago hondar likidoa badago eta interferentzia gutxiago duen likidoa hurrengo urratsera pasatzen da.
Aspiratuaren altuerak nabarmen eragin dezake hondar bolumena; garbiketa-puntaren eta erreakzio-putzuaren hondoaren arteko distantzia apur bat handiagoa bada, hondar-bolumena izugarri handituko da. Aitzitik, garbiketa-punta erreakzioaren beheko aldean ondo sakatzen bada, aspirazioa ere eraginkorragoa izango da eta hondar kopurua handitu egingo da.
ELISA plakak garbitzeko egungo makinek, oro har, bi garbiketa-buru mota erabiltzen dituzte: zurrunak eta flotagarriak. Garbiketa-buru flotagarri batean xurgatze-burua aske mugitu daiteke garbiketa-prozesuan zehar, garbiketa-buru zurrun bat posizio egokian finkatzen den bitartean. Garbiketa buru zurrunekin garbitzeko eragiketak zailagoak dira optimizatzeko, zurgapen-altuera kontu handiz egokitu behar delako. Zure laborategiak hainbat plaka erabiltzen baditu, denbora asko eman daiteke. Garbiketa buru flotagarria erabiltzean, pipeta punta ondo eroriko da erreakzioaren behealdera. Altuera doitzea ez litzateke oso garrantzitsua izango, beraz, garbiketa-burua hondoraino jaitsiko litzateke.
Xurgapenaren posizioak ere eragin handia du hondar bolumenean; putzu bakoitzeko xurgatze-puntu bakarra erabiltzen bada (ohikoa da azkarragoa delako), orduan xurgapenaren posizioa optimizatu behar da. Kokapen optimoa garbiketa-buruaren ezaugarriaren araberakoa da, baina ia ez dago ondo erreakzioaren erdian, nahiz eta hori den garbiketa guztietarako lehenetsitako kokapen ohikoena. Oro har, kokapen optimoa zuloaren erdiaren eta zuloaren hormaren artean dago.
Erreakzio-putzuen formak hondar-kopuruari ere eragiten dio. C formako hondoa duten mikroplakek (hondo lauak ertz biribilduak dituztenak), oro har, hondar-kopuru txikiagoak izango dituzte ertz zorrotzak dituzten hondo lauak dituztenek baino.
a. Likidoaren injekzio kopurua eta hondar likido kopurua egunero zuzendu behar dira, eta garbitu ondoren hondar likido kopurua ez da 2 μl baino handiagoa izan behar.
b. Ordeztu hautsitako aspirazio-orratza garaiz, substratuaren estaldura kaltetu ez dadin.
c. Kontuan izan aspirazio-buruaren tanta-altuera doitzeko entzima-plaken fabrikatzaile desberdinentzat, garbiketa-orratzak plaka traba ez dezan.
d. Kontuz garbiketa-soluzio kopurua doitzeko, garbiketa-soluzio gehiegi gainezka egingo da eta gutxiegik ez du garbiketa-efektua lortuko.
e. Erabili ur destilatua hoditeria garbitzeko makina itzali aurretik, garbiketa-soluzioaren materia kristalinoak hoditeria blokeatu ez dezan.
f. Erabat debekatuta dago kit desberdinen garbiketa-soluzioak nahastea.
. Horretarako ELISA plaka garbiketa-efektua hobeto, laborategiak makina eta eskuzko garbiketa-metodoaren konbinazioa erabil dezake, makina garbitu eta gero eskuzko garbiketa plaka 1 edo 2 aldiz, garbiketa efektu ezin hobea lor dezake. Emaitzak ziurtatuta daude!
Erabili ur destilatua hoditeria garbitzeko makina itzali aurretik, garbiketa-soluzioaren materia kristalinoak hoditeria blokeatu ez dezan.
Erabat debekatuta dago kit desberdinen garbiketa-soluzioak nahastea.
