ANTITECK - Laborategiko ekipamendua, industria automatizazioa, moldaketa medikoa eta giltza eskuan irtenbidea ematea.
zelula-arraskagailua

Cell Scraper eta Cell Lifter

Laborategian erabiltzen den zelula-arraspa eta zelula-altxagailua

Zelula arraskagailua Vs. zelula-altxatzailea

zelula-altxatzailea
Bi zelula-arraskagailua zelula-altxatzailea zelulak biltzeko erabiltzen dira batez ere. Horien pala zelulen kalteak asko murrizteko eta hazkuntza-azalera sartzeko diseinatuta dago. Pala TPE polimerozko materialarekin egina izan ohi da, eta heldulekua ABS polimerozko materialarekin egin ohi da. Material hauek egokiak dira zelulak biltzeko.

Zelula-altxatzailea
batez ere, erabiltzeko diseinatuta dago zelula-kultura platerak bere ertz alakatu zabalagatik.
zelula-arraska
Zelula-arraskagailua pala angeludun eta birakaria matrazeen eta Petri plaken hazkunde-azalera erraz sartzeko.
spl-zelula-arraspa

Zelula scrape eta zelula altxatzailearen ezaugarriak

a. Zelulak eskuz biltzeko.

b. Blade diseinuak hazkuntza-azalera ukitu leuna egiten du, eta ondorioz zeluletan kalte minimoa eragiten du.

c. Gamma-erradiazioen esterilizazioa.

d. Ez-pirogenoa, ez-endotoxikoa, ez-zitotoxikoa.

e. Aiztoen heldulekuen luzera desberdinek zelula-kultura-bilduma desberdinak hazteko baldintzak betetzen dituzte.

f. Banaka bilduta.

g. Laborategiko botilak eskuragarri.

h. Aukeretarako tamaina desberdinak: 18cm, 25cm, 40cm, zelula-arraskagailu txikiak, Etab.

i. Putzuko plakekin erabiltzen da, esaterako 24 putzuko plakarako zelula-arraskagailua, 12 putzuko plakarako zelula-arraskagailua, Etab.

Cell scrape eta cell lifter aplikazioak

Farmazia industrian, zelula-kultura antigorputzak ekoizteko osagai garrantzitsu bat bihurtu da. Zelula-hazkuntza-teknologia errotabirusarekin, poliomielitisarekin, baztangarekin, hepatitisarekin, errubeolarekin eta barizearekin erlazionatutako antigorputzak sortzeko erabili da. Gripearen aurkako zeluletan oinarritutako antigorputzak ere onartu dira Estatu Batuetan eta Europako herrialde askotan erabiltzeko. Hona hemen adibide batzuk zelula arrastatzea & zelula-altxatzailea aplikazioak.

Zelula-pasabideen laborantza

arraspa-zelula-kultura
Hormaren kontra hazitako zelulen hazkuntza eta ugaltzea oztopatzen dute espazioa neurri handi batean saturatuta egoteak laborantza matrazea edo hazkuntza-platera geruza bakarrean hedatu ondoren. Zelula-pasabideen laborantza zelulen hedapen edo hazkuntza jarraitu ahal izateko egiten da. Gainera, igarotze-kulturek kontserbatzeko balio dute zelula espeziea. Gainera, hainbat zelula-esperimentu zelulen igarobideen laborantzan oinarritzen dira.

Esekitako zelulak botilatan bana daitezke zuzenean, eta hormetako zelulak digeritu behar dira eta beste tratamendu batzuk botilatan banatu aurretik. Tripsina, oro har, zelula atxikiak banakako zeluletan digeritzeko erabiltzen da, eta EDTA ere gehi daiteke digestioa hobetzeko. EDTA zelula-mintzean Ca2+ eta Mg2+ inhibitzen dituen ioi dibalenteen kelatzailea da. Gehien erabiltzen den zelulen digestio-soluzioak, oro har, %0.25 (w/v) tripsina eta %0.03 (w/v) EDTA ditu.

Esperimentuan zehar, zelula-kultura gainditzailea aspiratu behar duzu, zelulak PBSrekin garbitu, garbiketa-disoluzioa baztertu eta tripsina-EDTA digestio-disoluzio kopuru txiki bat gehitu berriro. Kultura-plateraren tamainaren arabera, 2 ml eta 5 ml digestio-soluzio nahikoa da plateraren hondo osoa zabaltzeko. Gero, zelulak behatzen dira biribildu eta botilaren hormatik askatu arte, eta horrek normalean 3-5 minutu behar ditu. Zelulak pilatzea saihesteko, ez duzu matrazea kolpatu behar digestio-prozesuan zehar. Digeritzeko bereziki zailak diren zeluletan, tripsina EDTA digestio-soluzioa gehi dezakezu eta gero zelulak 37 °C-tan jar ditzakezu digestioa errazteko. Zelulak botilaren hormatik kendu ondoren, berehala gehitu behar duzu seruma duen medio osoa digestioa bertan behera uzteko.

Zentrifugatu zelulak 800-1000 rpm-tan 5 minutuz. Ondoren, baztertu utzitako medioa, gehitu euskarri berri egoki bat eta astiro-astiro nahastu zelulak eta transferi itzazu kultibo berri batera. Pasatzeko ehunekoa zelula motaren araberakoa da. Tripsinak zelula batzuen zelula-mintzean kalteak eragin ditzake. Zelula mota honetarako, astiro-astiro kendu ditzakezu a zelula-arraska, gehitu ertain kantitate egokia, astiro-astiro putz egin zelulak nahasteko, eta gero kulturatik pasatu.

Proteina zelularren erauzketa

zelula-arraspa-24-putzu-plaketarako

A. Esperimentuen prestaketa

a. Ziurtatu izotz-makina piztuta dagoela eta nahikoa izotz birrindua dagoela funtzionatzerakoan erabiltzeko.

b. Ziurtatu izotz-makina piztuta dagoela eta nahikoa izotz birrindua dagoela funtzionatzerakoan erabiltzeko.

c. Ziurtatu entzimaren markatzaileak behar bezala funtzionatzen duela, egin hitzordua eta erregistratu erabili aurretik.

d. Prestatu 4 ml-ko zentrifuga-hodiko 1.5 multzo. Lisatutako zelulen suspentsioa biltzeko, proteina gainditzailea zentrifugazioaren ondoren biltzeko, proteina laginen kontzentrazioa 5 aldiz diluitu ondoren eta proteina laginen kontzentrazioa 10 aldiz diluitu ondoren zehazteko erabiltzen dira.

e. Prestatu zelulen lisi-soluzioa.

Erabili aurretik, nahastu zelulen lisiaren soluzioa 1 ml lisataren proportzioan: proteasaren inhibitzailea (PMSF) 10μL. PMSF 30 minutuko epean eraginkorra da, beraz, arreta jarri erabiltzeko prest dagoen prestaketari.

Kalkulatu aldez aurretik prestatu behar den fluido operatibo kopurua. Fluido operatiboaren kopuru zehatza kasuan-kasuan zehaztu behar da. Oro har, zelulak 70T-ko matraze batean konfluentziara iristen badira, 80 ~ 25μL lan-soluzio behar dira erabiltzeko. Zelula lisi soluzio gehiegi gehitzen baduzu, azken laginaren proteinaren kontzentrazioa baxuegia izan daiteke. Lisi zelulen soluzio nahikoa gehitzen bada, zelulen lisisa ez da nahikoa eta lagina itsaskorra da 250 μL-ko pistolaren punta erraz blokeatzen duena. Zelulen lisiaren operazio-likidoa aldez aurretik 350 °C-tan hoztea gomendatzen da.

f. Prestatu zelula-arraskagailuak zelula-altxatzaileak. Gutxienez 3 pieza zelulak urratzean txandakatzeko.

g. Prestatu 100 ml edo bolumen handiagoko hiru ontzi. Edalontzi hauek aldez aurretik garbitu eta ur ultrapuruz bete behar dira. Erabilitako garbiketa sekuentziala egiteko erabiltzen dira zelula-arraskagailuak. Bai gomazko zelula-arraskagailua zelula plastikozko arraskagailua egongo dira eskuragarri. Gomazko poliziaren zelula-arraskagailua gomendagarriagoa da.

h. Prestatu orekako gatz-soluzioa.

i. Prestatu BCA proteina-kontzentraziorako kit bat.

j. Prestatu SDS kargatzeko buffer. -20 ℃-tan gordetzen da eta erabili aurretik aldez aurretik ireki behar da.

B. Prozedura esperimentala

a. Laborategiko aulki txukuna
Edozein esperimentu mota egiten ari zaren, ezinbestekoa da zure operazio mahaia garbi eta txukun mantentzea. Proteinen erauzketa edo DNA/RNA erauzketa bezalako esperimentuak manipulatzean, mahai ultra-garbi batean jardutea gomendatzen da. Mahai ultra-garbirik ezean, operazio mahaia ahalik eta txukunen dagoela ziurtatu beharko genuke. Era berean, operazio mahaia txukun mantentzea edozein eragiketa esperimentaletarako garatu beharreko ohitura ona da.

Esperimenturako beharrezkoak diren laborategiko tresnak egiaztatzen direnean, zelulak zelulen konpartimentutik atera daitezke.
b. PBS garbiketa
Zelulak kendu ondoren, PBSarekin garbitu behar dituzu giro-tenperaturan. Ondoren, eragiketa guztiak izotz bainu batean egin behar dira.
c. Lisi zelularra
Gehitu 250 eta 350μL lisi-soluzio zelula-ontzi bakoitzean. Lisatua ondo zabaldu eta izotz-bainu batean lisatu behar da 10 minutuz. Errepikatu beharko zenuke 10 minutu hauetan lisatua etengabe zabaltzeko. Lisatua zabaltzeko teknika tripsinaren digestioaren berdina da. Lisiaren zain dagoen bitartean, zentrifugatzailearen, termostatoaren eta ur-bainuaren tenperatura berretsi behar duzu.
d. Zelula scraping
Lisia amaitu ondoren, zelulak kendu behar dituzu a erabiliz zelula-arraskagailua. Zelulen urratze-ekintza bakoitza lisi-soluzioarekin itsaskorra izan behar da, goitik behera norabide bat mantenduz, eta ekintza beirak garbitzea eta garbitzea bezalakoa da.
e. Transferitu laginak
Erabili 200 μL-ko pipeta bat scraped zelula esekidura 1.5 ml-ko zentrifuga-hodi batera transferitzeko (lagin bat urradu eta berehala) eta behin eta berriz bota 30-60 aldiz zelulak guztiz hausteko. Saiatu aire-burbuilak saihesten putz-prozesuan. Puzten amaitu ondoren, lagina duen zentrifuga-hodia izotzetan sartu behar da.
f. Errepikatu e urratsa. lagin bildumak osatzeko
Garbitu behar duzu zelula-arraskagailua zelula-altxatzailea e urratsean erabiltzen da. hiru ontzitan txandaka, astindu zelula-arraskagailuak astiro-astiro eta sartu saiakuntza-euskarri batean lehortzeko. Bada zelula-altxatzaileak ez dira garbitzen, horrek laginak gurutzatuta kutsatzea ekar dezake. Zelulak lehortzen ez badira, laginaren diluzioa sortzen da.
g. Izotz bainuko lisi gehiago
Laginak guztiak urratu eta zentrifuga-hodietara transferitu ondoren, izotz-bainu batean lisatzen jarraitzen dute 5-10 minutuz. Tarte horretan, zentrifugatzailearen, termostatoaren eta ur-bainuaren egoera berretsi behar da.
h. Zentrifugazioa
Lisia amaitu ondoren, zentrifugatu 12,000 g-tan, 4 ° C-tan, 5 minutuz.
i. Proteina gainditzaileen bilketa
Hartu gainditzailea eta erabili proteina-kontzentrazioa neurtzeko eta WBrako laginak desnaturalizatzeko. WB-rako laginaren gainnadantea hartzerakoan, laginaren bolumena erregistratu eta SDS kargatzeko buffer-aren bolumena gehitu ondoren, laginaren bolumenaren arabera, sukaldeko lagina prestatzeko.

C. Proteinen kontzentrazioa zehazteko BCA metodoa

a. Termostatoa aldez aurretik 37 °C-ra berotu behar da.

b. Konfiguratu 5× eta 10× proteina kuantifikatzeko disoluzioa eta utzi izotz gainean prestatu ondoren. Hemen laginak diluitzeko PBS erabiltzea gomendatzen da, D-Hanks-en koloreak berak proteina-kontzentrazioen kuantifikazioaren azken emaitzan eragina izan dezakeelako.

5× diluzioa: 80 μLPBS + 20 μL gainditzailea.
10× diluzioa: 90 μLPBS + 10 μL gainditzailea.

c. Prestatu BCA proteina kuantifikatzeko kita eta kalkulatu behar den fluido operatiboaren kopuru osoa. Prestatu funtzionamendu-fluidoa BCA ratioan: Cu= 50: 1. Ez ahaztu likidoa guztiz nahastea. Lan-soluzio mistoa kolore urdin argia da.

d. 96 putzuko plaka putzu bakoitzeko 20 μL-rekin pikatzen da eta gutxienez hiru putzu erreplikatu ezartzen dira. Proteinaren lagina oso likatsua denez eta bolumen bolumena txikia denez, pistolaren punta putzuan heda daiteke eta putzuaren hondoaren kontra jarri daiteke tentsio likidoa erabiliz lagina osatzeko.

e. Laginaren gehiketa amaitu ondoren, lagin-putzu bakoitza funtzionamendu-fluidoaren 200 μLrekin osatzen da. Fluido operatiboa gehitzeko ekintza azkarra eta garbia izan behar da. Fluido operatiboa azkar eta garbi gehitzeak nahasketa egokia errazten du.

f. Inkubatu 30 minutuz 37 °C-tan. Erreakzioa amaitu ondoren, saiakuntza 3 ~ 5 minutuko epean amaitu behar da.

g. Absorbantzia zehaztutako uhin-luzeran neurtzen da entzima-markatzaile batek.

h. Proteina-kontzentrazioa aurrez prestatu den kurba estandarraren ekuazioaren arabera kalkulatu behar da. Ikusi kitaren argibideak kurba estandarra marrazteko metodorako.
mini-zelula-arraskagailuak

D. Proteina-laginen desnaturalizazioa WBrako

a. Aurrez berotu ur-bainua irakite-punturaino aldez aurretik irakite lehorra ekiditeko eta segurtasunari arreta jarri.

b. Erabili 5× proteina kargatzeko buffer, -20 °C-tan gordetzen dena, urdin iluna, eta disolbatu erabili aurretik.

c. Proteina gainditzaileen lagin talde bakoitzean, dagokion karga-buffer-aren bolumena (proteina gainditzailea: buffer = 4:1) bereizita osatu behar duzu eta ondo putz egin behar duzu.

d. Lagin-hodi bakoitza leherketa-frogako klipean lotu behar da, belaki flotatzailean sartu, ur irakiten 5 minutuz desnaturalizatu, 1 minutuz ur hotzean hoztu eta hiru aldiz errepikatu behar da proteina laginak ondo desnaturalizatu zirela ziurtatzeko.

e. Desnaturalizatutako proteinak uniformeki urdina, argia eta gardena izan behar du. Lagina apur bat zentrifugatu behar da, -20 °C-tan gorde eta alde batera utzi.

f. Urrats honetara arte, esperimentu hau amaitu da.

Nola erosi cell scrape eta cell lifter?

ANTITECK ematen laborategiko ekipoak, laborategiko kontsumigarriak, bizitza zientzien sektoreko ekipamenduak fabrikatzeko.
Gurea interesatzen bazaizu zelula scrape eta zelula altxatzailea edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.


    Cookieak erabiltzen ditugu gure webgunean ahalik eta esperientzia onena eskaintzeko. Gune hau erabiltzen jarraituz gero, cookieen erabilera onartzen duzu.
    Onartu
    Pribatutasun politika