Zelulen kulturarako komunikabideak

Edukia
1. Zer da zelula-kultura-euskarria?
    1.1 Zelula-kultura-medioen osaera eta eginkizuna
2. Zelula-kultura-euskarri mota
    2.1 Zelula medio
3. Nola erosi zelula-hazkuntzako euskarriak?

Zelula-kultura medio zelulen elikadura hornitzeko eta hazkuntzako zeluletan zelulen ugalketa eta ugalketa sustatzeko oinarrizko materiala da, baita hazkuntzako zelulak hazteko eta ugaltzeko bizi-ingurunea ere.

Aminoazidoak proteinen oinarrizko unitateak dira. Zelula mota ezberdinek aminoazidoetarako eskakizun desberdinak dituzte, baina zelulek beren kabuz sintetizatu ezin dituzten hainbat aminoazido daude eta horiek emateko kultura-euskarrian oinarritu behar dira, aminoazido esentzialak deitzen direnak. Horien artean, glutamina ezinbesteko aminoazido bat da azido nukleikoen eta proteinen sintesian, eta glutaminarik ezean, zelulak gaizki hazi eta hil egiten dira. Ezinbesteko aminoazidoak L-glutamina, L-histidina, L-isoleucine, L-leucine, L-lisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-treonina, L-triptofanoa eta L-balina dira.

Zelulen hazkuntza mantentzen duten eta zelulen metabolismoan erregulatzaile eta kontrolatzailea duten substantzia biologikoki aktiboak. Zelula-kulturan, seruma bitamina-iturri garrantzitsua den arren, kultura-euskarri asko bitamina ugarirekin osatzen dira zelula-lerro sorta zabalago baten hazkuntza egokitzeko.
Bitamina liposolubleak, hala nola A, D, E eta K.

Uretan disolbagarriak diren bitaminak, hala nola B1, B2, B6, B12, azido pantotenikoa, azido folikoa, biotina, C, niacinamida, etab.

Bitamina askok parte hartzen dute hainbat entzima talde aktiboen osaeran, horiek gabe entzimak inaktiboak izango lirateke eta jarduera metabolikoa ez litzateke gauzatuko.

VA zeluletako glikoproteinen sintesian oligosakarido taldeen eramailea da eta zelula epitelialen mantentze-lan garrantzitsua du. vD kaltzioaren xurgapenaren erregulazioan parte hartzen du. ve mintz biologikoak osatzen dituzten fosfolipidoen gantz-azido asegabeen oxidazioa saihesten duen antioxidatzailea da. vK gabeziak protrombina baxua eta koagulazio denbora luzea eragiten du.
Azido folikoa lehengai garrantzitsua da tetrahidrofolatoaren sintesian, eta azido nukleikoen biosintesian eta proteinen biosintesian zeregin garrantzitsua betetzen du.

Biotina azukrearen metabolismoan eta gantz-azidoen sintesian parte hartzen duten karboxilasa espezifiko batzuen osagaia da.

Karbohidratoak zelulen hazkuntzarako energia-iturri nagusia dira, eta horietako batzuk proteinen eta azido nukleikoen sintesiaren osagaiak dira. Nagusiak glukosa, erribosa, desoxirribosa, sodio piruvatoa eta azetatoa dira.

Oinarrizko ez-organikoak sodioa, potasioa, magnesioa, kaltzioa eta fosforoa bezalako ioiak beharrezkoak dira zelulen konposiziorako eta zelulen metabolismoan parte hartzen dute.

Gatz ez-organikoen funtzio nagusia zelulek presio osmotikoa homeostasia mantentzen laguntzea da. Horrez gain, sodio, potasio eta kaltzio ioiak emanez, zelulak zelulen mintzaren funtzioa erregulatzen laguntzen du. Osmolaritatea zelula-kultura medio oso faktore garrantzitsua da, eta zelulek normalean 260 mOsm/kg - 320 mOsm/kg jasan ditzakete. Kultura-euskarri estandarraren osmolaritatea tarte horretan aldatzen da. Ohar berezia: kultura-euskarriari beste substantzia batzuk gehitzeak kultura-euskarriaren osmolaritatea nabarmen alda dezake, batez ere azido edo base sendoetan disolbatuta daudenak.

Na+ zelulaz kanpoko likidoaren katioi garrantzitsuena da eta paper erabakigarria du presio osmotiko konstantea mantentzeko. k+ zelula barneko fluidoan banatzen da batez ere, eta zelula barneko k+ beharrezkoa da entzima jakin batzuk aktibatzeko, eta oso garrantzitsua da zelula barneko ingurunearen azido-base oreka erregulatzeko ere. ca2+ zelulaz kanpoko fluidoan erabiltzen da ehunen barruko zelulak elkarri atxikitzeko, eta zelularen barneko zelulen jarduera fisiologiko garrantzitsu askotan parte hartzen du. Mg2+ zelulen arteko matrizearen osagai garrantzitsu bat da eta garrantzitsua da zelulak elkarren artean egonkor lotzeko. Fosforo-konposatuen funtzioak material zelularreko metabolismoa eta funtzio fisiologikoak erregulatzeko oso zabalak eta ezinbestekoak dira.

Klasiko mota asko daude kultura komunikabideak, horien artean DMEM, RPMI 1640, MEM eta DMEM/F12 dira gehien erabiltzen diren euskarriak. Beste batzuk, hala nola, M199, IMDM eta L15 medioak ere erabiltzen dira zelula jakin batzuen hazkuntzarako. Hauek dira haien ezaugarri eta aplikazio espezifikoak.

Oinarrizko Eagle ertaina, Eaglek 1955ean diseinatua, BSS + 12 aminoazido + glutamina + 8 bitamina. Sinplea da, gehitzeko erraza eta egokia da igarotako hainbat zelula-lerroetarako eta ikerketa berezietarako. Oinarri honetan hobetutako zelula-kultura-euskarrien barietateak MEM, DMEM, IMDM, etab.

MEM zelula-kultura medio, muga baxuko Eagleren medioa (Minimal Essential Medium) bezala ere ezaguna, Eagleren oinarrizko euskarritik (BME) aldatu zen 1959an. Lisina eta biotina ezabatu ditu, aminoazidoen kontzentrazioa handitzea egokia da zelula monogeruza mota asko hazteko. , eta autoklabagarriak diren barietateak ditu, hau da, oinarrizkoenetakoa eta gehien probatutako euskarrietako bat. Hala ere, mantenugaien konposizio mugatua dela eta, ez da zertan zelula-kultura eta adierazpen zehatzak ekoizteko erabili beharreko euskarri eraginkorrena edo ekonomikoena.

DMEM Dulbeccok eraldatutako Arrano euskarri bat da, hasieran saguaren fibroblastoetarako diseinatua. DMEM-k aminoazidoen kontzentrazioa bikoitza du eta MEM bitaminaren kontzentrazioa lau aldiz handiagoa du, HCO3- eta CO2 kontzentrazio bikoitzarekin, tampone hobea izateko. Jatorrizko formulazioak 1000 mg/L glukosa zituen, gerora 4500 mg/L-ra egokitu zen zenbait zelula hazteko, askotan glukosa baxua eta altua deitzen zaiona.

Azukre baxua egokia da menpeko zelula-kulturentzat, batez ere hazkuntza-tasa azkarra eta atxikimendu eskasa duten tumore-zelulen hazkuntzarako. Azukre altua egokiagoa da dentsitate handiko esekidura-zelulen hazkuntzarako, baita atxikimendu eskasa duten klonalaren hazkuntzarako ere, baina ez du jatorrizko hazkuntza-puntutik aldendu nahi, eta hibridoman DNArekin transfektatutako mieloma-zelulen eta eraldatutako zelulen hazkuntzarako ere. . Adibidez, CHO zelulek B hepatitisaren txertoaren ekoizpena adierazten dute, eta CHO zelulek EPO.

Guilber-ek eta Iscovek Dulbecco-ren Medium-a Iscove-ren Medium-era egokitu zuten eritrozitoen eta makrofagoen aitzindarien hazkuntzarako. IMDMk saguaren B linfozitoen, LPS-ek estimulatutako B zelulen, hezur-muineko zelulen hematopoietikoen, T zelulen eta linfoma-zelulen hazkundea ere sustatzen du. IMDM oso elikagai aberatsa den euskarri bat da eta, beraz, dentsitate handiko zelulak azkar ugaltzeko erabil daiteke.

Moore et al. Roswell Park Memorial Institute-n RPMI-1640 zelula-hazkuntza-euskarria garatu zuen 1967an. Linfozitoen hazkuntzarako diseinatuta dago eta BSS + 21 aminoazido + 11 bitamina eta abar ditu. zelula hematopoietikoak, leukozito normalak edo gaiztoak ugaritzen diren, hibridoma zelulak eta beste linfozito heldu batzuk, hala nola K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, T-zelulen linfoma zelulak eta HCT-15 epitelio-zelulak erabil daitezke erreferentzia gisa. .

Hamek 1963an diseinatu zuen, oligoelementuak ditu eta serum maila baxuak direnean erabil daiteke, eta kultura klonogenikoetarako egokia da. f10 egokia da hamster eta giza zelula diploideetarako eta bereziki egokia da likido amniotikoko zelula-kulturetarako.

Ham's F12 CHO zelulak serum-kontzentrazio baxuetan klonatzeko diseinatu zen eta gaur egun klonen eraketa tasak eta lehen kulturak aztertzeko ere erabiltzen da. DEME F12 DMEM-rekin ere nahas daiteke bolumen berdinetan kontzentrazio handia eta konposizio-aniztasuna uztartzen dituen produktua lortzeko, eta euskarri hau lehen kultura askotan erabili izan da eta zailagoa da zelula-lerroak haztea. Serumik gabeko kultiboetarako oinarrizko euskarri gisa ere erabili ohi da, mantenugai-eduki aberatsa duelako eta serum gutxiago erabiltzeko gaitasuna duelako.

A zelula-kultura medio konposizio kimiko definituarekin, M-199, Morgan et al-ek diseinatua. 1950ean, BSSaz gain 53 osagai ditu eta euskarri integrala da, batez ere oilasko enbrioien fibroblastoaren hazkuntzarako erabiltzen dena. Kultura-euskarri hori serumarekin osatu behar da epe luzerako kultura laguntzeko. m-199 jatorriko espezie askotako zelulak hazteko erabil daiteke eta transfektatutako zelulak hazi ditzake. Gaur egun oso erabilia da birologian eta txertoen ekoizpenean.

MeCoy-k 1959an sarkoma-zeluletarako diseinatu zuen, BSS + 40 osagai. Injerto primarioen mota askotako (hala nola hezur-muina, azala, birikak eta spleen) hazkuntza onartzen du. Lehen mailako zelula-hazkuntza orokorrerako egokia izateaz gain, batez ere ehun-biopsia-kultura gisa erabiltzen da, linfozito-kultura batzuk eta hazteko euskarri zailak diren zelula batzuen hazkuntzarako. Adibidez, Jensen arratoiaren sarkoma fibroblastoak, giza linfozitoak, HT-29, BHL-100 eta beste zelula epitelial batzuk.

L-15 kultura-euskarria azkar ugaltzen diren tumore-zelulak hazteko egokia da eta CO2rik ezean tumore-lerroak hazteko erabiltzen da. Kultura-euskarri honek fosfato-buffered sistema bat erabiltzen du, aminoazidoen konposizioa gehiago hobetu duena eta glukosaren ordez galaktosaren bidez.

Gurea interesatzen bazaizu zelula-hazkuntza-medioak edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.