Zelula-Kulturako Matraza

Edukia
1. Zer da zelula-kultur matrazea?
2. Esekidura-zelula-kultur matrazea
3. Zelula-kultur matraze motak
4. Zelula-kultur matrazea erabiltzea
    4.1 Nola digeritu zelulak hobeto zelulak hazteko matrazetan?
    4.2 Nola aldatu disoluzioa zelula-hazkuntzako matrazean?
5. Nola erosi zelula-kultur matrazea?

Zelulen kultura teknika esperimental oso garrantzitsua da eta ezinbesteko ikerketa-modalitate bihurtu da biofarmazia, bizi-zientzien eta transplante klinikoen alorretan. Zelula-kultura zelula-kontsumigarrien laguntzaz egin behar da zelulen hazkuntzarako beharrezko baldintzak lortzeko, eta zelula-kultur matrazea laborategiko tresna ohikoenetako bat da.

Zelula-kultur matrazeak mikrobio, intsektu edo ugaztun zelulak arrakastaz hazteko eta ugaltzeko. Zelulen eta ehunen in vitro kultura bizitzaren ikerketaren eta praktikaren parte bihurtu da. Zelula mota ugari lantzen dira, birusetatik hasi eta bakterioetara eta onddoetaraino, eta giza zeluletatik animalia eta landare zeluletaraino. Zelula eta ehun batzuk esekiduran hazi daitezke, baina ugaztun-zelulen proportzio handi batek gainazaleko aposizioa behar du. Hori dela eta, in vitro zelula-kultura-inguruneak emateko erabiltzen diren matrazeak, plakak eta platerak gardenak eta ez-toxikoak ez ezik, antzuak ere badira. Gainera, gainazalean ere aldatu behar dira atxikitzeko, zatitzeko eta hazteko.

XXI.mendean sartu zenetik, biologia aurrerapen fase batean sartu da, eta bizitza-zientziek natur diziplinetan duten posizioa irauli egin da. Horien artean, biologia molekularra, genetika, biologia zelularra, garapenaren biologia, neurologia, ekologia, espazioko bizitzaren zientziak eta beste diziplina batzuk pixkanaka punta-puntako diziplina bihurtuko dira.

Biologia molekularra (genetika molekularra barne) bizi-zientzien korronte nagusian, baita bizitza-zientzien garapena sustatzeko duen eginkizun handia eztabaidaezina da. Zelula bizitza-jardueraren oinarrizko unitate estruktural eta funtzionala da, biologia zelularra zientzia biologikoaren estatusaren oinarrizko diziplina gisa ere arreta eman behar zaio. Zelula-kulturaz hitz egitean, egungo zelulen sailkapenaren arabera, nagusiki, hauek banatzen dira: esekidura-zelulak eta horma-zelulak. Esekidura-zelulen kultura gaur egun bizi-zientzietako zelula-kultura nagusi eta eraginkorra da. Zientzialarien lanean oinarrizko tresna bihurtu dira esekidura-zelulen hazkuntzako esperimentuetarako behar diren ontziak.
Gaur egun, hiru motatako esekidura zelula-hazkuntzako ontzi mota daude.

1861ean, Erlenmeyer zientzialari nazionalak, laginaren erreakzio-matrazearen bero-egonkortasuna bermatzeko, berogailu-ontzia hobetu zuen eta matraze konikoa asmatu zuen. Matraz konikoaren bikaintasuna bere forma berezian islatzen da. Edalontzi biribil batekin alderatuta, forma berezi honek tresnaren egonkortasuna areagotzen du eta iraultzeko aukera gutxiago egiten du. Gainera, astindu prozesuan, matraze konikoaren "lepoak" matrazearen barruko likidoa zipriztintzeko aukera gutxiago egiten du, beraz, kultura-soluzioa ez da ontzitik irtengo esekidura-zelulen hazkuntza-prozesuan, eta horrela bermatzen du. erreakzio-sistemaren egonkortasuna. Gaur egun, CHO, SF9, NK zelulen eta abarren kultura tipikoak hazten dira astintzeko matrazeetan. Teorian, disolbatutako oxigeno kopuru ona ziurtatzeko, astindu-matrazaren kulturaren bolumena ontziaren bolumenaren % 10 ingurukoa da, baina praktikan handitu daiteke.

Ugaztunen eta intsektuen zelula-kulturetan, non zelulek bideragarritasun eta proteina espresio handia duten, ANTITECK Eredu guztietako botilek zelulen bideragarritasunaren eta zelulen kulturaren jardueraren hazkunde nabarmena erakusten dute. Zizaila baxuko spoiler paregabeari esker zelula-kultur matrazea, aireztapen-eraginkortasuna handitzen da, betetzeko bolumena bolumen osoaren% 60ra irits dadin. Beste matraze mota batzuek bolumen osoaren % 30 bakarrik eduki dezakete.

The zelula-kultur matrazea zelulen hazkuntza osasuntsua ahalbidetzen du, eta ondorioz xede-produktuen adierazpena areagotzen da, hala nola mintz-proteinak, jariatzen diren proteinak eta antigorputz monoklonalak; intsektuen zelulen proteinaren adierazpena % 200 handituz. Zelula egonkor batzuentzat eta adierazpen zelula iragankor batzuentzat, proteinen adierazpena % 300 handitu daiteke.

erabiliz zelula-hazkuntzako matrazeak, betetzeko likidoaren bolumenaren ratioa handitzen da eta bolumen unitateko adierazpena handitzen da. Kultur matrazeen eta kultura-euskarrien kontsumoa nabarmen aurreztu daiteke. Erreproduzigarritasun handiko matrazeak, lote batetik bestera azpizelulen hazkuntza eskalagarria eta etekinean koherentzia handikoa.

The kultur matrazea, Auguste Fernbach biologo frantziarraren omenez izendatua, benetan astintzeko matrazearen hobekuntza da. Astindu matrazearen beheko eremua handitu egin da, eta horrela, kultura-euskarriaren eta airearen arteko oxigeno-truke-eremua handitu da. Irekidura lauak zein haridunak eskuragarri daude, beraz, estalki transpiragarria hauta daiteke. Irekidura handiak euskarria transferitzeko zailtasuna murrizten du. Beheko bafleak likidoaren emaria handitzen du botila astintzen denean likidoaren eta oxigenoaren arteko ukipen-probabilitatea areagotzeko. Bach botilak produktuaren etekina handitzen du ohiko astindu botila batek baino gehiago.

Zelula-kultura in vitro ingurunea simulatzeko metodo bat da, bizirauteko, hazteko, ugaltzeko eta egitura eta funtzio nagusiak mantentzeko. Zelula-hazkuntzako hainbat kontsumigarri erabiltzen dira zelulak hazteko, eta horietatik zelula-hazkuntzako matrazeak gehien erabiltzen direnetako bat dira.

Formaren forma zelula-kultur matrazea lepo zabalarekin karratua izateko diseinatuta dago, zelulen bilketa errazteko xedea duena. Diseinu izoztua botilaren alboan erabili ohi da operadorearen erregistroa errazteko. Zehaztapenei dagokienez, kontsumigarri hau normalean 25cm2, 75cm2, 175cm2, 225cm2 eta abarretan eskuragarri dago. Normalean aipatzen ditugun zehaztapenak botilak eduki dezakeen kultura-euskarriaren edukiera dira. Zehaztapen ezberdinen arabera, aplikazio eszenatoki desberdinak daude.

25 cm2 eta 75 cm2-ko tamaina txikiko botilak zelulak berreskuratzeko eta eskala txikiko hedapenerako erabiltzen dira batez ere, laborantza aurreko fasean batez ere. Hainbat globulu gorrientzako biltegiratze edukiontzi gisa ere erabil daiteke. 175 cm2-ko eta 225 cm2-ko botilak tamaina ertaineko zelula-kulturarako edo proteina eukariotoen adierazpenerako erabiltzen dira batez ere. 175 cm2 eta 225 cm2-ko botilak tamaina ertaineko zelula-kulturarako edo proteina eukariotoen adierazpenerako erabiltzen dira batez ere. Proteinen adierazpena gene-proteina exogenoak adierazteko bakterioak, legamia, intsektu-zelulak, ugaztun-zelulak edo landare-zelulak erabiltzen dituen biologia molekularreko teknika bat da, eta ingeniaritza genetikoaren teknologiaren osagai garrantzitsuetako bat da.

Zelula-kultur matrazeak batez ere hormetako zelulak hazteko erabiltzen dira. Erabileran zehaztapen desberdinak desberdinak diren arren, guztiek bete behar dituzte zelulak hazteko baldintzak, hala nola, DNA-entzimarik ez, ARN-entzimarik ez, endotoxinarik ez, animalia-iturririk ez, gainazaleko TC tratamendua, etab.

Zelula-kultur matrazea zelulak hazten direnean gehien erabiltzen den kontsumigarrietako bat da. Zelulak lantzea oso lan zorrotza da, eta hazteko baldintza egokiak behar ditu. Hazkuntza maila jakin batera iristen denean zelulen bilketak parte hartzen du. Erabiltzerakoan zelula-hazkuntzako matrazeak, honako lau urrats hauek jarraitu daitezke.

a. Bota ertain zaharra eta gehitu euskarri berri kopuru txiki bat 1-2 aldiz garbitzeko, horren helburua inguruan flotatzen duten hildako zelula asko garbitzea da.

b. Gehitu euskarri berri kopuru txiki bat eta putz ezazu zuzenean behin, oraingoan hormara ondo lotuta ez dauden zelulak botatzeko. Garbitu berriro ertainarekin eta nahastu suspentsioa bi aldiz berri batera pasatzeko zelula-kultur matrazea.

c. Aspiratu geratzen den likidoa botila, gehitu 0.3 ml tripsina inguru behin garbitzeko, aspiratu eta bota, eta, ondoren, gehitu 1 ml tripsina inguru digeritzeko. Zelulen eta zelulen arteko tartea nabaria denean, berehala aspiratu eta bota tripsina, gehitu medio berri bat eta hasi putz egiten, putz egin 2-3 aldiz eta, ondoren, aspiratu esekidura probeta edo botila berri batean aldi baterako biltegiratzeko. Garbitu 2 ml bitarteko berriarekin eta nahastu aurrekoarekin.

d. Jarraitu irmo atxikitzen diren gainerako zelulak matrazeari tripsina freskoa gehituta digeritzen. Jarraitu mikroskopikoki behatzen, eta gainerako zelulen hutsuneak agerikoak direnean eta zelulak modu independentean irekita daudenean, aspiratu tripsina, gehitu medio berri bat eta putz egin eta esekidura botila berri batera pasatu kulturarako.

Goiko urratsek zelula-hazkuntzako matrazeetatik digeritutako zelulen kalitate hobea eta hazkuntza-egoera hobea izango dute geroagoko igarobideetan.

Zelulak hazteko prozesuan, fluidoen trukea oso ohikoa den eragiketa da, hau da, batez ere, zelulek hazkuntzan sortutako hainbat hondakin metaboliko kentzea, kultura-euskarri freskoa berritzea eta zelulen hazkundea sustatzea.

Ondorengo urratsak egiteko, alkohol esterila % 75, PBS buffera, seruma duen medioa, Pap xiringa bat, pipeta bat eta hondakin-ontzi bat dituen alkohol-botila bat behar da.

a. Jarri ekipoa mahai ultra-garbian eta piztu UV irradiazioa esterilizatzeko. Laborantzen diren zelulak tenperatura sentikorrak badira, seruma duten euskarri botilak 37 °C-ko ur-bainu batean jar ditzakezu 37 °C-ko tenperatura izan dadin, eta, ondoren, ultra-garbiko mahaira eraman ditzakezu UV esterilizaziorako. Gainera, zelula-hazkuntza gelak UV irradiazioa ere behar du ordu erdi inguruz.

b. Kendu zelula-hazkuntzako botila inkubagailutik, desinfektatu botilaren gainazala %75eko alkohol-spray botila batekin, transferitu mahai ultra-garbi batera, ireki estalkia, astiro-astiro atera kultura-euskarri zaharra eta gehitu seruma duen medio freskoa batekin. pipeta. Kontuan izan medioa ez dela zelulen aldamenetik gehitu behar, alboko hormatik baizik, mugimendu leunekin zelulak ez garbitzeko.

c. Euskarria gehitu ondoren, itxi tapa eta markatu botila informazioarekin, hala nola, fluidoen aldaketa ordua, zelula mota eta eragilea.

d. Botilak inkubagailuan sartu aurretik, botilen gainazala alkoholarekin ihinztatu behar duzu berriro, eta, ondoren, ebakuntza mahaia antolatzea, mahaiaren gainazala ultra-garbia alkoholarekin garbitu eta hondakin-likidoa eta zaborra garbitu behar dituzu.

Likidoen truke eragiketa egitean, arreta jarri asepsiari prozesu osoan. Eragileek arropa esterilizatua, eskularru esterilizatuak eta maskarak eraman behar dituzte, eta kontuz ibili behar dute eskuak ahoa ukitzen dutenean. zelula-kultur botila kutsadura saihesteko.

Gurea interesatzen bazaizu zelula-kultur matrazea edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.