Zelula-iragazkiak
Zer dira zelula-iragazkiak?
Zelula-iragazkiak normalean laborategiko zelulen kulturan, ezpurutasunen iragazketan, zelulen sakabanaketan, laginen zatiketan, etab. erabiltzen dira. Zelula iragazi normalean polipropilenozko marko batez egina dago, nylonezko pantaila konbinazio berezi batez. Ohiko espezifikazioak hauek dira: zelula-iragazkia 40μm, zelula-iragazkia 70μm zelula-iragazkia 100μm pantaila irekidurak.
Zelulen biologiaren ikerketan, zelularen ezaugarri fisiologikoak, zelulen inbasioak, apoptosia, fagozitosia eta beste funtzio fisiologiko batzuetarako, ingurumen-faktoreek zelula-markatzaileen adierazpenean, droga-baheketa eta beste aplikazio batzuetan duten eragina, ezinbestekoa da homogeneizatu ezin hobea lortzea. zelula bakarreko konderriko fluidoa, ondorengo esperimentuak, hala nola flow-through cell sorting (FACS) bezalako esperimentuak erraz egin ahal izateko eta emaitza esperimental zehatzagoak lor daitezke. Zelula-iragazkiak zelula-esperimentuetan erabiltzen diren kontsumigarri mota ohikoenak dira. Esperimentu zelularretan erabiltzen den kontsumigarri mota ohikoena da eta esperimentu zelularretan ezpurutasunak iragazteko erabiltzen da.
Zelula-iragazkien abantaila
a. Hiru tamaina eskuragarri zelula-lagin mota desberdinetara egokitzeko: 40 µm, 70 µm eta 100 µm.
b. Hiru kolore zehaztapen desberdinak bereizteko: urdina, zuria eta horia.
c. Sare-zuloen banaketa uniformea, emaitza esperimental koherenteak eta fidagarriak emanez.
d. Goiko ertz luzatuak pintza kirurgikoekin manipulazio aseptikoa ahalbidetzen du.
e. Moldeatutako polipropilenozko markoa kolore-kodetu daiteke erraz erabiltzeko eta bereizteko.
f. 50 ml-ko JET konikoarekin erabiltzeko Zentrifugazio hodiak.
g. Gamma erradiazio bidezko esterilizazioa.
h. Ez DNasa/RNasarik, ez bero-iturririk, ez endotoxinarik.
Zelula-iragazkiak aplikatzea
Helburua zelula-iragazkiak Lehen mailako kulturan zehar zelula-masa haustea da, zelula bakarreko esekidura lortzeko.
a. Hezur-muinetik, pankreatik, timotik, amigdaletatik eta gongoil linfatikoetatik isolatutako odol-zelulen iragazketa bidez lortutako zelula bakarreko suspentsioa.
b. Zelula-kultura primariorako eta immunizaziorako laginen prestaketa.
c. Gliadina serum inaktibatutik iragaztea.
d. Lehen mailako hazi izoztuen prestaketa.
Zelula-iragazkiak zulatzea
-ren zuloak zelula-iragazkiak prozesatzeko zelula-iragazkia laser puntzonatzeko makina berezi batek zulatzen ditu. Lan-printzipioa da laserren gaineko laser izpia espazioan eta denboran oso kontzentratuta dagoela, eta horrek lekuaren diametroa mikra mailara murrizten du, horrela potentzia dentsitate handia lortuz, eta laser bidez ia edozein material zulatu dezake.
Zelula-iragazkiaren laser zulaketaren abantaila ez da errebarik, zigilatzea, hondakinik eta ebaki laua. Zelula iragazkien zuloaren laser zulatzean, zulaketaren tamaina koherentea da, erreba edo gainazal irregularra badago, hurrengo prozesua oso zaila izango da eta laser bidezko prozesamenduak geroago prozesatzea azkarrago eta kalitate hobeago egiten du.
Zelula-iragazkien zehaztapena
| Produktuen | Deskribapena | Paketearen zehaztapena |
|---|---|---|
| Zelula-iragazkia 40 um | 300 sare, urdina, esterilizatua | 1pz / pakete, 50 pz / ctn |
| Zelula-iragazkia 40 um | 200 sare, zuria, esterilizatua | 1pz / pakete, 50 pz / ctn |
| Zelula-iragazkia 40 um | 160 sare, horia, esterilizatua | 1pz / pakete, 50 pz / ctn |
Zelula-iragazkiak hautatzea
Zelula-iragazkiaren bahearen sare kopurua × poroen tamaina = 15000 (aukeratu zelula-bahea dagokion sare-tamaina duen material esperimentalaren iragazki-poroen tamainaren arabera).
Zelula-iragazki motak
Zelula-iragazkiak Oro har, bi material nagusitan banatzen dira, bata plastikozko produktuak dira, esate baterako, nylona, eta bestea altzairu herdoilgaitzezkoa.
Altzairu herdoilgaitzezko zelula-iragazkiak
Altzairu herdoilgaitzezko zelula-iragazkia altzairu herdoilgaitzez egina dago, gainazal leuna, itxura ederra eta ezaugarri iraunkorrak ditu. Altzairu herdoilgaitzezko zelula-iragazkiak 40 saretik 800 sarera arteko hainbat zehaztapen dituzte, orokorrean laborategiko zelula-kulturan, ezpurutasun-iragazketan, zelulen sakabanaketa, laginaren bereizketa eta abar erabiltzen direnak. Altzairu herdoilgaitzezko zelula-iragazkiak berrerabili daitezke, oro har, ultrasoinuen garbiketa eta gero esterilizazioa erabiliz. Zelula bahea bi motatan banatzen da altzairu herdoilgaitzezko zelula-iragazkia heldulekuarekin eta altzairu herdoilgaitzarekin zelula-iragazkia heldulekurik gabe, ikerketa zientifikoko esperimentuetarako funtzionatzeko erraza eta erosoa dena.
Nylon zelula-iragazkiak
Fluxu arrunteko probako laginak 300-350 sarerekin erabil daitezke nylonezko zelula-iragazkiak, inbutu forman tolestuta eta pinza hemostatikoekin erabiltzen da.
Zelula-iragazkiak erabiltzea
a. Zelula-iragazkiak ezin dira garbitu ondoren azidotan busti, zuzenean esterilizatu daitezke lata paperean bilduta. Ez lehortu ehotzen erabiltzean. Ehun handiagoak iragazten dituzunean, buffera gehitu behar duzu artezketa bitartean.
b. 200 sarearen eta 300 sarearen arteko aldea zelula-iragazkiak zuloen tamaina da. Desberdintasun hori ez da oso handia fluxu mota egiterakoan, baina 300 sare erabiltzean, kontuz ibili gehiegi ez ehotzeko ehun konektibo gehiegi saihesteko.
c. Arratoi-biriketako ehuna zelula-bahe bidez eho ondoren lor daiteke, zelula-nahasketa bat izanik, besteak beste, biriketako parenkima-zelulak, estroma-zelulak, eritrozitoak eta leukozito, NK zelula eta makrofago kopuru txiki bat.
Zelula-iragazkiak garbitzea
a. Bota eta botatzeko zelula-iragazkiak ez dira gomendatzen garbitu eta desinfektatzea, eta horrek iragazkiaren irregulartasuna eragin dezake eta hurrengo esperimentuaren emaitzetan eragina izan dezake.
b. Garbiketa alkalino diluitua hondar zelulak eta ehunak kentzeko.
c. Busti eta garbitu kalka kentzeko agentearen soluzio batekin.
d. Txorrotako urez garbitzea, dH2O ur destilatua 3 aldiz, ddH2O ur berriro destilatua 3 aldiz, ontziak esterilizatu.
Fluxu-zitometriarako zelula-iragazkia
Fluxu zitometria Suspentsioan dauden zelula bakarren edo partikula biologikoen analisi kuantitatibo eta sailkatzeko teknika bat da, abiadura handiko, zehaztasun handiko eta zehaztasunaren abantailak dituena, eta oso erabilia da zelulen zenbaketa, zelulen sailkapenean, fenotipo molekularren analisian, proteinen ingeniaritza eta bestelakoetan. ikerketa.
Aplikazio
A. Esplenozitoen isolamendua
a. Saguaren barearen zatia 15 ml-ko ontzi batean atera. zentrifuga-hodi (likidorik gabe) eta jarri hodia izotzaren gainean.
b. Gehitu 5 ml eritrozitoen lisis-bufferraren 15 ml-ko zentrifugazio-hodira, barearen barruan dagoena.
c. Bota RBC lisis bufferra eta barearen likidoa 10 cm-ko ontzi batean. zelula-hazkuntzako platera.
d. Jarri bare-a ehotzeko tresna bikoitzaren alde zakarrean (RBC lisis bufferrean bustita), xehatu ondo bare-a ehotzeko tresna bikoitzean eta ehotu bi ehotzeko tresna bikoitzen artean bare-a disoziatu arte.
e. Esplenozitoak dituen eritrozitoen lisatoa 15 ml-ko zentrifugazio-hodi batera eraman.
f. Gehitu 10 ml medio zentrifugazio-hodira eta irauli 2-3 aldiz.
g. Zentrifugatu 1300 bira/min-tan 4 °C-tan 00:05:00 bitartean
h. Gainjarioa baztertu eta prezipitatua 3 ml-ko medioan berriro eseki.
i. Iragazi 70 μM zelula-iragazkia 50 ml zentrifugatzaile-hodi baten bidez.
j. Zelulak 1:100ean diluitu eta zenbatu.
k. Zelula bakarreko suspentsioa 1 x 107 zelula/ml-ra diluitu RPMI medioan (fluxu-analisietarako, ez da zelularik zenbatu eta zenbatu behar).
l. Jarri esplenozitoak izotzean 96 putzuko plakan sartu arte.
B. Esplenozitoen estimulazioa
a. Prestatu Brefeldina A 10 μg/ml-ko kontzentrazioan duen RPMI medio bat.
b. LPS stock soluzio guztiak zurrunbiloan nahastu eta birarazi, eta ondoren sonikatu bakoitza 00:10:00. Sonikazioa egin ondoren, zurrunbiloan nahastu eta berriro birarazi.
c. Prestatu estimulu bakoitza (EC LPS, PA, YP, Lipido IVa) nahi den azken kontzentrazio bikoitzera (2x), Brefeldina A duen medioa erabiliz.
d. Estimulatzaile bakoitzaren 100 μl gehitzen dira 96 putzuko 2.2 mL-ko plaka baten putzu egokietan, estimulatu gabeko putzuak kontrol gisa barne.
e. Jarri 100 μl esplenozito dagokien putzuetan (jarri beste esplenozito multzo bat tindaketa-kontrol bakar gisa erabiltzeko).
f. Ondoren, inkubatu 37 °C-tan 04:00:00etan.
C. Immunozitokimikako tindaketa
a. 04:00:00ak igaro ondoren, tratatu putzu-plaka 20 μl 20 mM EDTArekin.
b. Nahastu eta inkubatu 37 °C-tan 00:10:00 bitartean.
c. Berriro nahastu inkubazioaren ondoren, eta gero zentrifugatu 1300 bira/min-tan 00:05:00-z.
d. Xurgatu edo irauli euskarriak.
e. Itxi putzu guztiak 10 μl FcBlock diluituarekin (1:100 FcBloc PBSA/az-tan).
f. Inkubatu izotzean 00:15:00etan.
g. Gehitu 100 μl PBSA/az eta zentrifugatu 1300 rpm-tan 00:05:00 bitartean.
h. Xurgatu edo irauli euskarriak.
i. Esplenozito lagin estimulatuari 10 μl antigorputz nahasketarekin berriro eseki/tindu: CD11b PerCP-Cy5.5, CD11c PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 eta CD3 APC (1:100Ab PBSA/az-tan).
j. Gehitu 100 μl PBSA/az tindaketa bakarreko kontrolera, eta ondoren tindaketa bakarreko Ab hauetatik 1 μl: CD8 FITC, CD8 PE, CD4 PerCP-Cy5.5, CD8 PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 eta CD8 APC.
k. Inkubatu izotzean argitik babestuta (edo paper aluminioan bilduta) 00:20:00etan.
1. Gehitu 100 μl PBSA/az, eta ondoren zentrifugatu 1300 rpm-tan 00:05:00 bitartean.
m. Xurgatu edo ukitu astindua euskarria.
n. Berriz eseki putzu guztietan 100 μl BDcytofix/cytoperm disoluzioarekin.
o. Inkubatu izotzean, argitik babestuta, 00:20:00etan.
or. Gehitu 100 μl 1x BD Perm Wash putzu guztietara.
q. Zentrifugatu 1300 bira/min-tan 00:05:00 bitartean, eta ondoren aspiratu edo astindu medioa.
r. Berriz eseki/garbitu behin 200 μl 1x BD Perm Wash-ekin, putzu guztietan hainbat aldiz pipetatuz gora eta behera.
s. Zentrifugatu 1300 bira/min-tan 00:05:00 bitartean, eta ondoren aspiratu edo astindu medioa.
t. Esplenozitoen laginak berriro eseki/tindu 50 μl antigorputz nahasketarekin: TNF FITC eta IL-12/IL-23p40 PE estimulatutako esplenozitoetan.
u. Inkubatu izotzean 00:30:00etan, argitik babestuta.
v. Gehitu 150 μl 1xBD Perm garbiketa putzu guztietara eta zentrifugatu 1300 rpm-tan 00:05:00 bitartean.
w. Euskarriak xurgatu edo irauli.
x. Berriz eseki/garbitu behin 200 μl 1x BD Perm Wash-ekin, putzu guztietan hainbat aldiz pipetatuz gora eta behera.
y. Zentrifugatu 1300 bira/min-tan 00:05:00-z, eta ondoren aspiratu edo astindu medioa.
z. Berriz eseki 200 μl-ko azken bolumenean % 1eko paraformaldehido disoluzioan (diluitu % 10eko paraformaldehidoa 1xPBS-rekin).
aa. Gorde 4 °C-tan argitik urrun (edo paper aluminioan bilduta) isurtzeko prest egon arte. zitometria analisia – laginak 96 putzuko plaka batetik transferitu bureta FACS baino lehen.
Nola erosi zelula-iragazkiak?
Gurea interesatzen bazaizu Zelula-iragazkiak edo zalantzaren bat baduzu, idatzi e-mail bat info@antiteck.com helbidera, ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.