Zelula-kontagailua

Edukia
1. Zer da zelula-kontagailua?
2. Zelulak zenbatzeko erabiltzen diren metodoak
3. Zelula-kontagailu automatizatua
    3.1 Zelula-kontagailua erabiltzea
    3.2 Zelula-kontagailua esperimentuetan aplikatzea
    3.3 Zelula-kontagailua esperimentuetan aplikatzea
4. Nola erosi zelula-kontagailua?

Ondorengo esperimentuetarako zelulen kalitatea ziurtatzeko, laborategi askok zelulen kontzentrazioa eta bideragarritasuna probatzen dute, tradizionalki Taipan koloratzaile urdinaren bidez ugaztunen zeluletarako eta melanina koloratzaileen bidez legamiarako. Bi koloratzaileek nukleoa zikintzen dute, eta zelulak bizirik daudenean, mintza selektiboki iragazkorra da eta koloratzailea ezin da zelulan sartu. Zelula hilda dagoenean, mintzaren iragazkortasun selektiboa galtzen da eta koloratzailea nukleoan sartu eta zelula zikindu dezake. Horri esker, zelulak hilak edo biziak bereiz daitezke. Funtzionamendu konplexua eta akats handiak dituzten odol-kontagailu tradizionalak gero eta gehiago ordezkatu dira zelula-kontagailu automatizatuek. Zelula-kontagailua Zenbaketaren emaitzen zehaztasuna eta egonkortasuna bermatzen duten ezaugarri asko ditu.

a. Oinarrizko zenbaketa funtzio zehatza eta azkarra. Aplikatu hainbat teknologia, hala nola bereizmen handia, foku optiko automatikoa, eremu anitzeko analisia eta laginketa bolumen estatistiko handia zenbaketa-emaitzen zehaztasuna eta errepikagarritasuna bermatzeko.

b. Aglomeratutako zelulen zuzenketa funtzio berritzailea. Zelula arruntetarako eta zelula aglomeratuetarako, modu desberdinak aurrez ezartzen dira, eta aglomeratutako zelula zuzentzeko funtzio berritzailea eskuragarri dago zelula aglomeratuentzat.

c. Ezpurutasunen eskuzko zuzenketa zorrotza. Ezpurutasun arrotzak eragindako emaitza desbideratzea eskuz kendu daiteke softwarearen analisiaren arabera.

d. Datuen analisi estatistiko-funtzioa. Zelulen ugaltze kurba (CTC), zelulen diametroaren banaketa, zelula-noduluen banaketa eta grafiko estatistiko bakoitzaren gainjarritako analisia ditu.

e. Datuak ateratzeko funtzio malgu eta anitzak.

f. Datuen segurtasuna babesteko eginbide aurreratuak. Softwarearen funtzionamenduaren segurtasun-giltzaz hornituta, software-sistemak erabiltzaileen saioa hasteko pribilegioak ezartzen ditu eta esperimentuaren emaitza guztiak automatikoki gordetzen ditu.

Tindaketa-printzipioa da Ehun urdinak ezin duela zelula bizidunen zelula mintz osorik barneratu, beraz, zelula bizidunak ez dira koloreztatzen; aldiz, hildako zelulen zelula-mintza kaltetuta dago eta koloratzailea aberasten da zelula-mintzaren bidez zelulak urdin bihurtzeko. Hala ere, Ehun urdinaren tindaketak ez ditu beti zehaztasunez bereizten zelula nukleatuak eta zelula-hondakinak, beraz, zelula-kopuru osoa gutxiesteko eta zelulen bideragarritasuna gainestimatu ohi du.

Akridina laranja/propidio ioduroa (AO/PI) tindaketa-printzipioa: zelula biziek AO tindaketarekin berdea fluorestatzen dute, eta zelula hilek PI tindaketarekin gorria. Garrantzitsua da, hondo konplexuak dituzten zelulak, esate baterako, odol periferikoko zelula mononuklearrak, zelula-hondakin kopuru handia edo multzoetan dauden zelulak zenbatzen dira, hondakin zelularrak detektatzeko saihestuz. Ikuspegi hau duela gutxi zelula bakarreko genomikako aplikazioetan ere aplikatu da, non berdea zelula osoei dagokien eta gorria arrakastaz isolatutako nukleoei dagokiena. Estrategia honi esker, ikertzaileek lisatutako zelulen ehunekoa kalkulatu dezakete zelula-zenbaketa osoarekiko, nukleoak zenbatzen dituzten bitartean, laginaren kalitatea iradoki eta ikertzaileei zelula bakarreko genomiko prozesuekin jarraitu behar duten zehazten laguntzen die.

Fluoreszentzia-zelulen analizatzaile guztiz automatizatuak, eremu distiratsua + kolore bikoitzeko fluoreszentzia kanalaren konbinazioak esperimentua errazten eta azkarrago egiten du, eta transfekzioa detektatzeko funtzioa ere badu, detekzio zabalera are gehiago zabaltzen duena. Barietate handiagoko zelulak detektatzea ez da soilik hazten diren zelula soiletan aplikagarria, baizik eta ehunetatik, hezur-muinetatik, odol periferikotik, albeoloetatik eta gibeletik isolatutako mota eta jatorri ezberdinetako zelula-aleak azkar zenbatzea eta aztertzea ahalbidetzen du. Mikroskopia bidez lortutako irudi digital fluoreszenteak automatikoki aztertzen dira fluoreszenteen etiketatze teknologiaren eta irudien sailkapenaren ezagutzaren teknologiaren bidez, zelulen hildako edo biziko egoera lortzeko, eta apoptosia eta zelulen sailkapenaz jabetzeko.

a. Hainbat detekzio modu: zikindu gabeko zenbaketa + tindatze zenbaketa + bi koloreko fluoreszentzia zenbaketa + eskuzko kalibrazio modua + transfekzioa.

b. Foku automatikoa, fokua doitzeko eskuzko esku-hartzerik ez.

c. Eramaile-mahai guztiz automatikoa: mugimendu automatikoa X eta Y norabideetan gauzatu daiteke; mikroskopioen zenbaketa estandarrei jarraikiz, 4 eremu estandar bil daitezke automatikoki.

d. Pixela: 10 milioi koloretako kamera.

e. Zelula-diametro-tartea detektatzea: 2-200μm.

f. Neurtzeko zelulen kontzentrazio-tartea: 0.25x104- 3x107 zelula/mL.

g. Beira-kontatzeko plaka estandar berrerabilgarriekin bateragarria.

h. Irudia eskuratzea: sakatu zenbaketa-tekla, eta tresnak automatikoki hartzen ditu 4 eremuko irudiak, automatikoki eskuratzea, biltegiratzeko funtzioak, identifikazioa, estatistikak, txostenak sortzea, etab.; irudiak kanal anitzeko gainjartzea izan daiteke, eta irudiaren distira doitu daiteke.

i. Putzu bikoitzeko zenbaketa moduarekin: automatikoki lor ditzake zelulen irudiak zenbaketa-orri berean bi lagin zirrikitutan, eta softwareak automatikoki kalkulatzen du batez besteko balioa emaitza zehatzagoak lortzeko.

j. Ereduak ezagutzeko funtzioak: zelula zatien bazterketa aztertzea; Multzotutako zelulen banakako zelula zenbaketa; zelulen zenbaketa irregularra; emandako datuen analisi-taulak barne, baina hauek ez ezik: zelula-diametroaren analisia; zelula-diametroaren batez besteko analisia; zelula-tamainaren histograma; zelula-diametro-distira sakabanatze grafikoa; zelula-diametro-distira ingerada grafikoa; hazkunde-kurba grafikoa; kluster banaketa-diagrama; lau eskualdeko gelaxka jatorrizko diagrama; lau eskualdeko zelula hilak edo biziak identifikazio-taula; lau eskualde josten taula; eman puzzleak ikusteko tresna, zenbaketa historiako datu guztiak edozein unetan berreskura daitezke ikusteko eta trazatzeko.

Zelula zenbaketa zelula-kulturaren ikerketan oinarrizko ikerketa da. Hartutako zelulen hazkuntza-egoera ulertzeko eta medio, serum eta botiken efektu biologikoak zehazteko bitarteko garrantzitsua da. Zelula-kontagailu automatizatuak 1min baino gutxiagoan hazten diren zelulak azter ditzake eta zelulen kontzentrazioa lor dezake, zelulak bolumen-tamaina, bideragarritasuna, zelulen tamaina edo bolumen-banaketaren kurbak esan nahi du. Zelula-kontagailu automatikoak algetarako, mikroorganismoetarako eta diametroko zelula-kontagailuen barruko beste organismo batzuetarako ere erabiltzen dira. Odol-zelulak zenbatzeko plaka metodoarekin alderatuta, zelulak zenbatzeko makina zehatzagoa, azkarra eta erosoagoa da, eta errorea txikiagoa da.

Denbora-epe desberdinetan kultiba-medioan zelulen kontzentrazioa neurtu zen, eta zelulen hazkuntza-kurba marraztu zen zelulen bikoizketa-denbora zehazteko. Hau zelula-hazkuntza prozesuaren beharrezko zati bat da. Zelulen bide metabolikoak desberdinak dira hazkuntza-aldi desberdinetan.

a. Zelula zenbaketa. Zelula barneko eta kanpoko metabolitoak neurtzean, zelula bakoitzaren barneko eta kanpoko metabolitoak ezagutzea posible da, zelula-zenbaketa ezberdinen ondoriozko akatsak saihestuz paralelo edo kontrol-esperimentuetan.

b. Zelulen bideragarritasuna. Zelulen bideragarritasuna esperimentuetan erabil daiteke, esate baterako, zitotoxikotasun esperimentuetan, droga-tratamendu-esperimentuetan eta apoptosi-esperimentuetan.

c. Zelulen bolumen histogramak lortzea lor daiteke zelulen morfologia bereizteko.

Zelula-kontagailua funtzionatzeko erraza da eta zelula-kontzentrazioen bideragarritasuna zehaztea osatzeko hiru urrats erraz behar ditu.

a. Kargatu lagina

b. Sartu kontagailu taula

c. Lortu emaitza

Erabiltzaileek 20 mikrolitro probatu behar dituzte, muntatzeko plaka tresnan sartu eta 20 segundoko epean hasi klik egin behar dute zelulen kontzentrazioa eta bideragarritasuna lortzeko.

Irudi-analisian oinarritutako kontagailu guztiek zelula-irudi argiak lortu behar dituzte foku-distantzia egokian, eta, ondoren, irudi-analisia egin behar dute zenbaketaren emaitzak lortzeko. Foku-distantzia behar bezala doitzen ez bada, larriki eragingo du kontzentrazioan eta biziraupenaren epaiketa. Foku-distantzia behar bezala doitzen ez bada, bizitzaren eta heriotzaren epaiketa larriki eragingo du, eta zenbaketaren emaitzen egonkortasuna eragingo du. Zelula-kontagailua erabiltzeko prozesuan, ez dago eskuz fokatu beharrik, eta horrek asko saihesten du foku-distantzia akatsak bizitzaren eta heriotzaren determinazioan duen eragina.

Lentea objektu batean foku zorrotzean dagoenean, lentearen erdiko lentearen ardatzarekiko perpendikularra den plano bereko puntuak nahiko argiak izan daitezke pelikula edo hargailuan, eta tarte jakin bateko puntuak aurrealdean. eta plano honetan lentearen ardatzaren atzealdean ere begiak onar daitezkeen irudi-puntu nahiko argiak sor ditzake. Hegazkinaren aurrean eta atzean dauden objektu guztien arteko distantziari kameraren eremu-sakonera deitzen zaio.

Zelula-zenbaketaren eremu-sakonera CCD-n argi eta garbi irudika daitekeen zelula-esekiduraren sakonera da. Kontadore-taula tipiko batek 100-200 mikra-ko sakonera du, eta lentearen eremu-sakoneraren errendimendua ona ez bada, eremu-sakoneraren barruan dauden zelula batzuek ezin izango dute irudirik atera. Kontadore idealak plakaren sakonera osoa ikusteko gai izan behar du. Eszena fokalaren, objektuaren distantziaren, irekiduraren tamainaren eta CCD tamainaren eragin handia du. Hainbat faktore haztatuz, du zelula-kontagailua Eremu-sakonera handiko irudi-sistema bat diseinatu zuen, zenbaketa-plakako zelulak argi eta garbi atera zitezkeen eta zenbaketaren emaitzen egonkortasuna eta zehaztasuna bermatu ahal izateko.

Gurea interesatzen bazaizu zelula-kontagailua edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.