Zelula-kontagailua
Zer da zelula-kontagailua?
Ondorengo esperimentuetarako zelulen kalitatea ziurtatzeko, laborategi askok zelulen kontzentrazioa eta bideragarritasuna probatzen dute, tradizionalki Taipan koloratzaile urdinaren bidez ugaztunen zeluletarako eta melanina koloratzaileen bidez legamiarako. Bi koloratzaileek nukleoa zikintzen dute, eta zelulak bizirik daudenean, mintza selektiboki iragazkorra da eta koloratzailea ezin da zelulan sartu. Zelula hilda dagoenean, mintzaren iragazkortasun selektiboa galtzen da eta koloratzailea nukleoan sartu eta zelula zikindu dezake. Horri esker, zelulak hilak edo biziak bereiz daitezke. Funtzionamendu konplexua eta akats handiak dituzten odol-kontagailu tradizionalak gero eta gehiago ordezkatu dira zelula-kontagailu automatizatuek. Zelula-kontagailua Zenbaketaren emaitzen zehaztasuna eta egonkortasuna bermatzen duten ezaugarri asko ditu.
a. Zenbaketa-emaitzen zehaztasuna eta erreproduzigarritasuna bermatzeko, oinarrizko zenbaketa-funtzio zehatza eta azkarra. Hainbat teknologia aplikatu, hala nola bereizmen handia, foku optiko automatikoa, eremu anitzeko analisia eta laginketa-bolumen estatistiko handia.
b. Zelula aglomeratuen zuzenketa funtzio berritzailea. Zelula arruntentzat eta zelula aglomeratuentzat, modu desberdinak aurrez konfiguratuta daude, eta zelula aglomeratuen zuzenketa funtzio berritzailea eskuragarri dago zelula aglomeratuentzat.
c. Ezpurutasunen eskuzko zuzenketa zorrotza. Kanpoko materia ezpurutasunek eragindako emaitzen desbideratzea eskuz kendu daiteke softwarearen analisi baten bidez.
d. Datuen analisi estatistikoaren funtzio bakarra. Zelulen ugalketaren kurba (CTC), zelulen diametroaren banaketa, zelulen noduluen banaketa eta grafiko estatistiko bakoitzaren gainjarritako analisia ditu.
e. Datuen irteerako funtzio malguak eta anitzak.
f. Datuen segurtasunaren babes-ezaugarri aurreratuak. Softwarearen funtzionamenduaren segurtasun-giltza batekin hornituta, software-sistemak erabiltzaileen saioa hasteko pribilegioak ezartzen ditu eta esperimentuaren emaitza guztiak automatikoki gordetzen ditu.
Zelulak zenbatzeko erabiltzen diren metodoak
Zelula kontagailu makina
A. Taipan urdinaren tindaketa
Tindaketa-printzipioa da Ehun urdinak ezin duela zelula bizidunen zelula mintz osorik barneratu, beraz, zelula bizidunak ez dira koloreztatzen; aldiz, hildako zelulen zelula-mintza kaltetuta dago eta koloratzailea aberasten da zelula-mintzaren bidez zelulak urdin bihurtzeko. Hala ere, Ehun urdinaren tindaketak ez ditu beti zehaztasunez bereizten zelula nukleatuak eta zelula-hondakinak, beraz, zelula-kopuru osoa gutxiesteko eta zelulen bideragarritasuna gainestimatu ohi du.
B. Zelula fluoreszenteak zenbatzea
Akridina laranja/propidio ioduroa (AO/PI) tindaketa-printzipioa: zelula biziek AO tindaketarekin berdea fluorestatzen dute, eta zelula hilek PI tindaketarekin gorria. Garrantzitsua da, hondo konplexuak dituzten zelulak, esate baterako, odol periferikoko zelula mononuklearrak, zelula-hondakin kopuru handia edo multzoetan dauden zelulak zenbatzen dira, hondakin zelularrak detektatzeko saihestuz. Ikuspegi hau duela gutxi zelula bakarreko genomikako aplikazioetan ere aplikatu da, non berdea zelula osoei dagokien eta gorria arrakastaz isolatutako nukleoei dagokiena. Estrategia honi esker, ikertzaileek lisatutako zelulen ehunekoa kalkulatu dezakete zelula-zenbaketa osoarekiko, nukleoak zenbatzen dituzten bitartean, laginaren kalitatea iradoki eta ikertzaileei zelula bakarreko genomiko prozesuekin jarraitu behar duten zehazten laguntzen die.
C. Fluoreszentzia-zelulen kontagailu automatizatua
Fluoreszentzia-zelulen analizatzaile guztiz automatizatuak, eremu distiratsua + kolore bikoitzeko fluoreszentzia kanalaren konbinazioak esperimentua errazten eta azkarrago egiten du, eta transfekzioa detektatzeko funtzioa ere badu, detekzio zabalera are gehiago zabaltzen duena. Barietate handiagoko zelulak detektatzea ez da soilik hazten diren zelula soiletan aplikagarria, baizik eta ehunetatik, hezur-muinetatik, odol periferikotik, albeoloetatik eta gibeletik isolatutako mota eta jatorri ezberdinetako zelula-aleak azkar zenbatzea eta aztertzea ahalbidetzen du. Mikroskopia bidez lortutako irudi digital fluoreszenteak automatikoki aztertzen dira fluoreszenteen etiketatze teknologiaren eta irudien sailkapenaren ezagutzaren teknologiaren bidez, zelulen hildako edo biziko egoera lortzeko, eta apoptosia eta zelulen sailkapenaz jabetzeko.
Teknikoa parametroak
a. Hainbat detekzio modu: tindaketa gabeko zenbaketa + tindaketa bidezko zenbaketa + bi koloreko fluoreszentzia zenbaketa + eskuzko kalibrazio modua + transfekzioa.
b. Foku automatikoa, fokua doitzeko eskuzko esku-hartzerik gabe.
c. Eramaile-mahaia guztiz automatikoa: X eta Y norabideetan mugimendu automatikoa egin daiteke; mikroskopioaren zenbaketa-arauak betez, 4 azalera estandar automatikoki bil daitezke.
d. Pixel: 10 milioi koloreko kamera.
e. Zelulen diametroaren detekzioa: 2-200 μm.
f. Zelulen kontzentrazio-tartea: 0.25×104- 3×107 zelula/mL.
g. Berrerabil daitezkeen beirazko zenbaketa-plaka estandarrekin bateragarria.
h. Irudien eskurapena: zenbaketa-tekla sakatu, eta tresnak automatikoki 4 eremu-irudi hartuko ditu, automatikoki osatuko ditu eskurapena, biltegiratze-funtzioak, identifikazioa, estatistikak, txostenak sortzea, etab.; irudiak kanal anitzeko gainjarri daitezke, eta irudiaren distira doi daiteke.
i. Putzu bikoitzeko zenbaketa moduarekin: automatikoki lor ditzake bi lagin-zirrikituetako zelulen irudiak zenbaketa-orri berean, eta softwareak automatikoki kalkulatzen du batez besteko balioa emaitza zehatzagoak lortzeko.
j. Patroiak ezagutzeko funtzioak: zelula-zatiak baztertzeko azterketa; zelula multzokatuen banakako zelula-zenbaketa; zelula irregularren zenbaketa; datuen analisi-diagramak eskaintzen dira, besteak beste: zelula-diametroaren azterketa; zelula-diametroaren batez bestekoaren azterketa; zelula-tamainaren histograma; zelula-diametroaren eta distiraren arteko sakabanaketa-diagrama; zelula-diametroaren eta distiraren arteko kontura-diagrama; hazkunde-kurba grafikoa; multzoen banaketa-diagrama; lau eskualdeko zelulen jatorrizko diagrama; lau eskualdeko zelulen hildako edo bizirik dauden identifikazio-diagrama; lau eskualdeko jostura-diagrama; puzzleak ikusteko tresna eskaintzen da, zenbaketa-historiaren datu guztiak edozein unetan berreskura daitezke ikusteko eta jarraitzeko.
Zelula kontagailu automatizatua
Zelula-kontagailua erabiltzea
Zelula zenbaketa zelula-kulturaren ikerketan oinarrizko ikerketa da. Hartutako zelulen hazkuntza-egoera ulertzeko eta medio, serum eta botiken efektu biologikoak zehazteko bitarteko garrantzitsua da. Zelula-kontagailu automatizatuak 1min baino gutxiagoan hazten diren zelulak azter ditzake eta zelulen kontzentrazioa lor dezake, zelulak bolumen-tamaina, bideragarritasuna, zelulen tamaina edo bolumen-banaketaren kurbak esan nahi du. Zelula-kontagailu automatikoak algetarako, mikroorganismoetarako eta diametroko zelula-kontagailuen barruko beste organismo batzuetarako ere erabiltzen dira. Odol-zelulak zenbatzeko plaka metodoarekin alderatuta, zelulak zenbatzeko makina zehatzagoa, azkarra eta erosoagoa da, eta errorea txikiagoa da.
Zelula-kontagailua esperimentuetan aplikatzea
Denbora-epe desberdinetan kultiba-medioan zelulen kontzentrazioa neurtu zen, eta zelulen hazkuntza-kurba marraztu zen zelulen bikoizketa-denbora zehazteko. Hau zelula-hazkuntza prozesuaren beharrezko zati bat da. Zelulen bide metabolikoak desberdinak dira hazkuntza-aldi desberdinetan.
a. Zelula zenbaketa. Zelula barneko eta kanpoko metabolitoak neurtzean, zelula bakoitzaren barneko eta kanpoko metabolitoak ezagutzea posible da, zelula-zenbaketa ezberdinen ondoriozko akatsak saihestuz paralelo edo kontrol-esperimentuetan.
b. Zelulen bideragarritasuna. Zelulen bideragarritasuna zitotoxikotasun esperimentuetan, sendagaien tratamendu esperimentuetan eta apoptosi esperimentuetan erabil daiteke.
c. Zelulen bolumenaren histogramak lortzea zelulen morfologia bereizteko lor daiteke.
Zelula kontagailuaren abantailak
A. Oso funtzionamendu erosoa
Zelula-kontagailua funtzionatzeko erraza da eta zelula-kontzentrazioen bideragarritasuna zehaztea osatzeko hiru urrats erraz behar ditu.
a. Kargatu lagina
b. Txertatu mostradore-ohola
c. Lortu emaitza
Erabiltzaileek 20 mikrolitro probatu behar dituzte, muntatzeko plaka tresnan sartu eta 20 segundoko epean hasi klik egin behar dute zelulen kontzentrazioa eta bideragarritasuna lortzeko.
B. Ez da eskuzko fokurik behar
Irudi-analisian oinarritutako kontagailu guztiek zelula-irudi argiak lortu behar dituzte foku-distantzia egokian, eta, ondoren, irudi-analisia egin behar dute zenbaketaren emaitzak lortzeko. Foku-distantzia behar bezala doitzen ez bada, larriki eragingo du kontzentrazioan eta biziraupenaren epaiketa. Foku-distantzia behar bezala doitzen ez bada, bizitzaren eta heriotzaren epaiketa larriki eragingo du, eta zenbaketaren emaitzen egonkortasuna eragingo du. Zelula-kontagailua erabiltzeko prozesuan, ez dago eskuz fokatu beharrik, eta horrek asko saihesten du foku-distantzia akatsak bizitzaren eta heriotzaren determinazioan duen eragina.
C. Sakonera-eremuaren errendimendu ona
Lentea objektu batean foku zorrotzean dagoenean, lentearen ardatzarekiko perpendikularra den plano berean dauden puntuak, lentearen erdian, nahiko argi ikus daitezke filmean edo hargailuan, eta plano horretan lentearen ardatzaren aurrealdean eta atzealdean dauden puntuek ere begiarentzat onargarriak diren irudi-puntu nahiko argiak sor ditzakete. Planoaren aurrean eta atzean dauden objektu guztien arteko distantziari kameraren eremu-sakonera deritzo.
Zelula-zenbaketaren eremu-sakonera CCD-n argi eta garbi irudika daitekeen zelula-esekiduraren sakonera da. Kontadore-taula tipiko batek 100-200 mikra-ko sakonera du, eta lentearen eremu-sakoneraren errendimendua ona ez bada, eremu-sakoneraren barruan dauden zelula batzuek ezin izango dute irudirik atera. Kontadore idealak plakaren sakonera osoa ikusteko gai izan behar du. Eszena fokalaren, objektuaren distantziaren, irekiduraren tamainaren eta CCD tamainaren eragin handia du. Hainbat faktore haztatuz, du zelula-kontagailua Eremu-sakonera handiko irudi-sistema bat diseinatu zuen, zenbaketa-plakako zelulak argi eta garbi atera zitezkeen eta zenbaketaren emaitzen egonkortasuna eta zehaztasuna bermatu ahal izateko.
Nola erosi zelula-kontagailua?
Gurea interesatzen bazaizu Zelula-kontagailua edo zalantzaren bat baduzu, idatzi e-mail bat info@antiteck.com helbidera, ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.