ANTITECK - Laborategiko ekipamendua, industria automatizazioa, moldaketa medikoa eta giltza eskuan irtenbidea ematea.
zelulak izozteko-euskarria

Zelulak izozteko euskarriak

Laborategian erabiltzen diren zelulak izozteko bitartekoak

Zer da zelulak izozteko medio?

izozte-euskarria
Zelulen kriokontserbazioa zelulak kontserbatzeko eta epe luzerako biltegiratzeko zelulak hazteko teknologiaren ohiko metodo bat da. Zelulak izozteko euskarriak, zelulen liofilizaziorako erabili behar den soluzioa, zelulen kontserbaziorako erabiltzen da eta zelulak erosteko, bidaltzeko, trukatzeko eta entregatzeko funtsezko zeregina du. Horregatik, bereziki garrantzitsua da ona aukeratzea zelula-kultura izozteko medio.

Zelula-kultura izozteko medioa

Ikertzaileek askotan behar dute izoztu zelulak eta gorde itzazu ondorengo esperimentuetarako edo erabilera klinikorako. Oinarrizko prozesua nahiko erraza da: izoztu zelulak poliki-poliki, jarri kriokontserbazio-hodiak nitrogeno likidoan eta azkar desizoztu behar denean. Zelulak izozteko euskarriak zelulak onartzen ditu eta izotz-kristalak sortzea eragozten du. Hala ere, erabilera desberdinak emaitzak euskarriak izoztea oso ezberdina izan daiteke.

Ohiko zelulak izozteko medioek babes-agente bat gehitzen diote kultura-euskarriari, normalean %10eko dimetilsulfoxidoa (DMSO) eta %10-%90 behi-seruma. Zelulak konbentzionalean izoztean aurkitzen diren arazoak zelulen liofilizazio soluzioa honela laburbiltzen dira.

a. Prozedurazko hoztea (4°C → -20°C → -80°C → nitrogeno likidoa). Urrats hau neketsua eta denbora asko eskatzen du.

b. Zelula kutsatzeko arrisku handiagoa duten serumak (birusak, mikobakterioak, mikoplasmak, etab.).

c. Serum lotearen eta kalitatearen desberdintasunek loteen desberdintasunak eragiten dituzte zelulak izozteko medioetan.

d. Nitrogeno likidoa izoztea beharrezkoa da izozte-baldintza handietarako.

e. Mikrobolumena eta in situ (adibidez, putzu plakak) ezin dira liofilizatu.

Serumik gabeko zelula liofilizazioko hiru produktu hauek serumik gabeko eta programatu gabeko hozte guztiak dira eta zuzenean -80 °C-ko hozkailuan jar daitezke epe luzerako izozteko eta gordetzeko.

A. Serumik gabeko zelulen liofilizazio-soluzioa

Produktuen funtzioa
a. Serumik eta animalietatik eratorritako proteinarik gabe birusek, mikobakterioek eta mikoplasmek duten kutsadura murrizteko.

b. Formula bereziak zelulen izozte eta berreskuratze tasaren biziraupen-tasa eraginkortasunez hobe dezake.

c. Erabiltzeko prest, ez da tokiko prestaketarik behar.

d. Mota unibertsala, animalia eta giza zelula-lerro eta zelula primario desberdinak izozteko eta gordetzeko egokia dena.

e. Konposizio argia, lotez lote aldakuntzarik gabe.

f. Ez da programatutako hozterik eta ez da nitrogeno likidorik behar. Zuzenean jar daiteke -80 ℃-tan epe luzerako izozteko eta biltegiratzeko.

g. Mikroizoztea eta in situ izoztea (adibidez, hibridoma zelulak izoztea) posible da, denbora eta eraginkortasuna aurreztuz.
Izozte efektua
Zelula-lerroaIzozte denbora / (Hilabete)Zelulen biziraupen-tasa (%) / (Izozteko tenperatura -80 ℃)
293T1295.58
4T11296.25
HUVEC1288.14
helao1293.18

B. Serumik gabeko DMSO baxuko zelulen kriokontserbazio-medioa

Produktuen funtzioa
a. Segurtasun handia, serumik eta animalietatik eratorritako osagairik gabe, birusek, mikobakterioek eta mikoplasmek kutsatzeko aukera txikia. Produktuen kalitatearen koherentzia handiagoa lote batetik bestera.

b. DMSO baxua %5eko DMSOrekin (v/v), eta horrek asko murrizten ditu zelulen efektu toxiko potentzialak.

c. Zelula-bideragarritasun handia lote-desberdintasunik gabe.

d. Formulazio likido guztiz liofilizatua, zuzenean erabiltzeko prest, erosoa eta sinplea. Zuzenean gorde daiteke -80 ℃ hozkailuan izozteko eta biltegiratzeko, programatutako hozte-prozesu luzea igaro gabe (denbora, ahalegina eta dirua aurreztu).

e. In situ izoztu daiteke, hala nola hibridoma zelulen azpiklonak, eta horrek lan karga masiboki murriztu eta kutsadura saihestu dezake.
Izozte efektua
Zelula-lerroaIzozte denbora / (Hilabete)Konparazioa A
Zelulen biziraupen-tasa (%)
Konparazioa B
Zelulen biziraupen-tasa (%)
Zelulen biziraupen-tasa (%)
3T31868997
293E1858693
293F1858592
berreskuratzea-zelula-kultura-izozte-ertaina

C. Serumik gabeko DMSOrik gabeko zelulak kriokontserbatzeko medio

Produktuen funtzioa
a. Segurtasun handia, serumik eta animalietatik eratorritako osagairik gabe, birusek, mikobakterioek eta mikoplasmek kutsatzeko aukera txikia. Produktuen kalitatearen koherentzia handiagoa lote batetik bestera.

b. Ez dago DMSOrik, ezta zeluletan eragin toxikorik ere.

c. Zelula-bideragarritasun handia lote-desberdintasunik gabe.

d. Liofilizazio soluzio osoa, zuzenean, erosoa eta sinplea erabil daiteke.

e. Zuzenean gorde daiteke -80 ℃ hozkailuan izozteko, hozteko denbora behar duen prozeduratik pasatu gabe (denbora, ahalegina eta dirua aurreztu). Ez da ☆ programatutako hozte-tresna erabili beharrik, eta ez da -196 ℃ nitrogeno likidoan jarri beharrik.

f. In situ izoztu daiteke, hibridoma zelulen azpiklonak adibidez, eta horrek lan karga masiboki murriztu eta kutsadura saihestu dezake.
izozte-media-dmso
Zelula izozteko euskarri unibertsalak serumik gabeko zelulak izozteko hiru euskarriekin alderatzea
Zelula izozteko medio unibertsalaSerumik gabeko zelulen liofilizazio soluzioaSerumik gabeko DMSO baxuko zelulen kriokontserbazio-medioaSerumik gabeko DMSOrik gabeko zelulak kriokontserbatzeko medio
Osagai nagusiakSeruma, DMSO duenaSerumik gabe, DMSO %10arekinSerumik gabe, DMSO %5arekinSerumik eta DMSOrik gabe
ZitotoxikotasunaHighHighBehe--
SegurtasunaBehe-
Animalia jatorriko birus, mikobakterio eta mikoplasmekin kutsatzeko arrisku handia
High
Animalia jatorriko birus, lizun eta mikoplasmekin kutsatzeko arriskurik ez
High
Animalia jatorriko birus, lizun eta mikoplasmekin kutsatzeko arriskurik ez
High
Animalia jatorriko birus, lizun eta mikoplasmekin kutsatzeko arriskurik ez
Kriokontserbatutako zelula motakSeruma duten zelulak izozteko egokiaHelburu orokorra
Zelula kriokontserbazio mota guztietarako egokia
Helburu orokorra
Zelula kriokontserbazio mota guztietarako egokia
Helburu orokorra
Zelula kriokontserbazio mota guztietarako egokia
Serumik gabeko kultura-zelulen hazkuntza-egoeraAldatzeko erraza, egoera esekitik harresiaren egoerara itzultzeko errazaMantendu esekiduraren kulturaren egoeraMantendu esekiduraren kulturaren egoeraMantendu esekiduraren kulturaren egoera
Loteen desberdintasunakAlde handiak loteetanEz dago loteen desberdintasunikEz dago loteen desberdintasunikEz dago loteen desberdintasunik
Eragiketa metodoaUrrats astunak, programatutako hoztea eta izoztea eskatzen dutenakErraza eta azkarra
Urrats bakarreko izoztea -80 ℃ hozkailuan
Erraza eta azkarra
Urrats bakarreko izoztea -80 ℃ hozkailuan
Erraza eta azkarra
Urrats bakarreko izoztea -80 ℃ hozkailuan
Kontserbatzeko ekipoakEskakizun handia (nitrogeno likidoa)Eskakizun baxua (-80 ℃ hozkailua)Eskakizun baxua (-80 ℃ hozkailua)Eskakizun baxua (-80 ℃ hozkailua)
MikroizozteaZelula heriotza erraza eta biziraupen-tasa baxuaZelulen biziraupen-tasa altuaZelulen biziraupen-tasa altuaZelulen biziraupen-tasa altua
In situ izozteaEz da bideragarriaBideragarria eta erabiltzeko errazaBideragarria eta erabiltzeko errazaBideragarria eta erabiltzeko erraza

Zelulak izozteko medioak erabiltzea

izozte-zelulak-dmso

Berreskuratzeko zelula-kultura izozteko medioa

Zelula izozte eta berreskuratzeko oinarrizko printzipioa izozte motela eta desizozketa azkarra da. Esperimentuek frogatu dute horrek zelulen bideragarritasunaren kontserbazioa maximizatu dezakeela.

Gaur egun, zelulak izoztea glizerola edo dimetil sulfoxidoa erabiltzen du babes-agente gisa. Bi substantzia hauek zelula-mintzak urarekiko duen iragazkortasuna hobetu dezakete, eta izozte motelak zelula barruko ura zelulatik irtetea eragin dezake, zelula barneko izotz-kristalen eraketa murriztuz eta, horrela, izotza sortzeak eragindako zelulen kaltea murriztuz. kristalak. Zelulen suspertzea desizozte azkarraren bidez egin behar da, zelulaz kanpoko kristalak oso denbora laburrean urtzen direla bermatu eta desizozte geldoaren ondorioz zelulak kalteak saihestu ditzake, ura zeluletan sartzen uzten baitu zelulen barneko birkristalizazioa sortzeko.

Zelulen kriokontserbazioa tresna tekniko garrantzitsua da zelula-kulturarako, haziak sartzeko, haziak kontserbatzeko eta esperimentazio leunetarako. Garrantzitsua da zelula primarioak berehala izoztea zelula-kulturan eta leinu-ezarpenean. Hibridoma monoklonalaren antigorputz prestatzeko prozesuan, hibridoma zelulen izozte eta hazien kontserbazioa, klonazio bakoitzetik lortutako zelula subklonalak ezinbesteko eragiketa esperimentala izaten da. Zelula-lerro egonkor bat edo antigorputzak jariatzen dituen zelula-lerro egonkor bat ezarri gabe, zelula-hazkuntza prozesuak edozein unetan huts egin dezake zelulen kutsaduragatik, antigorputzak jariatzeko gaitasuna galtzeagatik edo mutazio genetikoa, etab. Jatorrizkoa izoztu gabe. zelulak, esperimentua galdu egingo da aipatutako istripuen ondorioz.

A. Zer da zelulen izoztea?

Zelulak ondo hazten direnean eta eskaintzak eskaria gainditzen duenean, zelulak izoztuta daudela eta gero erabiltzeko gordeta daudela kontsidera daiteke. Tenperatura -70 ℃-tik beherakoa denean, zelulen barruko jarduera entzimatikoa gelditzen da eta jarduera metabolikoa gelditzen da, beraz, epe luzerako biltegiratzeko helburua lor daiteke. Zelulak izoztean, tenperatura jaisten den heinean, zelulen barruko eta kanpoaldeko ura kristalizatu egingo da, eta sortutako izotz kristalek zelula-mintzen eta organuluen suntsipena eragingo dute, horrela zelulen heriotza eragingo du, batez ere -20-0 ℃-ko fasean, izotz-kristalak orratz itxurakoak dira eta zelulen kalteak eragiteko errazak dira.

B. Nola murriztu izotz kristal barneko kalte hori?

Erabili zelulak izozteko medio. Komuna zelula-kultura izozteko medio glizerola edo dimetil sulfoxidoa da (DMSO), zelula-mintzean azkar sar daiteke zelula sartzeko, izozte-puntua jaistea, liofilizazio-prozesua atzeratzea eta zelula-mintzaren iragazkortasuna areagotzea, zelula barneko ioien kontzentrazioa areagotzea, eraketa murriztea. zelula barneko izotz kristalak, eta horrela zelulen babeserako helburua lortzen da.

C. Zelulak kriokontserbatzeko prestatzea

Liofilizazio-soluzioa prestatzea (normalean % 10 DMSO + % 90 FBS kultura-euskarriarekin). Edo zelulak izozteko medio: seruma: DMSO=7:2:1.

D. Kriokontserbazio eragiketa

Hautatu bideragarritasun ona eta %80 inguruko dentsitatea duten zelulak, zelulak hazkuntza-fasean daudenean eta liofilizaziorako egokienak direnean. Zelulen liofilizazioa oraindik horma-zelulen liofilizazioan eta esekidura-zelulen liofilizazioan banatzen da.

Behatu zelulen egoera mikroskopioan. Zelula-dentsitatea handia bazen eta ertaina horia bihurtzen bazen, liofilizazio-eragiketa baino 4 orduz likidoa aldatu behar zen. Zelulak guztiz hazi ondoren, laborantza-plateraren medioa arretaz aspiratu zen pistola batekin, eta gero PBS garbitu zen behin edo bitan, eta garbitutako PBSa aspiratzen saiatu zen, eta tripsina gehitu zen zelulak digeritzeko. Digestioak tripsinaren ekintza-denboraren kontrolari erreparatu behar dio, zelulen digestioa desberdina da hormari atxikitzen zaion zelula bakoitza eta digestio-denbora asko aldatuko da. Tripsina digestioa eragiketa delikatua da, ez bakarrik zelulak guztiz digeritzeko eta zelula bakarreko esekidura batean apurtzeko inokulazio uniformea ​​lortzeko, baita gehiegizko digestioak eragindako zelulen kalte larriak ekiditeko ere. Tripsinaren jarduera, digestio-urratsak eta bezero bakoitzak erabiltzen dituen erreaktiboak desberdinak dira, beraz, ezin da guztiz zehaztu digestio-denbora, eta bezeroaren esperientzia da nagusi. Digestio-urratserako, bezeroak zelularekin esperientzia gutxi badu eta ezin badu tripsinaren ekintza-denbora zehatz-mehatz kontrolatu, honako eragiketa hau jarraitzea gomendatzen diogu bezeroari: lehenik eta behin, gehitu zelula tripsina giro-tenperaturara berotu ondoren, jarri 37. ℃ inkubagailua, eta gero zelula putz egin 30 segundoz behin, zelula putz egin badaiteke (ez digeritu zelula guztiz flotatzen den arte), esan nahi du zelulen digestioa amaitu dela eta digestioa amaitu daitekeela. Zelulen digestioaren ondoren, nahastu zelulak ahalik eta leunki burbuila gehiegi ez sortzeko. 30 segundo putz egiteak ez badu funtzionatzen, itxaron 30 segundo eta errepikatu eragiketa.

Digestioaren ondoren, gehitu 6-8 ML bitarteko oso digestioa amaitzeko, zelulak nahastu, bildu zelula esekidura zentrifugazio bidez 900-1000 rpm-n 3 minutuz, bota gainditzailea, gehitu prestatutako liofilizazio-euskarria, puztu astiro-astiro pipeta batekin. zelulak homogeneoak izateko, zatitu zelulak liofilizazio-hodietan, 1-1.5 ml hodi bakoitzeko, etiketatu liofilizazio-hodiak zelulen izenaz, liofilizazio-denbora eta eragilea eta jarri zelulak dituzten liofilizazio-hodiak horma lodietan. apar-kutxak. Zelulak horma lodiko apar-kutxa batean jarri ziren 4 ° C-ko hozkailuan 10-30 minutuz eta gero -80 ° C-ko hozkailuan jarri ziren gauean apar-kutxarekin batera.

Nola erosi zelulak izozteko euskarriak?

ANTITECK ematen laborategiko ekipoak, laborategiko kontsumigarriak, bizitza zientzien sektoreko ekipamenduak fabrikatzeko.
Gurea interesatzen bazaizu zelulak izozteko medio edo zalantzaren bat baduzu, idatzi mezu elektroniko bat helbide honetara [posta elektroniko bidez babestua], ahalik eta azkarren erantzungo dizugu.


    Cookieak erabiltzen ditugu gure webgunean ahalik eta esperientzia onena eskaintzeko. Gune hau erabiltzen jarraituz gero, cookieen erabilera onartzen duzu.
    Onartu
    Pribatutasun politika