Eksperyans ELISA prensip se senp, mwens etap, pwosesis kout, twous la se relativman fasil yo opere, inisyasyon nan eksperimantal ka fasilman kòmanse. Sepandan, byenke eksperyans lan rapid pou kòmanse, li pa tèlman fasil pou jwenn rezilta eksperimantal serye. Yo nan lòd yo pi byen ede eksperyans lan, isit la yo pral konsène sou twous yo ELISA ak echantiyon yo poze souvan kesyon yo òganize jan sa a.
Catalogue: Ekipman pou Elisa Kit Faktori
Aktyèl la ELISA twous yo sitou pou moun, sourit ak rat; yon ti kantite endikatè enplike espès espesyal tankou makak, lapen, kochon ak poul.
Si la ELISA twous yo nonmen ak yon pwen espesifik, sa vle di ke li se espesyalman pou espès sa a; si yo pa espesifye okenn espès, sa vle di ke twous la se inivèsèl nan espès ki enplike yo (egzanp moun, sourit, rat, makak, lapen, elatriye). Pou lòt espès espesifik, tanpri kontakte sipò teknik pou konfime konvnab tès la.
Yo nan lòd yo asire presizyon nan rezilta yo eksperimantal, nou rekòmande ke estanda yo ak echantiyon yo fè nan pwi miltip, men pa fòse eksperyans nan ELISA dwe fè nan plizyè pwi / 3 miltip pwi, kliyan yo ka mete pwòp bezwen yo selon eksperyans nan miltip byen.
| Koub make | Egzanp | Kantite echantiyon teste |
|---|---|---|
| Pa gen twou konpoze | Pa gen twou konpoze | 88 |
| Fè twou konpoze | Pa gen twou konpoze | 80 |
| Pa gen twou konpoze | Fè twou konpoze | 44 |
| Fè twou konpoze | Fè twou konpoze | 40 |
Pou asire presizyon rezilta yo, li pa rekòmande pou redwi kantite pwi yo.
Malgre ke etap sa yo operasyon nan Eksperyans ELISA se menm bagay la, plizyè faktè enfliyans yo pral chanje pou chak eksperyans. Se poutèt sa, yo dwe redesine koub estanda a pou chak eksperyans pou jwenn rezilta deteksyon ki pi egzak ak serye.
Si ou bezwen fè plizyè eksperyans, pi wo konsantrasyon estanda a apre yap divòse ka estoke nan kondisyon -20 ℃ nan pake separe pou evite konjelasyon repete ak dekonjle, epi itilize efektivman nan mwatye yon mwa.
Reyaktif klinik yo apwouve pa ajans autorité, tankou FDA, CFDA, elatriye. Reyaktif rechèch yo jeneralman devlope pa manifaktirè tèt yo epi yo pa bezwen verifye pa enstitisyon autorité.
Òganizasyon ki fè fas ak pwodwi dyagnostik klinik yo bezwen jwenn lisans antrepriz biznis aparèy medikal la. Reyaktif rechèch yo pa bezwen dokiman sa a.
Anjeneral, twous klinik yo itilize sèlman pou teste yon sèl kalite echantiyon sekretè tankou serom / plasma imen. Twous rechèch gen yon seri pi laj nan kalite echantiyon ak tès pase twous klinik yo. Sepandan, an jeneral, bon jan kalite a ak estabilite nan twous klinik yo pi bon pase twous syantifik.
Kit ELISA, eksepte pou ajoute BSA kòm yon pwoteyin pwoteksyon, pa genyen okenn lòt engredyan ki gen orijin bèt epi yo satisfè egzijans pwotokòl biosekirite Cartagena. Anplis de sa, konsèvasyon nan twous la se proclin 300, ki se mwens toksik ak san danje pou anviwònman an.
Kit ELISA yo ka itilize nan diferan kantite. Bann anzim nou yo detachable, kidonk, ou ka detèmine kantite bann ou bezwen pou chak eksperyans ak kontni chak eleman reyaktif selon bezwen eksperimantal ou yo.
Yo rekòmande estanda solubilize yo pou yo estoke nan pi wo konsantrasyon/pakèt mèt, divize ak estoke nan -20 ° C, evite repete konjelasyon ak dekonjle, epi itilize efektivman nan mwatye yon mwa.
Solisyon k ap travay antikò biotinilate ak solisyon travay konjige HRP anzim bezwen prepare epi itilize kounye a. Konsantre ki pa itilize yo ak lòt konpozan yo ta dwe estoke nan 2 ~ 8 ℃/-20 ℃ respektivman dapre enstriksyon yo nan yon fason apwopriye, epi yo ka estoke pou 6 mwa.
Serom: Pou Tès ELISA, Tib koleksyon san ki pa antikoagulant/procoagulant yo obligatwa
(anjeneral tib koleksyon san wouj, jòn, ki gen bouchon zoranj)
Plasma: pou tès imunosorban ki lye ak anzim, tib san ak anticoagulant. (anjeneral vèt, tib koulè wouj violèt)
Apre koleksyon echantiyon ELISA, si tès la fèt nan yon semèn, li ka estoke nan 1-2 ° C. Si li pa ka teste nan tan, tanpri dispanse li nan yon sèl-itilize kantite lajan epi friz li nan -8 ° C (tèzay nan 20 mwa) oswa -1 ° C (tèzay nan lespas 80 mwa) pou fè pou evite repete konjelasyon ak dekonjle.
Anvan tès, tou dousman dekonjle echantiyon nan frizè ak santrifijez la pou retire presipite ki te pwodwi pandan pwosesis friz-degel.
Emolysis ka koze pa yon varyete de faktè fizikochimik ak toksin. Nan vitro, emoliz ka koze pa mekanik fòs souke, konjelasyon kriyojenik ak lòt deklannche. Pou evite efè emoliz sou rezilta tès yo, yo ta dwe peye atansyon a.
Lè w kolekte san nan venn, presyon ponp lan pa ta dwe twò wo.
Kantite san yo kolekte nan yon sèl fwa pa ta dwe twò piti.
San an antye kolekte pa ta dwe souke kouray.
Vitès santrifugasyon pa ta dwe twò wo.
San an antye kolekte ta dwe trete nan serom/plasma pi vit ke posib epi san an antye pa ta dwe jele oswa deglase.
Si yo bezwen anestezi pou koleksyon san, yo ta dwe itilize anestezi san efè emolitik.
Echantiyon tisi: apre tisi fanm k'ap pile, mete yo nan -80 ° C pou 1 h / azòt likid pou 0.5 h, Lè sa a, mete yo nan yon beny dlo 30 ° C ak yon ti tranbleman pou fè yo dekonjle rapidman, epi repete operasyon an 1-2 fwa. .
Echantiyon selilè: friz-dekonjle 2-3 fwa repete dapre etap operasyon ki anwo yo. Ka ta gen pwoteyin manbràn, sonication ka fèt yon fason ki apwopriye, men tanperati a ak frekans nan sonication bezwen kontwole.
Li rekòmande pou ajoute inibitè proteaz nan echantiyon an davans. PMSF rekòmande nan ka woutin.
Ranje deteksyon twous la pa menm ak seri konsantrasyon analit nan echantiyon an. Li rekòmande pou estime konsantrasyon analit la nan echantiyon an atravè literati enpòtan anvan eksperyans lan epi detèmine konsantrasyon aktyèl echantiyon an nan pre-eksperyans.
Nan ka kalite echantiyon woutin, yo ka konsilte sipò teknik ELISA pou jwenn dilution rekòmande echantiyon an epi fè aranjman pou tès pre-eksperimantal.
Si konsantrasyon nan analit yo dwe mezire nan echantiyon an twò wo oswa twò ba, fè yon dilution apwopriye oswa konsantrasyon nan echantiyon an.
Si konsantrasyon analit la nan echantiyon an pi ba anpil pase limit deteksyon minimòm twous la, li rekòmande pou chwazi yon twous ki pi sansib pou tès la.
Echantiyon ki gen anpil grès gen grès, pa solisyon omojèn, si dirèkteman sou echantiyon an, li pral afekte obligatwa nan antikò antijèn, sa ki lakòz valè mezi kòrèk. Li rekòmande pou santrifuje nan gwo vitès (5000 × g) an premye, kite l kanpe pou 10 min, pran kouch mitan an nan plis klarifye likid, Lè sa a, santrifuje yon fwa ankò nan gwo vitès (≥5000 × g), pran mitan an ak pi ba. kouch likid klè epi sèvi ak li pou tès la.
Ranje deteksyon twous ELISA a pa ekivalan ak seri konsantrasyon analit yo dwe teste nan echantiyon an. Anvan eksperyans lan, li rekòmande pou estime konsantrasyon analit la nan echantiyon an nan literati ki enpòtan epi detèmine konsantrasyon aktyèl echantiyon an atravè eksperyans pre-.
Si echantiyon tès ELISA ou a bezwen dilution, pwotokòl dilution referans la se jan sa a.
| Tan dilution | Pwogram dilution |
|---|---|
| Dilution 100-pliye | Yon sèl-etap dilution. Pran 5μL echantiyon nan 495μL estanda & echantiyon diluant epi fè yon dilution 100-pliye. |
| Dilution 1000 fwa | De-etap dilution. Pran 5 μL nan echantiyon nan 95 μL nan estanda & echantiyon dilye ak delye 20 fwa, Lè sa a, pran 5 μL nan 20 fwa echantiyon dilye nan 245 μL nan estanda & echantiyon dilyan ak delye 50 fwa, total dilution 1000 fwa. |
| Dilution 100000 fwa | Twa etap dilution. Pran 5μL nan echantiyon nan 195μL nan estanda & echantiyon dilye ak delye 40 fwa, Lè sa a, pran 5μL nan 40 fwa echantiyon dilye nan 245μL nan estanda & echantiyon dilye ak dilye 50 fwa, epi finalman pran 5μL nan 2000 fwa echantiyon dilye nan 245μL nan estanda & echantiyon diluent ak delye 50 fwa, pou yon dilution total de 100000 fwa. |
Pou chak etap dilution, volim likid pran pa ta dwe mwens pase 3 μL ak dilution pa ta dwe depase 100 fwa. Chak etap dilution ta dwe byen melanje.
Li rekòmande pou itilize lojisyèl Orijin oswa lòt lojisyèl ki gen yon modèl 4-PL (kat paramèt lojistik) pou anfòm koub estanda a. 4-PL Fitting metòd ka pi byen reflete relasyon lineyè ki genyen ant konsantrasyon ak absòbe, epi konsa jwenn plis presizyon konsantrasyon sibstans ki sou yo dwe mezire nan echantiyon an. De metòd Fitting sa yo pa rekòmande pou ELISA estanda.
Kalkil rezilta eksperyans ELISA gen ladann koub estanda ak kalkil konsantrasyon echantiyon. Yo te kalkile valè OD mwayèn nan estanda ak echantiyon echantiyon yo, epi yo te soustraksyon valè OD yo nan pi vid yo kòm valè koreksyon yo. Avèk konsantrasyon an kòm kowòdone orizontal la ak valè OD kòm kowòdone vètikal la, yon koub estanda fonksyon lojistik kat paramèt te ekipe sou kowòdone logaritmik doub, ak Lè sa a, valè echantiyon OD la te ranplase nan koub estanda a pou jwenn valè konsantrasyon echantiyon an. Si echantiyon an te dilye anvan mezi, konsantrasyon aktyèl echantiyon an ta dwe miltipliye pa faktè a dilution.
