Sitomèt koule se yon aparèy pou analiz otomatik ak klasman selil yo. Li ka rapidman mezire, estoke ak montre yon seri de paramèt enpòtan byofizik AK byochimik nan selil dispèse sispann nan likid, epi li ka klasifye sous-ansanm selil espesifye yo dapre seri paramèt pre-seleksyon an. Pifò sitomèt koule yo se enstriman rezolisyon zewo, ki ka sèlman mezire kantite total asid nikleyik, total pwoteyin, ak lòt endikatè nan yon selil, men yo pa ka idantifye ak detekte kantite asid nikleyik oswa pwoteyin nan yon pati patikilye. Nan lòt mo, li gen zewo rezolisyon detay.
Mezi milti-paramèt ka fèt an menm tan pa
sikometri koule, ak enfòmasyon an sitou soti nan siyal fliyoresan espesifik ak siyal ki pa fliyoresan gaye. Se mezi a te pote soti nan zòn nan mezi, sa yo rele zòn nan mezi se pwen an entèseksyon vètikal nan gwo bout bwa a lazè ak gwo bout bwa a koule likid ejecting bouch la. Lè yon sèl selil nan sant koule likid la pase nan zòn mezi a, lazè a iradye li epi gaye limyè nan tout espas la ak yon Ang solid 2π. Longèdonn limyè a gaye se menm ak longèdonn limyè ensidan an. Entansite ak distribisyon espasyal limyè gaye yo gen rapò ak gwosè, mòfoloji, manbràn plasma ak estrikti entèn selil la paske paramèt byolojik sa yo gen rapò ak pwopriyete optik selil la, tankou refleksyon ak refraksyon limyè. Selil ki pa te soufri okenn domaj gen karakteristik limyè gaye, kidonk diferan siyal limyè gaye yo ka itilize pou analize ak sòt selil vivan san yo pa tach. Siyal limyè a gaye nan selil fiks ak tache se sètènman diferan de sa yo ki nan selil k ap viv akòz pwopriyete yo chanje optik. Limyè a gaye pa sèlman ki gen rapò ak paramèt selil la kòm sant la gaye, men tou, ak faktè abyotik tankou Ang la gaye ak Ang solid la nan kote limyè a gaye kolekte.
In
sikometri koule mezi, de kalite limyè gaye yo souvan itilize: a. Angaj Avant (0 Angle) gaye (FSC); b. Side scattering (SSC), ke yo rele tou 90 Angle gaye. Ang ki refere isit la refere a Ang ki fòme apeprè ant direksyon gwo bout bwa lazè a ak direksyon axial tib fotomultiplikatè ki kolekte siyal limyè ki gaye. Anjeneral pale, entansite a nan pi devan Ang limyè gaye ki gen rapò ak gwosè a nan selil yo ak ogmante ak ogmantasyon nan zòn kwa-seksyonèl selil pou popilasyon an menm selil. Eksperyans yo sou selil vivan esferik yo montre ke li se fondamantalman lineyè ak gwosè a nan zòn nan kwa-seksyonèl nan seri a nan yon ti Ang solid. Fòm konplèks la ak oryantasyon selil la ka trè diferan, espesyalman bezwen peye atansyon. Se mezi limyè ki gaye bò kote yo itilize sitou pou jwenn enfòmasyon sou pwopriyete granulaire nan estrikti amann entèn selil la. Malgre ke limyè ki gaye bò a gen rapò tou ak gwosè ak fòm selil la, li pi sansib a endèks refraktif manbràn selilè a, sitoplasm, ak manbràn nikleyè, epi li ka bay tou yon repons sansib a patikil ki pi gwo nan la. sitoplasm.
Nan pratik, enstriman an dwe premye mezire siyal la gaye limyè. Lè yo itilize nan konbinezon ak sond fliyoresan, analiz gaye limyè ka fè distenksyon ant selil ki tache ak ki pa tache nan yon echantiyon. Itilizasyon ki pi efikas nan mezi gaye limyè se idantifye sèten sougwoup ki soti nan popilasyon eterojèn. Siyal fluoresans sitou gen ladan de pati: a. Fliyoresans espontane, se sa ki, san yo pa tach fluoresans, fliyoresan molekil fliyoresan nan selil la apre iradyasyon limyè; b. Karakteristik fliyoresans, se sa ki, fliyoresans ki emèt pa selil yo apre tach konbine avèk lank fliyoresan sou limyè a, entansite fliyoresan li yo fèb, ak longèdonn a diferan de sa ki nan lazè a iradyasyon. Siyal otofluoresan se yon siyal bri, ki ka entèfere ak diskriminasyon ak mezi siyal fluoresans espesifik nan pifò ka yo. Nan mezi iminositochimik, ki jan yo amelyore rapò siyal-a-bri se kle pou antikò fliyoresan ak nivo ki ba obligatwa.
An jeneral, pi wo kontni an nan molekil (egzanp, riboflavin, cytochrome, elatriye) ki ka pwodwi otofluoresans nan eleman selilè yo, se pi fò otofluoresans la.
An jeneral, pi wo kontni an nan molekil (egzanp, riboflavin, cytochrome, elatriye) ki ka pwodwi otofluoresans nan eleman selilè yo, se pi fò otofluoresans la. Plis rapò selil mouri ak selil vivan yo pi wo, se otofluoresans la pi fò. Pi wo pwopòsyon selil klere nan echantiyon selil la, se pi fò otofluoresans la. Mezi prensipal yo pou diminye entèferans otofluoresan ak amelyore rapò siyal-bri yo jan sa a: a. Chwazi koloran fliyoresan klere osi lwen ke posib; b. Chwazi lazè ki apwopriye ak sistèm optik filtre; c. Kontribisyon background nan autofluorescence konpanse pa yon kous konpansasyon elektwonik.
a. Limen pouvwa a epi prechofe sistèm lan.
b. Louvri papòt gaz la, ajiste presyon an, epi jwenn vitès koule likid ki apwopriye a; Limen sistèm refwadisman sous limyè a.
c. Ajoute dlo deyonize nan tib echantiyon an, rense sistèm bouch.
d. Sèvi ak echantiyon estanda kalibrasyon an, ajiste enstriman an pou entansite fliyoresans 0 ak 90 gaye se pi wo a, epi koyefisyan varyasyon an oblije minimòm, sou baz pouvwa lazè a, vòltaj tib fotomultiplikatè a ak benefis nan kous la anplifikatè.
e. Chwazi pousantaj koule, mezi nimewo selilè, paramèt mezi, elatriye, nan menm kondisyon travay yo pou mezire echantiyon an ak echantiyon kontwòl; An menm tan an, chwazi mòd nan ekspozisyon nan done yo sou ekran òdinatè a, konsa tankou entwitif atrab pwosesis la mezi.
f. Apre yo fin mezire echantiyon an, yo itilize dlo deyonize pou vide sistèm koule likid la.
g. Paske done eksperimantal yo te estoke nan òdinatè a ki gen kapasite difisil (kèk machin tou gen yon sistèm CD-ROM, kidonk kapasite depo se pi gwo), kidonk, ou ka fèmen gaz la, ak aparèy mezire, epi sèvi ak yon òdinatè pou kont li pou tretman done.
h. Enprime rezilta yo mande yo.
Si ou enterese nan nou an
sitomèt koule oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay
[imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.