HPLC Kolòn Chofaj

Content
1. Ki sa ki aparèy chofaj kolòn HPLC?
    1.1 HPLC prensip k ap travay
    1.2 Ki sa ki se tan retansyon nan HPLC
2. Kalite kwomatografi kolòn
    2.1 Diferan kalite kwomatografi kolòn
3. Diferans ant HPLC ak kolòn kwomatografi
    3.1 Kwomatografi likid vs kwomatografi kolòn
4. Ki jan yo achte aparèy chofaj kolòn HPLC?

Moun ki souvan fè analiz faz likid dwe abitye ak la aparèy chofaj kolòn. Sa a se paske la chanm tanperati kolòn pèmèt retansyon kwomatografik ki pi estab san entèferans nan fluctuations tanperati, sa ki lakòz pi bon repwodiksyon kwomatografik. An menm tan an, li gen pi bon efikasite separasyon kwomatografik ak yon fòm pik pi simetrik ak amelyore tèm transfè mas nan ekwasyon Van Diemen. La HPLC aparèy chofaj kolòn gen avantaj ki genyen nan plasman fleksib, enstalasyon rapid, obsèvasyon fasil, ak yon konsepsyon san danje ki pa koule.

Konpozan yo nan melanj la yo separe ak pirifye nan la kolòn kwomatografik pa entèraksyon ak faz estasyonè ak mobil. Faz estasyonè a se yon ti materyèl patikil pore ki prezan nan kolòn kwomatografik la. Faz mobil lan se yon sòlvan oswa yon melanj de solvants ki fòse nan kolòn nan anba presyon ki wo. Se echantiyon an sou fòm piki ak yon sereng ak melanje ak faz mobil la atravè yon valv ki konekte nan bouk echantiyon an, ak eleman yo nan echantiyon an yo Lè sa a, pase nan kolòn nan nan diferan pousantaj. Akòz diferan kapasite adsorption ant eleman yo ak faz estasyonè a, chak eleman ap koule soti nan kolòn nan vire epi detektè ki apwopriye a konvèti konsantrasyon eleman an nan yon nimewo telekominikasyon pou transmisyon nan lojisyèl HPLC nan òdinatè a. Nan fen kouri a, chromatogram la disponib nan lojisyèl HPLC.

Jounal tan retansyon nan HPLC se tan ki nesesè pou echantiyon an koule soti nan antre nan sòti nan kolòn nan. Diferan sibstans ki sou kolòn diferan ak diferan faz mobil pral gen diferan tan retansyon, kidonk tan retansyon se youn nan paramèt ki pi enpòtan nan analiz kwomatografik.

Konpozan echantiyon separe depi nan konmansman an nan piki a nan tan an apre kolòn nan lè konsantrasyon nan eleman an nan valè a maksimòm, se sa ki, depi nan konmansman an nan piki a nan pik la nan yon eleman nan tan an kwomatografik pase lè pik la, ke yo rekonèt kòm la tan retansyon nan eleman sa a. La tan retansyon HPLC se RT eksprime, souvan an minit (min) kòm inite tan an. Tan retansyon an detèmine pa faktè tèmodinamik nan pwosesis kwomatografik la. Anba sèten kondisyon fonksyònman kwomatografik, nenpòt sibstans gen yon tan retansyon defini, ki gen menm wòl ak valè espesifik chanjman an epi yo ka itilize kòm baz pou analiz kalitatif kwomatografik.

Ou ta dwe peye atansyon sou varyasyon tan retansyon nan HPLC. Nan Separasyon HPLC, si la tan retansyon kwomatografi likid se twò kout, sa vle di ke sibstans nan separe mal kenbe sou tèt faz nan estasyonè, epi li posib entèfere ak detèminasyon an nan sibstans la yo dwe mezire pa melanje ak enpurte ki pa kenbe. Natirèlman, sa a se sèlman yon sitiyasyon komen lè w ap itilize detektè ki pa trè espesifik, tankou UV ak ELSD. Sepandan, si yo itilize yon detektè ki gen espesifikasyon segondè tankou fluoresans oswa espektometri mas, entèferans sa a pral redwi anpil oswa eskli.

Kwomatografi, ke yo rele tou likid kwomatografi, ak analiz kwomatografik, se yon metòd separasyon ak analiz ki gen aplikasyon trè laj nan chimi analyse, chimi òganik, byochimi, ak lòt jaden. Komen an metòd kwomatografik gen ladan chromatografi kolòn, chromatografi kouch mens, chromatografi likid segondè-pèfòmans, chromatografi gaz, ak chromatografi likid superkritik.

Orijinal la metòd kwomatografik, ki enjekte faz estasyonè a nan yon tib vè boure ak koton oswa papye filtre nan fen ki pi ba, gaye poud nan faz estasyonè satire pa echantiyon an sou tèt la nan tib an vè ak elite ak faz mobil la. Gen de metòd elisyon komen: youn se tèt-desann konte sou gravite a nan sòlvan an tèt li, ak lòt la se anba-up repoze sou aksyon kapilè.

Genyen tou de metòd diferan pou kolekte fraksyon pi a apre separasyon. Yon metòd se aksepte solisyon an efluan dirèkteman nan fen kolòn nan, ak lòt metòd la se sèk faz estasyonè a ak Lè sa a, mekanikman separe gwoup yo endividyèl ak ekstrè molekil yo eleman pa tranpe faz nan estasyonè nan yon sòlvan apwopriye.

Kolomat kwomatografi se lajman ki itilize pou separasyon nan melanj, ki gen ladan separasyon nan pwodwi sentèz òganik, ekstrè natirèl, ak makromolekil byolojik.

Mens chromatografi kouch se yon metòd kwomatografi ki lajman itilize. Nan metòd kwomatografi sa a, faz estasyonè a kouvwi sou yon plak metal oswa vè pou fòme yon kouch mens, epi echantiyon an takte sou yon bout plak la ak yon tib kapilè, plim, oswa lòt zouti, apre yo fin takte fen a se. benyen nan faz mobil la ak sòlvan faz mobil la gaye sou plak la pa aksyon kapilè.

Kwomatografi kouch mens se yon metòd ki pa chè ak fasil-a-itilize ki itilize pou mezi a brit nan echantiyon ak deteksyon an nan pwosesis reyaksyon nan sentèz òganik.

Koulye a, nan Kwomatografi likid segondè-pèfòmans (HPLC) se youn nan metòd analiz kwomatografik ki pi lajman itilize. Yon sistèm kwomatografi likid konsiste de yon boutèy rezèvwa faz mobil, ponp perfusion, piki, kolòn, detektè, ak achiv, ak konpozisyon jeneral li sanble ak gaz chromatografi. Ponp perfusion HPLC mande pou yon volim perfusion ki estab ak ekilibre; sistèm piki a mande piki pratik ak chanjman sere; kòm viskozite nan faz mobil likid la pi piti anpil pase sa yo ki nan gaz la, kolòn nan chromatografi likid se jeneralman pi epè ak longè a se pi piti anpil pase sa yo ki nan kolòn chromatografi gaz diminye presyon an kolòn. HPLC yo itilize nan yon pakèt aplikasyon, nan prèske chak domèn analiz quantitative ak kalitatif.

Kwomatografi gaz se yon metòd separasyon lè l sèvi avèk gaz tankou elyòm oswa agon kòm gaz transpòtè (ki rele faz mobil), epi enjekte echantiyon melanj lan nan kolòn nan ak filler (ki rele faz estasyonè). Konpozan separe yo konvèti an siyal elektrik pa yon detektè epi anrejistre pa yon achiv.

Kwomatografi likid sipèkritik (SFC) se yon pwosesis kwomatografik ki sèvi ak yon likid superkritik kòm faz mobil pou fè separasyon ak analiz lè w konte sou kapasite solvantizasyon faz mobil lan. Li se yon nouvo teknoloji devlope ak pèfeksyone nan ane 1980 yo. Kwomatografi likid superkritik li pi fasil pou reyalize pi wo efikasite kolòn pase chromatografi likid.

a) Kwomatografi Adsorption

b) Kwomatografi patisyon

c) Kwomatografi Iyon

d) Kwomatografi eksklizyon gwosè

e) kwomatografi bonded-faz

f) Kwomatografi afinite

a) Faz la estasyonè nan adsorption chromatografi se adsorban an, ak pwosesis la separasyon nan chromatografi te pote soti sou sifas la nan adsorban an, san yo pa antre nan enteryè a nan faz nan estasyonè.

b) Nan kwomatografi patisyon, tou de faz mobil ak estasyonè yo se likid. Molekil echantiyon yo byen vit rive nan patisyon ekilib ant de faz likid yo epi yo separe lè l sèvi avèk diferans nan koyefisyan patisyon nan eleman yo nan de faz yo, ki se menm jan ak yon pwosesis ekstraksyon.

c) Kwomatografi echanj iyon anjeneral itilize yon résine echanj ion kòm faz estasyonè. Anjeneral, iyon echantiyon yo fè echanj revèsib ak iyon faz estasyonè, epi separasyon kwomatografi reyalize akòz kapasite echanj diferan nan chak iyon eleman.

a) Segondè presyon. Faz mobil lan se yon likid, ki sijè a gwo rezistans lè ap koule tankou dlo nan kolòn nan. Pou pase nan kolòn nan byen vit, yo dwe aplike presyon ki wo nan likid konpayi asirans lan.

b) Gwo vitès. Vit analiz ak vitès likid transpòtè rapid, pi vit pase klasik chromatografi likid. Anjeneral, li analize yon echantiyon nan 15 a 30 minit, ak kèk echantiyon ka menm ranpli nan 5 minit. Tan analiz la anjeneral mwens pase 1 èdtan.

c) Segondè efikasite. Segondè efikasite separasyon. Faz estasyonè a ak faz mobil ka chwazi pou reyalize pi bon efè separasyon, ki se anpil fwa pi wo pase efikasite separasyon kolòn distilasyon endistriyèl ak gaz chromatografi.

Sèvi ak likid kòm faz mobil, faz estasyonè a ka nan divès fòm, tankou papye, plak mens, ak kabann plen.

Si ou enterese nan nou an HPLC aparèy chofaj kolòn oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.