Cell Scraper & Cell Lifter

Tou de grate selilè ak lifter selil yo itilize prensipalman pou kolekte selil yo. Lam nan yo fèt pou redwi anpil domaj nan selil yo epi pèmèt aksè nan sifas kwasans lan. Se lam la anjeneral te fè nan materyèl polymère TPE, ak hilt la anjeneral te fè nan materyèl polymère ABS. Materyèl sa yo apwopriye pou rekòlte selil yo.

Selil lifter se sitou fèt pou itilize nan kilti selilè asyèt pou kwen lajè bizote li yo.

Ratwa selilè ak angle, lam wotasyon pou aksè fasil nan sifas la kwasans nan flakon ak asyèt Petri.

a. Pou rekòlte manyèl selil yo.

b. Konsepsyon lam fè kontak lis ak zòn nan sifas kwasans, sa ki lakòz domaj minim nan selil yo.

c. Esterilizasyon radyasyon Gamma.

d. Ki pa pirojenik, ki pa andotoksik, ki pa sitotoksik.

e. Diferan longè manch kouto satisfè egzijans pou kiltive koleksyon kilti selil diferan.

f. Endividyèlman vlope.

g. Boutèy laboratwa ki disponib.

h. Diferan gwosè pou opsyon: 18cm, 25cm, 40cm, mini grate selilè, Elatriye

mwen. Itilize ak plak byen, tankou grate selil pou plak 24 byen, grate selil pou plak 12 byen, Elatriye

Nan endistri pharmaceutique, kilti selilè te vin yon eleman enpòtan nan pwodiksyon antikò. Teknoloji kilti selil yo te itilize pou pwodui antikò ki gen rapò ak rotaviris, polyo, varisèl, epatit, ribeyòl ak varisèl. Antikò ki baze sou selil kont grip yo te apwouve tou pou itilize nan Etazini ak anpil peyi Ewopeyen an. Men kèk egzanp sou grate selil & lifter selil aplikasyon yo.

Kwasans ak pwopagasyon selil ki grandi kont miray la anpeche pa lefèt ke espas la se lajman satire apre flakon kilti a oswa plat kilti grandi nan yon gaye monokouch. Kiltivasyon pasaj selilè fèt pou pèmèt kontinye ekspansyon oswa kwasans selil. Epitou, kilti pasaj sèvi pou prezève selil espès yo. Anplis, yon varyete eksperyans selil yo baze sou kiltivasyon pasaj selilè.

Sispann selil yo ka dirèkteman divize an boutèy, pandan y ap selil ki gen miray ranpa yo bezwen dijere ak lòt tretman anvan yo ka divize an boutèy. Trypsin se jeneralman yo itilize pou dijere selil aderan yo nan selil endividyèl, epi EDTA ka ajoute tou pou amelyore dijesyon. EDTA se yon chelator iyon divalan ki anpeche Ca2 + ak Mg2 + sou manbràn selilè a. Solisyon dijere selil yo souvan itilize jeneralman gen 0.25% (w/v) trypsin ak 0.03% (w/v) EDTA.

Pandan eksperyans la, ou ta dwe aspire supernatant kilti selil la, lave selil yo ak PBS, jete solisyon lave a, epi ajoute yon ti kantite solisyon dijesyon tripsin-EDTA. Tou depan de gwosè plat kilti a, 2 ml a 5 ml solisyon dijesyon se ase pou gaye tout anba plat la. Lè sa a, selil yo obsève jiskaske yo vin wonn epi detache nan miray boutèy la, ki anjeneral pran 3-5 minit. Pou evite gwoupman selil yo, ou pa ta dwe frape flakon la pandan pwosesis dijesyon an. Pou selil ki patikilyèman difisil pou dijere, ou ka ajoute solisyon dijesyon tripsin EDTA epi mete selil yo nan 37 ° C pou fasilite dijesyon. Apre selil yo te detache nan miray boutèy la, ou ta dwe imedyatman ajoute mwayen konplè ki gen serom pou avòte dijesyon an.

Santrifige selil yo nan 800-1000 rpm pou 5 minit. Lè sa a, jete mwayen ki sispann, ajoute yon nouvo mwayen apwopriye epi melanje selil yo dousman epi transfere yo nan yon nouvo flacon kilti. Pousantaj nan pasaj depann de kalite selil la. Trypsin ka lakòz domaj nan manbràn selilè kèk selil yo. Pou kalite selil sa a, ou ka dousman grate yo ak yon cellscraper, ajoute kantite ki apwopriye nan mwayen, dousman kònen melanje selil yo, ak Lè sa a, pase yo nan kilti a.

a. Konfime ke machin glas la limen e ke gen ase glas kraze pou itilize pandan operasyon an.

b. Konfime ke machin glas la limen e ke gen ase glas kraze pou itilize pandan operasyon an.

c. Konfime ke makè anzim la ap travay byen, pran yon randevou epi enskri anvan ou itilize.

d. Prepare 4 seri tib santrifujeur 1.5 mL. Yo itilize yo pou kolekte sispansyon selil lysed, kolekte supernatant pwoteyin apre santrifujasyon, detèmine konsantrasyon echantiyon pwoteyin apre dilution 5 fwa, epi detèmine konsantrasyon echantiyon pwoteyin apre dilution 10 fwa.

e. Prepare solisyon liz selil.

Anvan w itilize, melanje solisyon liz selil la nan rapò lysate 1mL: inibitè proteaz (PMSF) 10μL. PMSF efikas nan lespas 30 minit, kidonk peye atansyon sou preparasyon ki pare pou itilize.

Kalkile kantite likid fonksyònman ki bezwen prepare davans. Kantite likid fonksyònman espesifik la dwe kalkile sou yon baz ka pa ka. Anjeneral pale, si selil yo rive nan 70 ~ 80% konfluyans nan yon flakon kilti 25T, 250 ~ 350μL nan solisyon k ap travay yo bezwen pou itilize. Si ou ajoute twòp solisyon lysis selil, konsantrasyon nan pwoteyin echantiyon final la ka twò ba. Si yo ajoute solisyon liz selil ensifizan, liz selil la pa ase epi echantiyon an se kolan fasil bloke pwent zam 200 μL la. Likid fonksyònman lysis selil yo rekòmande yo dwe pre-refwadi nan 4 ° C.

f. Prepare grate selilè ak lifters selil yo. Omwen 3 moso nan yo pou altène lè grate selil yo.

g. Prepare twa gode ki gen 100 mL oswa pi gwo volim. Beakers sa yo bezwen pre-lave epi ranpli ak dlo ultrapur. Yo itilize yo pou lave sekans nan itilize grate selilè. Tou de la kaoutchou selil grate ak grate selil plastik ki disponib. Kawotchou polisye selil grate se pi plis rekòmande.

h. Prepare solisyon sèl ekilib.

mwen. Prepare yon twous tès konsantrasyon pwoteyin BCA.

j. Prepare SDS tanpon chaje. Li estoke nan -20 ℃ epi yo ta dwe louvri davans anvan ou itilize.

Pa gen pwoblèm ki kalite eksperyans w ap fè, li esansyèl pou kenbe tab opere ou pwòp ak pwòp. Lè w ap manipile eksperyans tankou ekstraksyon pwoteyin oswa ekstraksyon ADN/RNA, li rekòmande pou opere nan yon tab ultra-pwòp. Nan absans yon tab ultra-pwòp, nou ta dwe asire ke tab la opere se kòm pwòp ke posib. Epitou, kenbe tab la opere pwòp se yon bon abitid ki bezwen devlope pou nenpòt operasyon eksperimantal.

Lè yo konfime enstriman laboratwa ki nesesè pou eksperyans la, selil yo ka retire nan lòj selil la.

Apre w fin retire selil yo, ou ta dwe lave yo ak PBS nan tanperati chanm. Lè sa a, tout operasyon yo ta dwe fèt sou yon beny glas.

Ajoute 250 a 350μL solisyon lysis nan chak flakon selil yo. Lysate la ta dwe byen gaye epi liz nan yon beny glas pou 10 minit. Ou ta dwe repete gaye lysate la toujou pandan 10 minit sa a. Teknik gaye lysate la se menm jan ak dijesyon tripsin. Pandan w ap tann lysis, ou ta dwe rekonfime tanperati santrifujeur, thermostat, ak beny dlo.

Apre lysis fini, ou ta dwe grate selil yo lè l sèvi avèk yon grate selilè. Chak aksyon grate nan selil yo ta dwe kolan ak solisyon lysis, kenbe yon direksyon soti anwo jouk anba, ak aksyon an se tankou grate ak lave vè.

Sèvi ak yon pipèt 200 μL pou transfere sispansyon selil grate a nan yon tib santrifij 1.5 mL (tousuit apre w fin grate yon echantiyon) epi repete kònen 30-60 fwa pou kraze selil yo nèt. Eseye evite bul lè pandan pwosesis la mouche. Apre mouche an fini, yo ta dwe mete tib santrifijeur a ak echantiyon an sou glas.

Ou ta dwe rense a grate selilè ak lifter selil itilize nan etap e. nan twa gobelèt nan vire, souke grate selilè dousman epi mete yo sou yon etajè tib tès pou sèk. Si lifters selil yo yo pa netwaye, sa ka mennen nan kwa-kontaminasyon nan echantiyon yo. Si selil yo pa cheche, sa ki lakòz dilution echantiyon.

Apre echantiyon yo tout grate epi transfere nan tib santrifij, yo kontinye ap lysed nan yon beny glas pou 5-10 min. Pandan peryòd sa a, kondisyon santrifujeur, thermostat, ak beny dlo yo ta dwe rekonfime.

Apre lysis fini, santrifije nan 12,000g, 4 ° C, pou 5 min.

Pran supernatant la epi sèvi ak li pou prepare mezi konsantrasyon pwoteyin ak echantiyon denaturasyon pou WB. Lè w ap pran echantiyon sipènatan an pou WB, tanpri anrejistre volim echantiyon an epi ajoute volim korespondan SDS loading tanpon an imedyatman dapre volim echantiyon an pou prepare echantiyon pou kwit manje a.

a. Yo ta dwe chofe tèmostat la a 37 ° C davans.

b. Konfigure 5 × ak 10 × solisyon quantification pwoteyin epi kanpe sou kote sou glas apre preparasyon an. Isit la li rekòmande yo sèvi ak PBS pou dilution echantiyon, paske koulè D-Hanks tèt li ka afekte rezilta final la nan quantification konsantrasyon pwoteyin.

5× dilution: 80 μLPBS + 20 μL supernatant.
10× dilution: 90 μLPBS + 10 μL supernatant.

c. Prepare twous quantification pwoteyin BCA a epi kalkile kantite total likid opere jan sa nesesè. Prepare likid fonksyònman an dapre enstriksyon yo nan rapò a BCA: Cu= 50: 1. Pa bliye melanje likid la nèt. Solisyon an k ap travay melanje se yon koulè klè, limyè ble.

d. Se plak la 96-pi ki pike ak 20 μL pou chak pi, epi omwen twa repitasyon pwi yo mete kanpe. Paske echantiyon pwoteyin lan trè gluan ak volim ki pike a piti, pwent zam la ka pwolonje nan pi a epi li ka mete pwent an nan pi a pou konplete echantiyon ki pi wo a lè l sèvi avèk tansyon likid la.

e. Apre adisyon echantiyon an fini, chak echantiyon byen konplete ak 200 μL likid fonksyònman an. Aksyon an nan ajoute likid opere yo ta dwe rapid ak pwòp. Rapid ak pwòp adisyon nan likid opere fasilite bon jan melanje.

f. Enkube pou 30 minit nan 37 ° C. Apre reyaksyon an fini, tès la ta dwe fini nan 3 ~ 5 minit.

g. Absorbans la mezire nan longèdonn espesifye pa yon makè anzim.

h. Konsantrasyon pwoteyin yo ta dwe kalkile dapre ekwasyon koub estanda ki te prepare anvan an. Gade enstriksyon twous yo pou metòd pou trase koub estanda a.

a. Prechofe beny dlo a nan pwen bouyi davans pou fè pou evite sèk bouyi epi peye atansyon sou sekirite.

b. Sèvi ak 5 × pwoteyin chaje tanpon, ki estoke nan -20 ° C, ble fonse, epi fonn li anvan ou itilize.

c. Nan chak gwoup echantiyon sipènatan pwoteyin, ou ta dwe fè volim ki koresponn nan tanpon loading (surnatant pwoteyin: tanpon = 4:1) separeman epi soufle byen.

d. Chak tib echantiyon yo ta dwe sere sou clip eksplozyon-prèv la, mete nan flote eponj la, denatire pa dlo bouyi pou 5 min, refwadi pa dlo frèt pou 1 min, epi repete twa fwa asire ke echantiyon pwoteyin yo te byen denatire.

e. Pwoteyin denatire a ta dwe inifòm ble, klè, ak transparan. Echantiyon an ta dwe yon ti kras santrifuje, estoke nan -20 ° C, epi mete sou kote.

f. Jiska etap sa a, eksperyans sa a fini.

Si ou enterese nan nou an selil grate & cell lifter oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.