Cell Scraper & Cell Lifter
Ratwa selilè vs. lifter selil
Tou de grate selilè ta dwe apwouve bèso tibebe w la epi lifter selil yo itilize prensipalman pou kolekte selil yo. Lam nan yo fèt pou redwi anpil domaj nan selil yo epi pèmèt aksè nan sifas kwasans lan. Se lam la anjeneral te fè nan materyèl polymère TPE, ak hilt la anjeneral te fè nan materyèl polymère ABS. Materyèl sa yo apwopriye pou rekòlte selil yo.
Selil lifter se sitou fèt pou itilize nan kilti selilè asyèt pou kwen lajè bizote li yo.
Ratwa selilè ak angle, lam wotasyon pou aksè fasil nan sifas la kwasans nan flakon ak asyèt Petri.
Karakteristik nan grate selil ak leve selil
a. Pou rekòlte selil yo alamen.
b. Desen lam lan fè yon kontak lis ak sifas kwasans lan, sa ki lakòz domaj minimòm nan selil yo.
c. Gama esterilizasyon radyasyon.
d. Pa gen pirojèn, pa gen andotoksik, pa gen sitotoksik.
e. Manch kouto ki gen diferan longè satisfè egzijans pou kiltive diferan koleksyon kilti selilè.
f. Vlope endividyèlman.
g. Boutèy laboratwa disponib.
h. Diferan gwosè pou opsyon: 18cm, 25cm, 40cm, mini grate selilè, Elatriye
i. Itilize avèk plak pi, tankou grate selil pou plak 24 byen, grate selil pou plak 12 byen, Elatriye
Aplikasyon nan grate selil ak leve selil
Nan endistri pharmaceutique, kilti selilè te vin yon eleman enpòtan nan pwodiksyon antikò. Teknoloji kilti selil yo te itilize pou pwodui antikò ki gen rapò ak rotaviris, polyo, varisèl, epatit, ribeyòl ak varisèl. Antikò ki baze sou selil kont grip yo te apwouve tou pou itilize nan Etazini ak anpil peyi Ewopeyen an. Men kèk egzanp sou grate selil & lifter selil aplikasyon yo.
Kiltivasyon pasaj selilè
Kwasans ak pwoliferasyon selil ki grandi kont miray la anpeche pa lefèt ke espas la lajman satire apre kilti a. flakon oubyen plat kilti a grandi pou l gaye yon sèl kouch. Kiltivasyon pasaj selilè fèt pou pèmèt kontinye ekspansyon oswa kwasans selil. Epitou, kilti pasaj sèvi pou prezève selil espès yo. Anplis, yon varyete eksperyans selil yo baze sou kiltivasyon pasaj selilè.
Sispann selil yo ka dirèkteman divize an boutèy, pandan y ap selil ki gen miray ranpa yo bezwen dijere ak lòt tretman anvan yo ka divize an boutèy. Trypsin se jeneralman yo itilize pou dijere selil aderan yo nan selil endividyèl, epi EDTA ka ajoute tou pou amelyore dijesyon. EDTA se yon chelator iyon divalan ki anpeche Ca2 + ak Mg2 + sou manbràn selilè a. Solisyon dijere selil yo souvan itilize jeneralman gen 0.25% (w/v) trypsin ak 0.03% (w/v) EDTA.
Pandan eksperyans la, ou ta dwe aspire supernatant kilti selil la, lave selil yo ak PBS, jete solisyon lave a, epi ajoute yon ti kantite solisyon dijesyon tripsin-EDTA. Tou depan de gwosè plat kilti a, 2 ml a 5 ml solisyon dijesyon se ase pou gaye tout anba plat la. Lè sa a, selil yo obsève jiskaske yo vin wonn epi detache nan miray boutèy la, ki anjeneral pran 3-5 minit. Pou evite gwoupman selil yo, ou pa ta dwe frape flakon la pandan pwosesis dijesyon an. Pou selil ki patikilyèman difisil pou dijere, ou ka ajoute solisyon dijesyon tripsin EDTA epi mete selil yo nan 37 ° C pou fasilite dijesyon. Apre selil yo te detache nan miray boutèy la, ou ta dwe imedyatman ajoute mwayen konplè ki gen serom pou avòte dijesyon an.
santrifujeur Kwit selil yo a 800-1000 rpm pandan 5 minit. Apre sa, jete medyòm ki pa pwodui a, ajoute yon nouvo medyòm ki apwopriye epi melanje selil yo dousman epi transfere yo nan yon nouvo flakon kilti. Pousantaj pasaj la depann de kalite selil la. Tripsin ka domaje manbràn selilè kèk selil. Pou kalite selil sa a, ou ka grate yo dousman ak yon cellscraper, ajoute kantite ki apwopriye nan mwayen, dousman kònen melanje selil yo, ak Lè sa a, pase yo nan kilti a.
Ekstraksyon nan pwoteyin selilè
A. Preparasyon eksperyans lan
a. Konfime ke machin glas limen epi gen ase glas kraze pou itilize pandan operasyon an.
b. Konfime ke machin glas la limen epi ke gen ase glas kraze pou itilize pandan l ap fonksyone.
c. Konfime ke makè anzim lan ap fonksyone byen, pran yon randevou epi enskri anvan ou itilize li.
d. Prepare 4 seri tib santrifij 1.5 mL. Yo sèvi pou kolekte sispansyon selil lize a, kolekte sipènatant pwoteyin apre santrifijasyon, detèmine konsantrasyon echantiyon pwoteyin yo apre yon dilisyon 5 fwa, epi detèmine konsantrasyon echantiyon pwoteyin yo apre yon dilisyon 10 fwa.
e. Prepare solisyon liziz selilè a.
Anvan w itilize, melanje solisyon liz selil la nan rapò lysate 1mL: inibitè proteaz (PMSF) 10μL. PMSF efikas nan lespas 30 minit, kidonk peye atansyon sou preparasyon ki pare pou itilize.
Kalkile kantite likid fonksyònman ki bezwen prepare davans. Kantite likid fonksyònman espesifik la dwe kalkile sou yon baz ka pa ka. Anjeneral pale, si selil yo rive nan 70 ~ 80% konfluyans nan yon flakon kilti 25T, 250 ~ 350μL nan solisyon k ap travay yo bezwen pou itilize. Si ou ajoute twòp solisyon lysis selil, konsantrasyon nan pwoteyin echantiyon final la ka twò ba. Si yo ajoute solisyon liz selil ensifizan, liz selil la pa ase epi echantiyon an se kolan fasil bloke pwent zam 200 μL la. Likid fonksyònman lysis selil yo rekòmande yo dwe pre-refwadi nan 4 ° C.
f. Prepare grate selilè ta dwe apwouve bèso tibebe w la epi lifters selil yo. Omwen 3 moso nan yo pou altène lè grate selil yo.
g. Prepare twa bèk ki gen yon volim 100 mL oswa plis. Bechè sa yo bezwen lave alavans epi ranpli ak dlo ultrapi. Yo itilize pou lave sekansyèl resipyan yo itilize yo. grate selilè. Tou de la kaoutchou selil grate ta dwe apwouve bèso tibebe w la epi grate selil plastik ki disponib. Kawotchou polisye selil grate se pi plis rekòmande.
h. Prepare solisyon sèl ekilib.
i. Prepare yon twous pou mezire konsantrasyon pwoteyin BCA.
j. Prepare tanpon chajman SDS la. Li estoke nan -20℃ epi ou ta dwe louvri l davans anvan ou itilize li.
B. Pwosedi eksperimantal
a. Yon tèt laboratwa pwòp
Pa gen pwoblèm ki kalite eksperyans w ap fè, li esansyèl pou kenbe tab opere ou pwòp ak pwòp. Lè w ap manipile eksperyans tankou ekstraksyon pwoteyin oswa ekstraksyon ADN/RNA, li rekòmande pou opere nan yon tab ultra-pwòp. Nan absans yon tab ultra-pwòp, nou ta dwe asire ke tab la opere se kòm pwòp ke posib. Epitou, kenbe tab la opere pwòp se yon bon abitid ki bezwen devlope pou nenpòt operasyon eksperimantal.
Lè yo konfime enstriman laboratwa ki nesesè pou eksperyans la, selil yo ka retire nan lòj selil la.
b. Lave PBS
Apre w fin retire selil yo, ou ta dwe lave yo ak PBS nan tanperati chanm. Lè sa a, tout operasyon yo ta dwe fèt sou yon beny glas.
c. Liz selilè
Ajoute 250 a 350μL solisyon lysis nan chak flakon selil yo. Lysate la ta dwe byen gaye epi liz nan yon beny glas pou 10 minit. Ou ta dwe repete gaye lysate la toujou pandan 10 minit sa a. Teknik gaye lysate la se menm jan ak dijesyon tripsin. Pandan w ap tann lysis, ou ta dwe rekonfime tanperati santrifujeur, thermostat, ak beny dlo.
d. Grate selilè
Apre lysis fini, ou ta dwe grate selil yo lè l sèvi avèk yon grate selilè. Chak aksyon grate nan selil yo ta dwe kolan ak solisyon lysis, kenbe yon direksyon soti anwo jouk anba, ak aksyon an se tankou grate ak lave vè.
e. Transfere echantiyon yo
Sèvi ak yon pipèt 200 μL pou transfere sispansyon selilè grate a nan yon recipient 1.5 mL. tib santrifijeur (touswit apre ou fin grate yon echantiyon) epi soufle plizyè fwa 30-60 fwa pou kraze selil yo nèt. Eseye evite ti boul lè pandan pwosesis soufle a. Apre yo fin soufle a, yo ta dwe mete tib santrifij ki gen echantiyon an sou glas.
f. Repete etap e. pou konplete koleksyon echantiyon yo
Ou ta dwe rense a grate selilè ta dwe apwouve bèso tibebe w la epi lifter selil itilize nan etap e. nan twa gobelèt nan vire, souke grate selilè dousman epi mete yo sou yon etajè tib tès pou seche. Si lifters selil yo yo pa netwaye, sa ka mennen nan kwa-kontaminasyon nan echantiyon yo. Si selil yo pa cheche, sa ki lakòz dilution echantiyon.
g. Plis liz nan beny glas
Apre echantiyon yo tout grate epi transfere nan tib santrifij, yo kontinye ap lysed nan yon beny glas pou 5-10 min. Pandan peryòd sa a, kondisyon santrifujeur, thermostat, ak beny dlo yo ta dwe rekonfime.
h. Santrifijasyon
Apre lysis fini, santrifije nan 12,000g, 4 ° C, pou 5 min.
i. Koleksyon sipènatant pwoteyin
Pran supernatant la epi sèvi ak li pou prepare mezi konsantrasyon pwoteyin ak echantiyon denaturasyon pou WB. Lè w ap pran echantiyon sipènatan an pou WB, tanpri anrejistre volim echantiyon an epi ajoute volim korespondan SDS loading tanpon an imedyatman dapre volim echantiyon an pou prepare echantiyon pou kwit manje a.
C. Metòd BCA pou detèminasyon konsantrasyon pwoteyin
a. Yo ta dwe chofe tèmosta a alavans a 37°C.
b. Konfigure solisyon kantifikasyon pwoteyin 5× ak 10× epi mete l sou kote sou glas apre preparasyon an. La a, li rekòmande pou itilize PBS pou dilisyon echantiyon an, paske koulè D-Hanks la li menm ka afekte rezilta final kantifikasyon konsantrasyon pwoteyin lan.
5× dilution: 80 μLPBS + 20 μL supernatant.
10× dilution: 90 μLPBS + 10 μL supernatant.
c. Prepare twous kantifikasyon pwoteyin BCA a epi kalkile kantite total likid operasyon an jan sa nesesè. Prepare likid operasyon an dapre enstriksyon yo nan rapò BCA: Cu= 50: 1. Pa bliye melanje likid la nèt. Solisyon travay melanje a gen yon koulè ble klè.
d. Yo ajoute 20 μL nan plak 96 pi a pou chak pi, epi yo mete omwen twa pi replike. Piske echantiyon pwoteyin nan trè viskeuz epi volim ki te ajoute a piti, yo ka pwolonje pwent zam nan nan pi a epi mete pik li kont fon pi a pou konplete echantiyon ki te ajoute a lè l sèvi avèk tansyon likid la.
e. Apre yo fin ajoute echantiyon an, yo ajoute 200 μL likid operasyon an nan chak pi echantiyon. Aksyon pou ajoute likid operasyon an ta dwe rapid e pwòp. Ajout rapid e pwòp likid operasyon an fasilite yon melanj ki apwopriye.
f. Enkube pandan 30 minit nan 37°C. Apre reyaksyon an fini, tès la ta dwe fini nan 3 a 5 minit.
g. Yo mezire absòbans lan nan longèdonn espesifye a avèk yon makè anzim.
h. Yo ta dwe kalkile konsantrasyon pwoteyin nan dapre ekwasyon koub estanda ki te prepare deja a. Gade enstriksyon twous la pou metòd pou trase koub estanda a.
D. Denaturasyon echantiyon pwoteyin pou WB
a. Chofe beny dlo a davans jiskaske li bouyi pou evite li bouyi sèk epi fè atansyon ak sekirite.
b. Sèvi ak yon tanpon chajman pwoteyin 5×, ki estoke nan -20°C, ble fonse, epi fonn li anvan ou itilize li.
c. Nan chak gwoup echantiyon sipènatant pwoteyin, ou ta dwe prepare volim korespondan nan tanpon chajman an (sipènatant pwoteyin: tanpon = 4:1) separeman epi soufle byen.
d. Chak tib echantiyon ta dwe byen sere sou klip ki reziste eksplozyon an, mete l nan flote eponj lan, denatire l ak dlo bouyi pandan 5 minit, refwadi l ak dlo frèt pandan 1 minit, epi repete twa fwa pou asire ke echantiyon pwoteyin yo te byen denatire.
e. Pwoteyin denatire a ta dwe inifòmman ble, klè, epi transparan. Echantiyon an ta dwe santrifije yon ti kras, konsève nan -20°C, epi mete sou kote.
f. Jiska etap sa a, eksperyans sa a fini.
Ki jan yo achte selil grate ak selil lifter?
Si ou enterese nan nou an Cell Scraper & Cell Lifter oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay info@antiteck.com, nou pral reponn ou pi vit ke posib.