Filè selil yo

Content
1. Ki sa ki filtre selil yo?
    1.1 Avantaj nan filtre selil yo
    1.2 Aplikasyon de filtre selilè
    1.3 Spesifikasyon nan filtre selil yo
    1.4 Spesifikasyon nan filtre selil yo
    1.5 Seleksyon filtre selil yo
2. Kalite filtre selilè
    2.1 Filè selil Nerjaveèi asye
    2.2 Nayilonn filtre selil
3. Sèvi ak filtre selilè
    3.1 Netwayaj filtre selil yo
4. Filè selil pou sikometri koule
5. Ki jan yo achte filtre selilè?

Filè selil yo yo jeneralman yo itilize nan kilti selil laboratwa, filtraj enpurte, dispèsyon selilè, divize echantiyon, elatriye Filtè selil la anjeneral fèt ak yon ankadreman polypropylène, yon konbinezon espesyal ekran nilon. Spesifikasyon komen yo se filtre selilè 40μm, filtre selilè 70μm ak filtre selilè 100μm Ouverture ekran.

Nan rechèch biyoloji selilè, si li se pou karakteristik fizyolojik selil, envazyon selil, apoptoz, fagositoz, ak lòt fonksyon fizyolojik, efè faktè anviwònman an sou ekspresyon makè selil, tès depistaj dwòg, ak lòt aplikasyon, kondisyon an se jwenn omojèn ideyal la. likid konte sèl selil, se konsa ke eksperyans ki vin apre tankou flow-through selil klasman (FACS) ka fèt san pwoblèm epi yo ka jwenn rezilta eksperimantal pi egzak. Filè selil yo se kalite ki pi komen nan consommables yo itilize nan eksperyans selil yo. Li se kalite ki pi komen nan consommables yo itilize nan eksperyans selilè epi yo itilize pou filtre enpurte nan eksperyans selilè.

a. Twa gwosè ki disponib pou matche ak diferan kalite echantiyon selil: 40 µm, 70 µm, ak 100 µm.

b. Twa koulè pou distenge espesifikasyon diferan: ble, blan, ak jòn.

c. Menm distribisyon twou may, bay rezilta eksperimantal ki konsistan ak serye.

d. Tèt kwen pwolonje pèmèt manipilasyon aseptik ak forceps chirijikal.

e. Ka moule ankadreman polypropylène ka koulè-kode pou manyen fasil ak diferansyasyon.

f. Pou itilize ak 50ml JET tib santrifujeur konik.

g. Esterilizasyon Gamma-iradyasyon.

h. Pa gen DNase / RNase, pa gen okenn sous chalè, pa gen okenn endotoxin.

Rezon ki fè a filtre selilè se kraze mas selilè a pandan kilti prensipal pou jwenn yon sispansyon sèl selil.

a. Sispansyon sèl selil yo jwenn nan filtraj nan selil san ki izole nan mwèl zo, pankreyas, tim, amidal, ak gangliyon lenfatik.

b. Preparasyon echantiyon pou kilti selil prensipal ak vaksinasyon.

c. Filtrasyon nan gliadin soti nan serom inaktive.

d. Preparasyon grenn primè nan frizè.

Twou yo nan filtre selilè yo kout pwen pa yon espesyal pwosesis selil filtre lazè pwensonaj machin. Prensip travay la se ke gwo bout bwa lazè a sou lazè a trè konsantre nan espas ak tan, sa ki ka diminye dyamèt tach la nan yon nivo micron konsa jwenn gwo dansite pouvwa, epi yo ka kout pyen lazè prèske nenpòt materyèl.

Avantaj nan pèforasyon lazè nan filtre selil pa gen okenn burr, pa gen okenn sele, pa gen okenn rezidi, ak koupe plat. Nan pèforasyon lazè nan twou filtre selilè, gwosè pèforasyon se konsistan, si gen yon burr oswa sifas inegal, pwochen pwosesis la pral trè anbarasman, ak pwosesis lazè fè pwosesis la pita pi vit ak pi bon kalite.

Kantite may nan Van filtre selil × gwosè pò = 15000 (chwazi Van selil la ak gwosè may ki koresponn lan dapre gwosè a nan gwosè a pò filtre obligatwa nan materyèl la eksperimantal).

Filè selil yo yo jeneralman divize an de materyèl prensipal, youn se pwodwi plastik tankou nilon, ak lòt la se te fè nan asye pur.

Van filtre selil Nerjaveèi yo fèt ak asye pur, ak yon sifas ki lis, bèl aparans, ak karakteristik dirab. Filè selil asye pur gen divès kalite espesifikasyon soti nan 40 may rive 800 may, ki jeneralman yo itilize nan kilti selil laboratwa, filtraj enpurte, dispèsyon selil, separasyon echantiyon, elatriye Nerjaveèi asye selil filtre ka itilize ankò, jeneralman lè l sèvi avèk netwayaj ultrasons ak Lè sa a, esterilizasyon. Van selil la divize an de kalite filtre selil asye pur ak manch ak asye pur filtre selilè san manch, ki se senp ak pratik yo opere pou eksperyans rechèch syantifik.

Echantiyon tès koule komen yo ka itilize ak 300-350 may filtre selil nilon, ki plwaye nan yon fòm antonwa, epi yo itilize ak forceps emostatik.

a. Filè selil yo pa ka tranpe nan asid apre lave, yo ka dirèkteman mouye esterilize pa vlope yo nan papye fèblan. Pa sèk moulen lè w ap itilize. Lè w ap filtre pi gwo tisi, ou bezwen ajoute tanpon pandan y ap fanm k'ap pile.

b. Diferans ki genyen ant 200 may ak 300 may filtre selilè se gwosè a nan twou yo. Diferans sa a pa trè gwo lè w ap fè kalite koule, men lè w ap itilize 300 may, fè atansyon pou pa moulen twòp pou evite twòp tisi konjonktif.

c. Tisi nan poumon rat yo ka jwenn apre moulen Van selil se yon melanj de selil, ki gen ladan selil parenchymal nan poumon, selil stromal, eritrosit, ak yon ti kantite lekosit, selil NK, ak makrofaj.

a. Filtres selil jetab yo pa rekòmande yo dwe netwaye ak dezenfekte, ki ka lakòz inegalite nan filtè a ak afekte rezilta yo nan pwochen eksperyans la.

b. Delye netwayaj alkali pou retire selil rezidyèl yo ak tisi yo.

c. Tranpe epi netwaye ak solisyon ajan detartraj.

d. Flushing dlo tiyo, dH2O dlo distile 3 fwa, ddH2O dlo re-distile 3 fwa, esterilizasyon anbalaj.

Sitometri koule se yon teknik pou analiz quantitative ak klasman nan selil sèl oswa patikil byolojik nan sispansyon, ki gen avantaj ki genyen nan gwo vitès, segondè presizyon, ak presizyon, epi li se lajman ki itilize nan konte selil, klasman selil, analiz molekilè fenotip, jeni pwoteyin ak lòt. rechèch.

a. Retire larat sourit la nan yon tib santrifijeur 15 ml (san likid) epi mete tib la sou glas.

b. Ajoute 5 ml tanpon RBC lysis nan 15 ml tib santrifij la ki genyen larat la.

c. Vide tanpon RBC lysis ak larat nan yon plat kilti selil 10 cm.

d. Mete larat la sou bò ki graj nan yon moulen glise doub-ended (mouye ak RBC lysis tanpon), byen kraze larat la nan moulen an glise doub-ended, epi moulen ant de-glise moulen doub-ended jiskaske larat la disosye. .

e. Transfere RBC lysate ki gen splenosit nan yon tib santrifijeur 15 ml.

f. Ajoute 10 ml mwayen nan tib santrifij la epi ranvèse 2-3 fwa.

g. Santrifije a 1300 rpm nan 4 °C pou 00:05:00

h. Jete supernatant la epi repoze presipite a nan 3 ml mwayen.

mwen. Filtre a 70 μM filtre selilè atravè yon tib santrifijeur 50 ml.

j. Dilye selil yo nan 1:100 epi konte.

k. Delye sispansyon sèl selil la nan 1 x 107 selil/ml nan mwayen RPMI (pou tès koule, pa gen okenn selil bezwen konte ak konte).

l. Mete splenosit sou glas jiskaske yo antre nan plak 96-pou yo.

a. Prepare yon mwayen RPMI ki gen Brefeldin A nan yon konsantrasyon 10 μg/ml.

b. Toubiyon ak vire tout solisyon stock LPS, apresa sonike chak youn 00:10:00. Apre sonication, vortex ak vire ankò.

c. Prepare chak estimilis (EC LPS, PA, YP, Lipid IVa) pou de fwa konsantrasyon final li vle (2x) lè l sèvi avèk mwayen ki gen Brefeldin A.

d. 100 μl nan chak estimilan yo ajoute nan pwi ki apwopriye yo nan yon plak 96-pi 2.2 mL, ki gen ladan pwi yo unstimulated kòm kontwòl.

e. Plak 100 μl nan splenosit nan pwi ki apwopriye yo (plak yon lòt seri splenosit yo dwe itilize kòm yon sèl kontwòl tach).

f. Lè sa a, enkube nan 37 ° C pou 04:00:00.

a. Apre 04:00:00, trete plak la byen ak 20 μl nan 20 mM EDTA.

b. Melanje ak enkube a 37 °C pou 00:10:00.

c. Melanje ankò apre enkubasyon, Lè sa a, santrifuje nan 1300 rpm pou 00:05:00.

d. Aspire oswa flick medya yo.

e. Fèmen tout pwi yo ak 10 μl FcBlock dilye (1:100 FcBloc nan PBSA/az).

f. Enkube sou glas a 00:15:00.

g. Ajoute 100 μl PBSA/az epi santrifije nan 1300 rpm pou 00:05:00.

h. Aspire oswa flick medya yo.

mwen. Resuspend / tach ak 10 μl nan melanj antikò: CD11b PerCP-Cy5.5, CD11c PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 ak CD3 APC (1:100Ab nan PBSA / az) nan echantiyon splenosit stimulé.

j. Ajoute 100 μl PBSA/az nan kontwòl la tach sèl, ki te swiv pa 1 μl nan sa yo tach sèl Ab: CD8 FITC, CD8 PE, CD4 PerCP-Cy5.5, CD8 PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 ak CD8 APC.

k. Enkube sou glas pwoteje kont limyè (oswa vlope nan papye) a 00:20:00.

l. Ajoute 100 μl PBSA/az, apresa santrifije nan 1300 rpm pou 00:05:00.

m. Aspire oswa flick mwayen an.

n. Resuspend nan tout pwi ak 100 μl solisyon BDcytofix/cytoperm.

o. Enkube sou glas pwoteje kont limyè 00:20:00.

p. Ajoute 100 μl 1x BD Perm Wash nan tout pwi yo.

q. Santrifige nan 1300 rpm pou 00:05:00, Lè sa a, aspire oswa repwoche fim nan.

r. Resuspend/lave yon fwa ak 200 μl 1x BD Perm Wash pa pipette monte ak desann plizyè fwa nan tout pwi.

s. Santrifige nan 1300 rpm pou 00:05:00, Lè sa a, aspire oswa repwoche fim nan.

t. Resuspend / tach echantiyon splenosit yo ak 50 μl nan melanj antikò: TNF FITC ak IL-12 / IL-23p40 PE nan splenosit yo ankouraje.

u. Enkube sou glas a 00:30:00 pwoteje kont limyè.

v. Ajoute 150 μl 1xBD Perm lave nan tout pwi yo epi santrifuje a 1300 rpm pou 00:05:00.

w. Aspire oswa flick medya yo.

x. Resuspend/lave yon fwa ak 200 μl 1x BD Perm Wash pa pipette moute ak desann plizyè fwa nan tout pwi.

y. Santrifige nan 1300 rpm pou 00:05:00, Lè sa a, aspire oswa repwoche fim nan.

z. Resuspend nan yon volim final 200 μl nan 1% solisyon paraformaldehyde (delye 10% paraformaldehyde ak 1xPBS).

aa. Sere nan 4 °C lwen limyè (oswa vlope nan FOIL) jiskaske pare pou tès sitometri koule - transfere echantiyon soti nan plak 96-pou nan burèt imedyatman anvan FACS.

Si ou enterese nan nou an filtre selilè oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.