Ki sa ki filtre selil yo?
Filè selil yo yo jeneralman itilize nan kilti selil laboratwa, filtraj enpurte, dispèsyon selil, divizyon echantiyon, elatriye. Selil la filtre anjeneral fèt ak yon ankadreman polipropilèn, yon konbinezon ekran nilon espesyal. Espesifikasyon komen yo se filtre selilè 40μm, filtre selilè 70μm ta dwe apwouve bèso tibebe w la epi filtre selilè 100μm Ouverture ekran.
Nan rechèch biyoloji selilè, si li se pou karakteristik fizyolojik selil, envazyon selil, apoptoz, fagositoz, ak lòt fonksyon fizyolojik, efè faktè anviwònman an sou ekspresyon makè selil, tès depistaj dwòg, ak lòt aplikasyon, kondisyon an se jwenn omojèn ideyal la. likid konte sèl selil, se konsa ke eksperyans ki vin apre tankou flow-through selil klasman (FACS) ka fèt san pwoblèm epi yo ka jwenn rezilta eksperimantal pi egzak. Filè selil yo se kalite ki pi komen nan consommables yo itilize nan eksperyans selil yo. Li se kalite ki pi komen nan consommables yo itilize nan eksperyans selilè epi yo itilize pou filtre enpurte nan eksperyans selilè.
Avantaj nan filtre selilè
a. Twa gwosè disponib pou koresponn ak diferan kalite echantiyon selilè: 40 µm, 70 µm, ak 100 µm.
b. Twa koulè pou distenge diferan espesifikasyon yo: ble, blan ak jòn.
c. Distribisyon twou may yo egal, bay rezilta eksperimantal ki konsistan e serye.
d. Bò pwolonje anwo a pèmèt manipilasyon aseptik ak yon pens chirijikal.
e. Ankadreman polipropilèn moule a ka gen yon kòd koulè pou fasilite manyen ak diferansyasyon.
f. Pou itilize ak boutèy konik JET 50ml santrifijez la tib.
g. Esterilizasyon pa iradyasyon gama.
h. Pa gen DNaz/RNaz, pa gen sous chalè, pa gen andotoksin.
Aplikasyon de filtre selilè
Rezon ki fè a filtre selilè se kraze mas selilè a pandan kilti prensipal pou jwenn yon sispansyon sèl selil.
a. Sispansyon selil endividyèl yo jwenn pa filtrasyon selil san ki izole nan mwèl zo, pankreyas, timis, amidal, ak gangliyon lenfatik.
b. Preparasyon echantiyon pou kilti selilè prensipal ak vaksinasyon.
c. Filtrasyon gliadin nan seròm inaktive.
d. Preparasyon grenn prensipal konjele yo.
Pèforasyon nan filtre selil yo
Twou yo nan filtre selilè yo kout pwen pa yon espesyal pwosesis selil filtre lazè pwensonaj machin. Prensip travay la se ke gwo bout bwa lazè a sou lazè a trè konsantre nan espas ak tan, sa ki ka diminye dyamèt tach la nan yon nivo micron konsa jwenn gwo dansite pouvwa, epi yo ka kout pyen lazè prèske nenpòt materyèl.
Avantaj nan pèforasyon lazè nan filtre selil pa gen okenn burr, pa gen okenn sele, pa gen okenn rezidi, ak koupe plat. Nan pèforasyon lazè nan twou filtre selilè, gwosè pèforasyon se konsistan, si gen yon burr oswa sifas inegal, pwochen pwosesis la pral trè anbarasman, ak pwosesis lazè fè pwosesis la pita pi vit ak pi bon kalite.
Spesifikasyon nan filtre selil yo
| pwodwi | Deskripsyon | Pake spesifikasyon |
|---|---|---|
| Filè selil 40 um | 300 may, ble, esterilize | 1pc/pake, 50pcs/ctn |
| Filè selil 40 um | 200 may, blan, esterilize | 1pc/pake, 50pcs/ctn |
| Filè selil 40 um | 160 may, jòn, esterilize | 1pc/pake, 50pcs/ctn |
Seleksyon filtre selilè
Kantite may nan Van filtre selil × gwosè pò = 15000 (chwazi Van selil la ak gwosè may ki koresponn lan dapre gwosè a nan gwosè a pò filtre obligatwa nan materyèl la eksperimantal).
Kalite filtre selilè
Filè selil yo yo jeneralman divize an de materyèl prensipal, youn se pwodwi plastik tankou nilon, ak lòt la se te fè nan asye pur.
Filè selil asye pur
Van filtre selil Nerjaveèi yo fèt ak asye pur, ak yon sifas ki lis, bèl aparans, ak karakteristik dirab. Filè selil asye pur gen divès kalite espesifikasyon soti nan 40 may rive 800 may, ki jeneralman yo itilize nan kilti selil laboratwa, filtraj enpurte, dispèsyon selil, separasyon echantiyon, elatriye Nerjaveèi asye selil filtre ka itilize ankò, jeneralman lè l sèvi avèk netwayaj ultrasons ak Lè sa a, esterilizasyon. Van selil la divize an de kalite filtre selil asye pur ak manch ak asye pur filtre selilè san manch, ki se senp ak pratik yo opere pou eksperyans rechèch syantifik.
Nayilonn sèlil filtres
Echantiyon tès koule komen yo ka itilize ak 300-350 may filtre selil nilon, ki plwaye nan yon fòm antonwa, epi yo itilize ak forceps emostatik.
Sèvi ak filtre selilè
a. Filè selil yo pa ka tranpe nan asid apre lave, yo ka dirèkteman mouye esterilize pa vlope yo nan papye fèblan. Pa sèk moulen lè w ap itilize. Lè w ap filtre pi gwo tisi, ou bezwen ajoute tanpon pandan y ap fanm k'ap pile.
b. Diferans ki genyen ant 200 may ak 300 may filtre selilè se gwosè a nan twou yo. Diferans sa a pa trè gwo lè w ap fè kalite koule, men lè w ap itilize 300 may, fè atansyon pou pa moulen twòp pou evite twòp tisi konjonktif.
c. Tisi poumon rat la ka jwenn apre yo fin moulen selil yo ak yon paswa. Se yon melanj selil, tankou selil parenchimal poumon, selil stromal, eritrosit, ak yon ti kantite lekosit, selil NK, ak makrofaj.
Netwayaj filtre selil yo
a. Filtres selil jetab yo pa rekòmande yo dwe netwaye ak dezenfekte, ki ka lakòz inegalite nan filtè a ak afekte rezilta yo nan pwochen eksperyans la.
b. Dilye netwayaj alkali pou retire selil ak tisi ki rete yo.
c. Tranpe epi netwaye ak yon solisyon ajan detartran.
d. Rense ak dlo tiyo, dlo distile dH2O 3 fwa, dlo redistile ddH2O 3 fwa, esterilizasyon anbalaj.
Filè selil pou sitometri koule
Sitometri koule se yon teknik pou analiz quantitative ak klasman nan selil sèl oswa patikil byolojik nan sispansyon, ki gen avantaj ki genyen nan gwo vitès, segondè presizyon, ak presizyon, epi li se lajman ki itilize nan konte selil, klasman selil, analiz molekilè fenotip, jeni pwoteyin ak lòt. rechèch.
Nouvo Aplikasyon pou Travay
A. Izolasyon splenosit
a. Retire larat sourit la nan yon veso 15 ml tib santrifijeur (san likid) epi mete tib la sou glas.
b. Ajoute 5 ml tanpon liziz GR nan 15 ml tib santrifij ki gen larat la.
c. Vide tanpon liz RBC ak larat nan yon veso 10 cm plat kilti selil.
d. Mete larat la sou bò ki graj yon moulen doub bout ak lam (mouri ak tanpon liz RBC), kraze larat la byen nan moulen doub bout ak lam la, epi moulen ant de moulen doub bout ak lam yo jiskaske larat la disosye.
e. Transfere liza RBC ki gen splenosit yo nan yon tib santrifij 15 ml.
f. Ajoute 10 ml medyòm nan tib santrifij la epi ranvèse l 2-3 fwa.
g. Santrifije a 1300 rpm a 4 °C pandan 00:05:00
h. Jete sipènatant la epi resispann presipite a nan 3 ml medyòm.
i. Filtre a 70 μM filtre selilè atravè yon tib santrifijeur 50 ml.
j. Diluye selil yo nan yon pwopòsyon 1:100 epi konte yo.
k. Diluye sispansyon selil endividyèl la a 1 x 107 selil/ml nan medyòm RPMI (pou tès koule, pa bezwen konte selil epi konte).
1. Mete splenosit yo sou glas jiskaske yo antre nan plak 96-pi a.
B. Stimilasyon splenosit yo
a. Prepare yon medyòm RPMI ki gen Brefeldin A nan yon konsantrasyon 10 μg/ml.
b. Brase epi vire tout solisyon stock LPS yo, apresa sonike chak youn pandan 00:10:00. Apre sonikasyon an, brase epi vire ankò.
c. Prepare chak estimilis (EC LPS, PA, YP, Lipid IVa) pou de fwa konsantrasyon final li vle a (2x) lè l sèvi avèk yon mwayen ki gen Brefeldin A.
d. Yo ajoute 100 μl nan chak estimilan nan pi apwopriye yo nan yon plak 96 pi 2.2 mL, epi yo mete pi ki pa estimile yo kòm kontwòl.
e. Mete 100 μl splenosit nan pi ki apwopriye yo (mete yon lòt seri splenosit sou yon plak pou itilize kòm yon sèl kontwòl koloran).
f. Apre sa, enkube nan 37 °C pandan 04:00:00.
C. Kolorasyon imunositochimik
a. Apre 04:00:00, trete plak ki nan twou a ak 20 μl 20 mM EDTA.
b. Melanje epi enkube nan 37 °C pandan 00:10:00.
c. Melanje ankò apre enkubasyon an, answit santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00.
d. Aspire oswa rale medya a sou kote.
e. Fèmen tout pi yo ak 10 μl FcBlock dilye (1:100 FcBloc nan PBSA/az).
f. Enkube sou glas a 00:15:00.
g. Ajoute 100 μl PBSA/az epi santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00.
h. Aspire oswa rale medya a sou kote.
i. Resispann/kolorye avèk 10 μl melanj antikò: CD11b PerCP-Cy5.5, CD11c PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 ak CD3 APC (1:100Ab nan PBSA/az) nan echantiyon splenosit ki te estimile a.
j. Ajoute 100 μl PBSA/az nan kontwòl koloran endividyèl la, epi answit ajoute 1 μl nan antikò koloran endividyèl sa yo: CD8 FITC, CD8 PE, CD4 PerCP-Cy5.5, CD8 PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 ak CD8 APC.
k. Enkube sou glas pwoteje kont limyè (oswa vlope nan papye aliminyòm) a 00:20:00.
1. Ajoute 100 μl PBSA/az, apresa santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00.
m. Aspire oswa frape medyòm nan.
n. Resispann nan tout pi yo ak 100 μl solisyon BDcytofix/cytoperm.
o. Enkube sou glas pwoteje kont limyè 00:20:00.
p. Ajoute 100 μl nan 1x BD Perm Wash nan tout pi yo.
q. Santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00, apresa aspire oswa tire milye a dousman.
r. Resispann/lave yon fwa avèk 200 μl 1x BD Perm Wash lè w pipete monte desann plizyè fwa nan tout pi yo.
s. Santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00, apresa aspire oswa tire milye a dousman.
t. Resispann/kolorye echantiyon splenosit yo avèk 50 μl melanj antikò: TNF FITC ak IL-12/IL-23p40 PE sou splenosit ki te estimile yo.
u. Enkube sou glas a 00:30:00 pwoteje kont limyè.
v. Ajoute 150 μl 1xBD Perm wash nan tout pi yo epi santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00.
w. Aspire oswa vire medya a.
x. Resispann/lave yon fwa avèk 200 μl 1x BD Perm Wash lè w pipete monte desann plizyè fwa nan tout pi yo.
Santrifije a 1300 rpm pandan 00:05:00, apresa aspire oswa tire medyòm nan yon ti kout pwen.
z. Resispann nan yon volim final 200 μl solisyon paraformaldeyid 1% (dilye 10% paraformaldeyid ak 1xPBS).
aa. Sere nan 4 °C lwen limyè (oswa vlope nan papye aliminyòm) jiskaske li pare pou koule. sitometri tès – transfere echantiyon yo soti nan yon plak 96-pi nan burèt touswit anvan FACS.