HPLC-MS

Content
1. ki sa ki HPLC-MS?
2. Aplikasyon HPLC-MS
3. Prensip k ap travay HPLC-MS
4. Avantaj nan itilize HPLC-MS
5. Kalite HPLC-MS
6. HPLC-MS espesifikasyon ak karakteristik
7. Efè kontaminan yo sou HPLC-MS
8. Kouman pou itilize HPLC-MS?
9. Ki jan yo kenbe HPLC-MS?
10. Ki jan yo kòmande HPLC-MS?

Non konplè nan HPLC-MS is segondè pèfòmans likid chromatographie-spèktrometri mas, ki itilize chromatografi likid kòm sistèm separasyon ak espektrometri mas kòm sistèm deteksyon an. Echantiyon an separe de faz mobil nan pati espektrometri mas la, iyonize, ak Lè sa a, fragman iyon yo separe pa nimewo mas pa analizeur mas nan espektrometri mas la, epi detektè a jwenn espèk mas yo. Spèktrometri mas likid-likid reflete avantaj konplemantè kwomatografi ak espektrometri mas, konbine gwo kapasite separasyon kwomatografi pou echantiyon konplèks ak avantaj MS ak selektivite segondè, sansiblite segondè ak kapasite pou bay mas molekilè relatif ak enfòmasyon estriktirèl. te lajman itilize nan plizyè domèn tankou analiz dwòg, analiz manje ak analiz anviwònman an.

Aplikasyon yo nan likid kwomatografi-spèktrometri mas (LC-MS) nan divès domèn yo jan sa a.

Nan byochimik
Konpoze nan òganis vivan yo fòtman polè, difisil pou volatilize epi yo gen enstabilite tèmik enpòtan, epi an menm tan an, konpoze sa yo souvan parèt nan yon melanj de pwoteyin, peptides ak asid nikleyik, pandan y ap HPLC-MS trè kapab separe ki pa temèt. , fòtman polè, tèmik enstab ak segondè konpoze pwa molekilè; espektometri mas ka karakterize avèk presizyon konpoze nan melanj konplèks, se konsa espektometri mas likid kòm yon analiz byochimik Se poutèt sa, kromatografi likid ap pran pi plis ak plis atansyon kòm yon zouti pwisan pou analiz byochimik.

Nan analiz pharmaceutique
Nan jaden an nan rechèch analiz dwòg, pifò pharmaceutique se plis konpoze polè, ak pakèt la nan analiz chromatografi likid ak espesifik nan segondè nan espektrometri mas ka amelyore plis enfòmasyon kalitatif estriktirèl ak sansiblite deteksyon segondè. Spectrometri mas likid se kapab klivaj milti-etap nan iyon excimer, ki bay pwa molekilè relatif nan konpoze kòm byen ke enfòmasyon fragmentasyon rich. Nan etid enpurte ak faz etid farmakokinetik devlopman dwòg, kote konsantrasyon san nan enpurte ak echantiyon farmakokinetik yo anjeneral ba epi analiz la difisil ak entèfere, espektometri mas likid ka rapidman ak presizyon detèmine tras sibstans nan analiz dwòg akòz selektivite segondè li yo. ak sansiblite.

Nan siveyans anviwònman an
Avèk devlopman rapid nan endistri ak agrikilti, divès kalite pwoblèm polisyon nan anviwònman an rive souvan, tankou résidus antibyotik nan dlo pou bwè, idrokarbur aromat polisiklik, bifenil poliklorin, résidus pestisid, elatriye Se poutèt sa, devlopman nan trè sansib milti-rezid serye analyse. metòd yo vin tounen yon objektif estratejik enpòtan nan chimi analitik anviwònman an. Nan fen ane 1980 yo, chèchè yo te aplike avèk siksè spèktrometri mas ionizasyon presyon atmosferik an konbinezon ak kromatografi likid, e depi lè sa a, LC-MS te kòmanse piti piti vin zouti ki pi pwisan pou siveyans anviwònman an.

Jounal prensip nan LC-MS enstriman se menm jan ak sa yo ki nan chromatografi gaz, ki itilize chromatografi likid kòm sistèm nan separasyon ak espektrometri mas kòm sistèm nan deteksyon. Echantiyon an separe de faz mobil nan seksyon espektrometri mas la, ionize, ak Lè sa a, fragman ion yo separe pa analizè mas mas espektwomèt la dapre rapò chaj ak mas, epi detektè a jwenn spectre mas la.

Anplis kapasite nan analize fòtman polè, difisil pou volatilize, ak tèmik enstab konpoze, segondè-pèfòmans likid chromatography-mas spectrométrie gen avantaj sa yo:

1. Avèk yon ranje lajè analyse, HPLC-MS ka detekte prèske tout konpoze, ki ka fasilman rezoud pwoblèm nan analize tèmik konpoze enstab.

2. Menm si melanj analize yo pa konplètman separe sou chromatogram la, ka itilize chromatogram mas iyon karakteristik HPLC-MS pou bay chromatogram respektif yo pou rezon kalitatif ak quantitative.

3. Rezilta analiz kalitatif serye, LC-MS ka bay pwa molekilè ak enfòmasyon estriktirèl rich nan chak eleman an menm tan.

4. Limit deteksyon an ba ak sansiblite HPLC-MS segondè, epi kapasite deteksyon an ka ogmante pa plis pase yon lòd nan grandè lè w chwazi metòd deteksyon ion.

5. Tan analiz la vit ak kolòn chromatografik likid yo itilize nan LC-MS se yon kolòn dyamèt etwat, ki diminye tan analiz la epi amelyore efè separasyon an.

6. Trè otomatik, LC-MS gen yon wo degre de automatisation.

Ansanm ak devlopman nan HPLC-MS teknoloji koòdone, enstriman an mas likid espektwomèt tèt li tou ap evolye, ak Aparisyon nan plizyè kalite detektè mas espektrometri. Espektromèt mas likid ki pi souvan itilize yo se:

espektometri mas kwadwipol se toujou pi lajman itilize a, ak mòd siveyans reyaksyon selektif (SRM) nan espektwomèt mas kwadwiplè twa etap la apwopriye pou byoanaliz woutin ak wo-debi. Amelyorasyon nan pwosesis espektwomèt mas quadrupol la ak estabilite fò nan RF te amelyore anpil rezolisyon an nan spectre mas yo, rezoud lajè nimewo mas jiska 0.1 Da ak amelyore selektivite nan konpoze yo analize. Pami tout analyseurs mas spectrométrie, espektromèt mas quadrupole a bay pi bon presizyon ak presizyon rezilta analiz quantitative.

Avèk avenman matris-asistans lazè desorption ionizasyon ak devlopman nan òdinatè, TOP te rapidman devlope nan ane 1990 yo. Kounye a, pi bon espektwomèt mas tan-de-vòl yo kapab rezolisyon jiska 20,000 Da epi mezire kantite mas molekil ak presizyon trè wo. Espektromèt mas tan-de-vòl yo te lajman ranplase analizeur fanatik mayetik gwo rezolisyon doub-konsantre, men yo pa ka efektivman itilize mòd siveyans ion seleksyone pou analiz.

FT-ICR-MS te vin tounen yon zouti efikas nan etid debaz reyaksyon ion-molekilè gaz-faz. Espektrometri mas sa a lajman itilize nan etid la nan makromolekil byolojik lè makonnen ak yon sous ion ESI, epi li kapab pran anpil avantaj de rezolisyon segondè li yo ak presizyon.

Tip de Anons: Quadrupole mas spectrometer
Espesifikasyon:
1. Quadrupole mas spectrometer bay sansiblite, pèfòmans, ak estabilite jeneral sistèm ki nesesè pou analiz quantitative.
2. Quadrupole mas spectrometers yo apwopriye pou aplikasyon pou analiz quantitative nan rechèch, validation biomarker, etid, tès manje, ak analiz anviwònman an.
3. Quadrupole mas spectrometers delivre efikasite, pèfòmans, ak valè pwepare pou bezwen analyse ou.

Sansiblite a, selektivite, repwodiksyon, ak separasyon nan LC-MS analyses yo afekte pa kontaminan tankou iyon metal, ftalat, polyethylene glycol (PEG), amelyore glise, dlo, ak patikil k ap antre nan sistèm nan soti nan divès sous, ki gen ladan:
* Réactifs ak solvants
* Dlo yo itilize pou prepare tanpon
* Pwodui chimik ki soti nan vè
* Tib Microcentrifuge
* Filtè Inlet
* Liy sòlvan
* Konpozan enstriman, tankou ponp sele
* Gaz pou desolventizing eluate nan sous la ak chanm kolizyon
*Echantiyon an tèt li

Kidonk, kontaminan yo ka entèfere ak analiz la pa:
a. Anpeche oswa amelyore ionizasyon analit la nan sous la
b. Fòme adduksyon ak analit la
c. Maske pik analit ak/oswa parèt kòm pik fantom nan kwomatogram la
d. Fè debaz la fè bwi
e. Echèl sistèm ak kolòn, ki mande antretyen souvan ak pati ranplasman

Pou minimize kontaminasyon
a. Faz mobil lan ta dwe prepare lè l sèvi avèk solvang pite segondè, dlo, ak reyaktif.
b. Faz mobil ki fèk prepare yo dwe itilize pou misyon pou minimize posiblite pou kontaminasyon mikwòb faz mobil akeuz ak polimerizasyon acetonitrile (ACN).
c. Netwaye veso ak savon oswa detèjan ta dwe evite paske yo ka difisil pou retire epi yo ka lakòz entèferans pandan analiz la.
d. Yo dwe itilize gaz pite segondè (egzanp, nitwojèn ki pi souvan itilize pite >95%).
e. Dèlko nitwojèn an dwe byen konsève epi yo dwe ranplase silenn gaz la lè presyon an desann anba nivo akseptab yo.
f. Yo dwe ekstrè analit nan matris echantiyon an epi yo dwe optimize paramèt kwomatografik yo pou amelyore separasyon pik analit ak pik entèfere.

1. Verifye tib ki genyen ant priz kolòn kwomatograf likid la ak popilasyon k ap antre nan sous iyon espektwomèt mas la konekte epi dekonekte si li se.

2. Kit switch pouvwa prensipal la nan kromatograf likid la ak switch pouvwa a nan autosampler la yo koupe, epi si se pa, fèmen yo.

3. Kit switch pouvwa prensipal la nan espektromèt mas la ak switch pouvwa a nan tablo prensipal la yo koupe, epi si se pa, fèmen yo.

4. Tcheke koulè lwil ponp lan ak nivo lwil ponp vakyòm ki ba espektwomèt mas la.

5. Louvri tiyo prensipal la nan tank nitwojèn likid la epi tcheke presyon sous gaz N2, ki ta dwe pi gran pase 1MPa, epi louvri tiyo rapèl la si li pa satisfè kondisyon yo. Tcheke si endikasyon ki sou kalib presyon an rive nan presyon k ap travay ki nesesè yo. Si ou itilize machin nitwojèn, vire sou machin nan dapre pwosedi operasyon an epi tcheke si presyon tank N2 nòmal.

1. Limen switch pouvwa prensipal la nan tès pwòp tèt ou enstriman LC-MS; sepandan, metòd debaz la sanble. Sa vle di, premye kòmanse.

2. Pwosedi pou kòmanse sistèm vakyòm lan pral diferan pou diferan enstriman LC-MS, men metòd debaz la sanble. Sa vle di, premye kòmanse ponp mekanik la, epi apre yo fin rive nan egzijans vakyòm ki ba a oswa otomatikman kòmanse ponp turbine molekilè a, oswa premye vire sou switch lame nan espektwomèt mas la epi kite ponp molekilè a kòmanse ponpe vakyòm segondè.

3. Limen pouvwa òdinatè a epi klike sou logo lojisyèl ki koresponn lan sou ekran an pou antre nan paj lakay espektwomèt mas likid la. Se sèlman lè vakyòm segondè a rive nan kondisyon yo predetèmine, ka tès pwòp tèt ou nan espektromèt mas la dwe ranpli, ak Lè sa a, pati yo fonksyonèl nan espektromèt mas la ka opere. Gen kèk enstriman ki bezwen vire sou pouvwa tablo prensipal la nan espektwomèt mas la pou reyalize operasyon ki anwo a.

4. Lè tès pwòp tèt ou nan likid chromatograph ak mas spectrometer pase, faz pouvwa-up nan enstriman an fini.

5. Aktive lojisyèl an pou asire ke lojisyèl sistèm lan konekte chromatografi likid la ak espektromèt mas la.

Lè w pare pou w kite enstriman an lannwit lan apre w fin travay chak jou, ou ta dwe antre nan eta sa a:
1. Premye dekonekte liy koneksyon ant LC ak MS, chanje valv koule IC pou efluan 1C la manje nan rezèvwa fatra a.

2. Etenn vòltaj miltiplikatè a sou ekran òdinatè a epi pèmèt eleman chofaj espektwomèt mas la (si genyen) refwadi anba tanperati a espesifye, ak Lè sa a, sòti koòdone k ap travay ki koresponn lan.

3. Fèmen tout liy gaz k ap travay, eksepte pou kèk liy gaz k ap travay ki mande pou N. kenbe koule gaz ki nesesè yo pandan sibstiti lannwit lan, epi fèmen tiyo rapèl tank nitwojèn likid la.

4. Kite sistèm vakyòm nan espektwomèt mas la nan operasyon.

5. Si faz mobil lan gen asid, baz, oswa sèl anvan etenn ponp LC a, ponp plonje a ak kolòn yo pral netwaye ak faz mobil pre-prepare san aditif sa yo (si yo itilize ponp LC a nan to koule ki ba lannwit lan, ponp LC a pa bezwen fèmen epi faz mobil lan ak asid, baz, oswa sèl pa bezwen ranplase). Netwaye autosampler la ak solisyon netwayaj espesifye a.

Kòmanse enstriman LC-MS la jou kap vini an apre kondisyon lannwit lan mansyone anwo a, ki rele yon kòmansman cho.

1. Lè w ap itilize HPLC-MS, sèvi ak yon UPS reglemante pou asire ke vòltaj ekipman pou pouvwa enstriman an estab ak kontinyèl. Espesyalman enpak echèk pouvwa sou likid chromatografi-mas spectrometer la.

2. Flush sistèm LC-MS la epi netwaye chanm nebilizè a ak solisyon alkòl izopropil chak jou, epi louvri valv la chòk regilyèman pou choke lè a. Pou sous ESI, fè sa omwen yon fwa pa semèn. Pou sous APCI, fè li yon fwa pa jou pou asire kapilè a pwòp.

3. Pousantaj koule nan faz mobil lan pa ta dwe twò wo, pa plis pase 0.5ml / min pou sous la ion ESI, ak pa plis pase 1.0ml / min pou APCI.

4. Ranplase lwil ponp vakyòm nan likid chromatografi-mas spectrometer yon fwa pa ane oswa mwatye nan yon ane.

5. Kontwole echantiyon an kouri anviwònman, ki gen ladan tanperati ak imidite.

6. Netwaye zegwi a piki ak tiyo piki nan espektwomèt chromatograph-mas likid la apre eksperyans la fini. Apre w fin itilize faz mobil ki gen asid, yo ta dwe rense kolòn ak sous iyon ak metanol oswa dlo.

7. detanzantan netwaye echantiyon twou kòn nan likid chromatografi-mas spectrometer, fèmen tiyo izolasyon an, epi wete twou echantiyon kòn lan, premyèman, sèvi ak methanol: dlo: asid fòmik (45:45:10) solisyon ultrasonically pwòp pou 10 minit, ak Lè sa a ultrasonically netwaye chak solisyon ak dlo ultrapure ak metanol pou 10 minit respektivman, ak Lè sa a, enstale li nan enstriman an apre siye.

8. Faz mobil lan ta dwe pare pou itilize, de preferans pa lannwit lan, epi li dwe fre.

9. Ranplase miltiplikatè elèktron likid chromatograph-mas spectrometer regilyèman.

10. Li pi bon pou fann koule a lè w ap fè kouple a, a pou itilize kolòn konvansyonèl la, b pou diminye tan analiz la, ak c pou pwolonje lavi mas analiz la.

11. Fèmen tanperati kapilè a anvan ou chanje likid chromatograph-mass spectrometer desann, epi estabilize pou kèk tan anvan etenn pouvwa a, pou fè pou evite fanatik la sispann wotasyon periferik kapilè nan difizyon chalè anndan an, fasil lakòz la. kous entèn ak eleman elektwonik aje akselere.

Si ou enterese nan nou an HPLC-MS oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.