Non konplè nan LC-MS is likid kwomatografi-spèktrometri mas.
MS se yon enstriman ki kapab jenere iyon. Se poutèt sa, LC-MS se yon enstriman ki separe ak detekte iyon nan eta gaz selon rapò mas-chaj yo.
LC/MS itilize chromatografi likid kòm sistèm separasyon ak espektrometri mas kòm sistèm deteksyon e konsa gen karakteristik tou de separasyon segondè nan kromatografi likid ak sansiblite segondè nan espektrometri mas.
Jounal HPLC-MS echantiyon separe de faz mobil nan seksyon an mas spectrometri, se ionize, ak Lè sa a, fragman yo ion yo separe pa nimewo mas pa analizè a mas nan mas spectre, ki se jwenn pa detektè a. LC-MS reflete avantaj ki genyen nan konplemantè chromatografik ak metòd mas, konbine kapasite nan separasyon segondè nan metòd chromatografik pou echantiyon konplike ak avantaj ki genyen nan selektivite segondè nan espektrometri mas, trè sansib ak bay relatif relatif mas molekilè ak enfòmasyon estrikti, li te lajman itilize. nan anpil domèn tankou analiz pharmaceutique, osi byen ke analiz manje ak analiz anviwònman an.
Jounal prensip k ap travay nan LC-MS se jan sa a: Apre echantiyon an separe pa likid chromatografi, chak eleman antre nan detektè mas spectrometer nan vire, epi chak eleman se ionize nan sous la ion, pwodwi iyon ak yon chaj sèten ak nimewo mas diferan. Iyon yo ionize nan sous iyon an pou pwodui iyon ak chaj diferan ak nimewo mas. Iyon yo separe pa analizè mas la dapre diferan rapò mas-a-chaj (m/z), ak spectre mas yo jwenn nan lòd la nan mas-a-chaj rapò. Rezilta kalitatif ak quantitative echantiyon an ka jwenn pa pwosesis analyse spectre mas yo.
Likid chromatografi-mass spectrometri analiz sitou konsiste de sistèm HPLC (segondè pèfòmans likid chromatografi) ak MS (spèktrometri mas).
HPLC sistèm pèmèt pou separasyon efikas nan melanj, volatilizasyon nan faz mobil nan pwodwi gwo kantite gaz, presyon inlet atmosferik, pa gen limit mas, ak kapasite nan sèvi ak solisyon tanpon sèl.
Sistèm MS, nan lòt men an, mande pou kondisyon vakyòm segondè yo opere, ak sistèm MS yo ekivalan a sistèm analiz mas epi yo pi byen opere ak tanpon temèt.
Nan ekipman LC-MS, la Sistèm HPLC ak sistèm MS jwe yon wòl enpòtan nan jwenn yon spectre mas konplè. Premyèman, sistèm HPLC la kòmanse sistèm sous ion nan koòdone LC pou konsantre gwo bout bwa a ion, ak Lè sa a, gwo bout bwa a ion konsantre epi echantiyon an analize atravè analizè MZ la epi transfere nan detektè a.
Anplis kapasite pou analize konpoze fòtman polè, difisil pou volatilize, ak tèmik enstab ki pa ka analize pa gaz chromatografi-spèktrometri mas (GC-MS), LC-MS tou gen avantaj sa yo.
a. Wide ranje analyse, MS ka detekte prèske tout konpoze, sa ki ka rezoud pwoblèm nan nan analize konpoze tèmik enstab relativman fasil.
b. Kapasite separasyon fò, menm si melanj lan analize pa konplètman separe sou chromatogram la, men karakteristik la mas ion chromatogram nan MS ka bay chromatogram respektif yo pou rezon kalitatif ak quantitative.
c. Rezilta analiz kalitatif yo serye, epi pwa molekilè ak enfòmasyon estriktirèl rich nan chak eleman ka bay ansanm.
d. Limit deteksyon an ba, MS la gen sansiblite segondè, epi kapasite deteksyon an ka ogmante pa plis pase yon lòd nan grandè pa deteksyon seleksyone ion (SIM).
e. Vit analiz tan, kolòn chromatografik likid yo itilize nan LC-MS se yon kolòn dyamèt etwat, ki diminye tan analiz la ak amelyore efè separasyon an.
f. Yon wo degre de automatisation, LC-MS se trè otomatize.
Gen de gwo sistèm klasifikasyon pou chromatografi likid-spèktrometri mas (LC-MS) teknik nan itilize komen jodi a, youn nan pèspektiv nan sous la ion nan espektwomèt la mas ak lòt la nan pèspektiv nan analiz la mas nan espektromèt la mas.
| Pèspektiv klasifikasyon | LC-MS Non |
|---|---|
| Ion sous | Sous ionizasyon electrospray (ESI) Sous ionizasyon chimik presyon atmosferik (APCI) Sous fotoyonizasyon presyon atmosferik (APPI) Iyonizasyon desorpsyon lazè asiste matris (MALDI) |
| Analizè mas | Kwadrupol likid chromatography-mas spectrometer Ion pèlen likid chromatographie-mass spectrometer Tan-of-vol likid chromatography-mass Spectrometer (TOF) Fourier transfòme espektrometri mas |
Pami yo, ESI, APCI, ak APPI Sous iyon yo sitou itilize nan konbinezon ak espektrometri mas kadripol ak iyon pèlen, ki se espektromèt mas likid ki pi lajman itilize kounye a.
Soti nan pwen de vi sous iyon an, ESI se apwopriye pou konpoze de mwayen ak segondè polarite, espesyalman pou ranvèse-faz chromatografi likid makonnen ak espektrometri mas, e kounye a se youn nan metòd yo ionizasyon ki pi lajman itilize nan spèktrometri likid-mas; akòz devlopman nan espre pneumatik asistans, tolerab koule likid-faz la ogmante a 1 mL-min-1; pa fòme iyon milti-chaj, ranje analiz pwa molekilè a ka pwolonje ESI tou gen avantaj ke li se yon detektè konsantrasyon ki baze sou ak Se poutèt sa ka itilize kèlkeswa volim echantiyon an, ak mikwo espre (μESI) ak nanospray (nESI). ) teknik devlope nan dènye ane yo patikilyèman apwopriye pou analiz trè sansib nan echantiyon tras. APCI se yon teknik pou ionize analit nan faz gaz la lè l sèvi avèk aksyon fotochimik nan presyon atmosferik, ki se menm jan ak APCI nan dimansyon epi li konplemantè a. MALDI gen avantaj ki genyen nan kouple fasil ak TOF pou detèminasyon nan gwo kantite molekil mas, sansiblite segondè, ak preparasyon echantiyon senp. MALDI te lajman itilize pou analiz de pwoteyin, peptides, nukleotid, polisakarid, ak polymère sentetik. Sepandan, akòz karakteristik sa yo nan MALDI, gen relativman kèk etid sou aplikasyon an nan kouti dirèk sou entènèt ak LC.
Soti nan pwen de vi analizè mas la, yo itilize quadrupol la pou fè sèten iyon kalifye pase nan kwadwòp la nan detektè a anba aksyon an nan yon chan elektrik altène; se pèlen an ion itilize rasanble iyon andedan pèlen an premye, ak Lè sa a, lage iyon yo andedan pèlen an nan detektè a youn pa youn pa chanje paramèt elektrik yo. Se sèl-etap spectrometri mas kwadwiplè yo itilize sèlman pou espektrometri mas prensipal, pandan y ap twa-etap espektrometri mas kwadripol ka fè fonksyon segondè espektometri mas. Spèktrometri mas prensipal la bay enfòmasyon sou pwa molekilè nan konpoze an, pandan y ap espektometri mas segondè bay enfòmasyon estriktirèl tankou iyon fragman nan konpoze an atravè disosyasyon kolizyon-induced (CID). Spectrometri mas iyon pèlen an gen yon fonksyon mas spèktrometri milti-etap (jeneralman ka reyalize nivo 5-11), espesyalman ak yon fonksyon otomatik milti-etap (Auto MS(n)), ki pi favorab pou rezoud estrikti konpoze ak diminye kondisyon yo pou rezolisyon an nan spectre an, men presizyon an mas ak rezolisyon yo pa osi bon ke analizè a mas quadrupole; Quadripol nan twa etap kapab tou satisfè fonksyon rezolisyon estrikti jeneral la, men li limite pa Quadripol nan twa etap kapab tou satisfè fonksyon analiz jeneral estrikti, men li limite pa tan an optik epi li pa apwopriye pou analiz analiz nan yon etap. gwo ranje mas. Pou spèktrometri mas prensipal ak deteksyon iyon chwazi (SIM) oswa espektrometri mas tandem ak siveyans reyaksyon miltip (MRM), analizè mas kwadwiplè yo jeneralman 1-2 lòd nan grandè pi sansib pase pyèj ion ak Se poutèt sa yo pi apwopriye pou analiz quantitative nan tras oswa eleman tras. Tan-of-vol mas spectrométrie se aplikasyon an nan diferan vitès vòl iyon m/z, vòl ion nan menm chemen an rive jwenn detektè a nan diferan moman epi jwenn yon separasyon mas, li se souvan itilize ansanm ak MALDI, avantaj ki genyen yo se vitès optik rapid, analiz de yon pakèt domèn mas; Fourier transfòme mas spèktrometri se yon nouvo teknoloji devlope nan dènye dekad la oswa konsa, prensip k ap travay li yo ak analizè mas yo mansyone anwo yo se fondamantalman diferan, teknik la aplike Fast Fourier transfòme metòd konvèti siyal la frekans nan iyon nan siyal mas spèktrometri, ki gen avantaj nan rezolisyon segondè, ak sansiblite a ogmante ak rezolisyon an.
Electrospray (ESI): Pwosesis ionizasyon an enplike jenerasyon ti gout chaje pa yon jaden elektrik, ki te swiv pa evaporasyon ion pou pwodui iyon yo dwe analize. Konpoze ki nesesè yo pa bezwen temèt epi li se metòd chwa pou analiz de konpoze tèmik enstab. Iyon yo deja pwodwi nan solisyon epi yo ka jenere iyon milti-chaje anplis iyon sèl-chaje.
Iyonizasyon chimik presyon atmosferik (APCI): yon pwosesis iyonizasyon chimik gaz (CI) kote sòlvan oswa gaz reyaksyon an premye chaje pa aksyon yon zegwi corona epi answit transfere nan konpoze an pou fòme iyon. Nan itilize APCI, pwodui chimik la ak konpoze an dwe temèt, pwodui chimik la ak konpoze an dwe tèmik ki estab, ak iyon yo pwodwi nan kondisyon gaz, men se sèlman iyon chaje yon sèl yo pwodwi.
Depi diferan sous ion gen diferan mòd ionizasyon, yo gen diferan ranje aplikasyon. Anvan ou fè eksperyans analyse, yo ta dwe chwazi yon sous iyon apwopriye dapre kalite konpoze sib la.
| LC-MS mòd ionizasyon | Dimansyon de aplikasyon |
|---|---|
| ESI+ | Apwopriye pou konpoze debaz, oswa konpoze ki gen heteroatom, elatriye, Konpoze ki genyen gwoup tankou -NH2, -N, -NH, -CO, -COOR, elatriye. |
| ESI- | Apwopriye pou konpoze asid, oswa konpoze ki gen gwo gwoup negatif. Konpoze ki genyen gwoup tankou -COOR, -OH, elatriye. |
Nan LC-MS, solvang ki pi souvan itilize pou faz mobil lan se metanol, asetonitrile ak dlo, lòt solvang ka itilize tou.
| Solvang pou sous ES ak APCI | Solisyon apwopriye pou sous APCI |
|---|---|
| Metanòl Acetonitrile Dlo Etanòl Pwopanol Izopropanol Butanol Acetone | Idwokarbur (egzanp, tire n-hexyl) Idrokarbur ki te tire siklo (pa egzanp, ki te tire siklohexane) Toluèn Benzene Styrène Kabòn tetra-gazeifikasyon Disulfid kabòn |
Aditif faz mobil yo itilize sou LC-MS yo diferan de LC, kote sèlman aditif temèt yo ka itilize, ak kalite aditif komen yo jan sa a.
Mòd pozitif
M - NH2 + Asid [M - NH3]* + Asid
Asid temèt yo souvan itilize pou chwazi faz mobil ki gen asid temèt nan mòd pozitif: (asid fòmik, asid acetic)
Mòd negatif
M- COOH + Baz [MCOO] + Baz
Chwazi faz mobil ki gen baz temèt oswa sèl temèt nan mòd negatif souvan itilize baz temèt oswa sèl <dlo idwojèn, laprès asid fòmik, asetat amonyòm.
Lè w ap fè eksperyans LC-MS, li enpòtan pou w chwazi gwosè kolòn ki kòrèk la selon kalite sous iyon epi mete pousantaj koule LC apwopriye pou fòm pik apwopriye a, osi byen ke efikasite ionizasyon vle a ka jwenn.
