Catalogue: Ekipman-pou-Elisa-Kit-Fabrication
ELISA, nan tès imunosorban ki lye ak anzim, se yon klas souvan itilize nan teknik imunoenzymatic. Metòd prensipal la se adsorbe yon antijèn oswa antikò li te ye sou sifas yon konpayi asirans faz solid, Lè sa a, enkube antikò oswa antijèn anzim ki make (makonnen) ak li, ajoute yon pwomotè koulè pou devlope koulè a, detèmine diferans ki genyen ant koulè a. nan analit la yo dwe mezire ak koulè a nan estanda a pa yon makè anzim, epi trase koub aktivite anzim la pou jwenn konsantrasyon nan analit la yo dwe mezire.
Gen sèt etap ki enplike nan fè yon ELISA:
Dirèk ELISA se imobilize antijèn an sou la ELISA Lè sa a, sèvi ak antikò anzim ki make pou detekte antijèn an dirèkteman.
Konpare ak lòt kalite eksperyans ELISA, eksperyans ELISA dirèk yo gen mwens etap, deteksyon pi vit, epi yo pa bezwen sèvi ak antikò segondè, pou fè pou evite kwa-reaktivite, rezilta mezi yo pa gen tandans fè erè. Sepandan, paske antijèn ELISA dirèk la pa espesifikman fiks, pwoteyin sib la ak lòt enpurte nan echantiyon an pral mare nan plak ELISA a, epi background eksperimantal la pral pi wo. Ak chak pwoteyin sib nan ELISA dirèk bezwen prepare yon antikò prensipal ki ka mare espesyalman nan li, eksperyans la se mwens fleksib. Anplis de sa, paske pa gen okenn antikò segondè itilize, siyal la pa anplifye, diminye sansiblite nan tès la.
ELISA endirèk se yon pwosesis de-etap kote yon antijèn mare nan yon plak ELISA, ki te swiv pa yon pwosesis de-etap kote yo ajoute yon antikò deteksyon pou lye espesyalman nan antijèn an, ki te swiv pa adisyon nan yon antikò segondè ki make anzim pou deteksyon ak devlopman koulè lè l sèvi avèk substra a.
Konpare ak ELISA dirèk, ELISA endirèk itilize antikò segondè ki make anzim, ki pi sansib epi ki mande mwens antikò ki make, sa ki fè li pi ekonomik. ELISA endirèk ofri tou pi gwo fleksibilite kòm diferan antikò prensipal yo ka itilize ak yon sèl antikò segondè ki make. Dezavantaj yo nan eksperyans ELISA endirèk yo se posiblite pou kwa-reaktivite (obligasyon dirèk nan antikò segondè ki make anzim nan antijèn), ki ka ogmante background nan, ak etap adisyonèl nan enkubasyon antikò segondè a konpare ak ELISA dirèk, ki pwolonje. sik eksperimantal la.
Nan yon sandwich ELISA, Antikò kaptire a premye imobilize nan pwi yo nan plak ELISA a, ak Lè sa a, echantiyon an ajoute, ki te swiv pa antikò deteksyon an. Si antikò deteksyon an gen etikèt sou anzim, yo ka rele li sandwich dirèk ELISA; si antikò deteksyon an pa make, li nesesè tou pou sèvi ak yon antikò segondè ki make anzim pou mare nan antikò deteksyon an, epi yo rele sa a sandwich endirèk ELISA.
Sansiblite ELISA sandwich se wo, li se 2-5 fwa pi sansib pase ELISA dirèk oswa endirèk; an menm tan an, sandwich ELISA sèvi ak de antikò espesifik yo mare nan antijèn nan epi li gen gwo espesifik. Anplis de sa, ELISA a sandwich ka detekte pa mwayen dirèk oswa endirèk, ki se pi fleksib. Dezavantaj nan sandwich ELISA se kondisyon ki wo pou antikò pè. Si pa gen okenn twous estanda oswa teste pè antikò ki disponib, pèsonalizasyon ak optimize antikò yo obligatwa, paske li enpòtan pou diminye reyaktivite kwa ant antikò kaptire ak deteksyon.
Jounal konpetisyon ELISA se yon antijèn pre-encapsule sou yon transpòtè solid-faz ak yon antikò espesifik ki gen etikèt anzim. Pandan eksperyans lan, yo ajoute antijèn (oswa antikò) yo dwe teste. Si tès la se yon antijèn, antijèn yo dwe teste a konkirans ak antijèn pre-encapsule sou transpòtè faz solid la pou mare antikò ki make anzim la; si tès la se yon antikò, antikò yo dwe teste konkirans ak antikò anzim ki make orijinèlman ki te prezan nan sistèm nan mare antijèn an encapsulé sou transpòtè faz solid la. Antikò ki mare konpetitif lave pa lave epi finalman, substra a ajoute pou devlopman koulè. Li enpòtan sonje ke rezilta devlopman koulè a se envès pwopòsyonèl ak kantite antijèn (oswa antikò) yo dwe detekte.
ELISA konpetisyon an se yon ti kras pi konplèks pase twa metòd ki dekri pi wo a, men tout twa nan kalite ELISA ki anwo yo aplikab nan fòm ELISA konpetisyon. Avantaj prensipal li se ke li ka detekte echantiyon enpur epi li gen gwo repwodiksyon done, men li gen pwoblèm nan sansiblite pòv jeneral ak espesifik.
Rezilta pozitif pou kontwòl negatif
a. Egzanp, reyaktif la kontamine, oswa move operasyon lè ajoute echantiyon mennen nan kwa-kontaminasyon pa gaye solisyon ant pwi adjasan - ranplase reyaktif ak opere ak anpil atansyon.
b. Plak anzim la pa lave byen - vide solisyon antikò a pwòp anvan ou lave plak la, ak Lè sa a, vide solisyon an lave sou tout pwi plak yo pou asire ke li ka lave konplètman.
c. Yon kantite lajan twòp nan antikò mennen nan ki pa espesifik obligatwa - itilize antikò a dapre kantite lajan rekòmande nan enstriksyon yo epi delye antikò a nan konsantrasyon ki apwopriye a.
Plak anzim an jeneral background segondè
a. Ki pa espesifik obligatwa nan antikò - asire ke pwi yo fèmen epi ke yo itilize solisyon an fèmen apwopriye pou anpeche ki pa espesifik obligatwa.
b. Segondè konsantrasyon obligatwa substra - delye substra a kòmsadwa.
c. Tan reyaksyon an twò lontan - mete fen nan reyaksyon an ak yon solisyon revokasyon le pli vit ke plak la te devlope ase koulè pou lekti absòbe ak diminye tan devlopman an kòmsadwa.
d. Kontaminasyon nan solisyon substra - Solisyon substra nòmal yo ta dwe klè ak transparan, si jòn oswa lòt koulè parèt, li endike kontaminasyon epi yo ta dwe ranplase ak yon nouvo solisyon substra.
e .Enkubasyon substrate pa pwoteje kont limyè - Enkubasyon substrate ta dwe fèt nan kondisyon limyè-prèv.
Pov repetibilite ant replike pwi yo
a. Kantite echantiyon ELISA se pa pwòp, ak tan an spiking se long oswa kout - eseye kenbe tan an spiking fèmen nan premye fwa a lè ajoute doub pwi.
b. Volim ki pa konsistan - echantiyon yo ta dwe byen melanje anvan dilution epi yo ta dwe itilize menm zam pipèt la.
c. Kondisyon lave enkonsistan, operatè yo - Lè repete echantiyon, kondisyon fonksyònman yo ak pèsonèl yo ta dwe konsistan ke posib ak dènye fwa a.
d. Enkubasyon substrate pa pwoteje kont limyè - Enkubasyon substrate ta dwe fèt nan kondisyon limyè-prèv.
