Rezon ki fè a ELISA tès se bay yon baz eksperimantal egzat pou eksperyans la, epi asire fyab la nan done yo eksperimantal, nan pwosesis la eksperimantal dwe konfòme yo ak kontwòl kalite konplè, ak pwosesis la tout antye de kontwòl kalite, nan koleksyon an nan espesimèn dwe ranpli plan anvan. .
Catalogue: Ekipman pou Elisa Kit Faktori
1. Egzanp volim kolekte pou chak tès imunosorban ki lye ak anzim = 100ulx kalite tès, si yo dwe fè plizyè pwi, volim echantiyon kolekte = 100ulx tip tès x 2.
2. Si la ELISA echantiyon yo kolekte epi teste nan yon semèn, li ka estoke nan 2-8 ° C. Si tès la pa fèt alè, tanpri divize echantiyon an epi friz li nan -20 ° C oswa -80 ° C pou evite konjelasyon repete ak dekonjle.
3. Ranje deteksyon twous ELISA a pa egal ak seri konsantrasyon analit nan echantiyon an. Li rekòmande pou estime konsantrasyon analit la nan modèl la atravè literati ki enpòtan yo epi detèmine seleksyon an nan pre-eksperyans anvan eksperyans lan.
4. Yo ta dwe kolekte echantiyon serom ELISA ak atansyon pou evite emoliz, paske liz eritrosit lage sibstans ki gen aktivite peroksidaz, ak ilistrasyon emolize ka ogmante devlopman koulè ki pa espesifik.
5. Pou asire presizyon tès pipi a, lè w ap itilize koleksyon ELISA, yo dwe byen kolekte echantiyon pipi ak prezèvasyon, koleksyon veso pipi yo dwe pwòp epi sèk, epi li pi bon pou itilize resipyan jetab pou fè pou evite kontaminasyon ki te koze pa itilizasyon an. nan dwòg ak pwòp mwens, echantiyon pipi yo dwe fre, apre retansyon, yo ta dwe san pèdi tan teste oswa estoke.
6. Espesimèn yo ta dwe teste fre si gen kontaminasyon bakteri, bakteri an ka gen HRP andojèn, ki pral pwodwi tou yon fo reyaksyon pozitif. Si yo estoke nan frijidè a pou twò lontan, nan ki polymerization ka rive, metòd endirèk ELISA nan background nan Lakeview apwofondi.
7. Nan eksperyans pwosesis echantiyon ELISA yo, repete konjelasyon ak dekonjle echantiyon an ap diminye puisans pwoteyin lan, kidonk pou echantiyon an dwe teste pou tès miltip, li rekòmande friz yon ti kantite pòsyon.
Espesimèn likid: serom, plasma, pipi, supernatant selil, likid serebrospinal, elatriye.
Selil kiltive yo
Espesimèn tisi
An jeneral, echantiyon serik ELISA yo mezire nan 5 jou yo ka mete nan 4 ° C, espesimèn yo estoke nan frijidè a pou twò lontan ap mennen nan polymérisation nan serik IgG, se background nan reyaktif nan metòd la endirèk apwofondi, plis pase yon semèn pou detèmine nesesite pou -20 ° C depo, serom nan frizè fonn, pwoteyin lokal konsantrasyon, divize inegalman, yo ta dwe konplètman melanje epi evite jenerasyon an nan bul lè.
Espesimèn serom twoub oswa presipite yo ta dwe santrifuje oswa filtre an premye epi apre sa klarifye anvan tès la.
Espesimèn ELISA sera pou mezi antikò yo ta dwe estoke pou plizyè tès, an ti kantite sou glas.
Konsèvasyon ELSA sera yo ta dwe sèlman kolekte ak atansyon sou operasyon aseptik, epi yo ka ajoute konsèvasyon apwopriye tou. Fo-pozitif espesimèn ki te koze pa antikoagulasyon enkonplè akòz entèferans nan eleman fibrin yo rekòmande pa sèvi ak anticoagulant, espesyalman eparin anticoagulant.
Serom: ELISA tanperati chanm san koagulasyon prive pou 10-20 minit, santrifujasyon pou apeprè 20 minit (2000-3000 rpm). Sipènatan an ta dwe kolekte ak anpil atansyon epi santrifuje ankò si presipitasyon rive pandan depo.
Plasma: EDTA oswa sitrat sodyòm yo ta dwe chwazi kòm antikoagulan dapre egzijans echantiyon tès imunosorban ki lye ak anzim, melanje pou 10-20 minit, santrifuje pou apeprè 20 minit (2000-3000 rpm), epi yo ta dwe ak anpil atansyon kolekte supernatant la. santrifuje ankò si presipite fòme
Pipi: kolekte nan tib esteril, epi santrifuje pou apeprè 20 minit (2000-3000 rpm), yo te kolekte supernatant la ak anpil atansyon, epi yo ta dwe santrifuje ankò si presipite fòme pandan prezèvasyon. Likid Thoracoabdominal ak likid cerebrospinal refere a pratik la.
Supernatant kilti selil: Lè w ap detekte eleman sekretè ELISA, kolekte nan tib esteril, santrifijez la pou apeprè 20 minit (2000-3000 rpm) ak anpil atansyon kolekte supernatant la, epi lè detekte eleman entraselilè, delye sispansyon selilè a ak PBS (PH 7.2-7.4), ak konsantrasyon selil la rive nan apeprè 1 milyon / ml, pa repete friz-. dekonjle pou detwi selil yo epi lage konpozan entraselilè yo.
Espesimèn tisi: Apre koupe espesimèn ELISA, peze yo, ajoute yon sèten kantite PBS, PH 7.4, friz yo byen vit ak nitwojèn likid, epi kenbe yo an rezèv. Apre espesimèn yo fonn, kenbe yon tanperati 2-8 ° C nan nenpòt ki lè, ajoute yon sèten kantite PBS (PH 7.4), omojeneize espesimèn yo konplètman alamen oswa omojenize, santrifuje yo pou apeprè 20 minit (2000-3000 rpm). ), kolekte supernatant la ak anpil atansyon. Yo te kolekte supernatant la ak anpil atansyon, yo te divize yon pòsyon pou tès la, epi rès la te jele epi mete sou kote.
ELISA espesimèn yo ta dwe ekstrè pi vit ke posib apre koleksyon an, epi yo ta dwe fè ekstraksyon an dapre literati ki enpòtan yo, epi yo ta dwe fè tès la pi vit ke posib apre ekstraksyon.
Metòd tès ELISA yo se metòd sandwich dirèk, endirèk, ki baze sou konpetisyon doub, ki metòd dirèk ak metòd konpetisyon yo mwens itilize, yo ta dwe metòd sandwich ki pi doub antikò, ki gen avantaj evidan nan espesifik sansiblite jèn.
Antijèn an imobilize sou klas ELISA, epi answit antijèn an detekte dirèkteman ak antikò ki make anzim la.
Konpare ak lòt kalite ELISA eksperyans, dirèk ELISA eksperyans yo gen mwens etap, deteksyon rapid, pa bezwen sèvi ak antikò segondè, evite kwa-reaktivite, ak rezilta tès yo pa gen tandans fè erè.
Sepandan, paske antijèn ELISA dirèk la pa fiks espesifikman, pwoteyin sib la ak lòt pwoteyin enpurte nan echantiyon an pral mare nan vèsyon ELISA, background eksperimantal la pral pi wo, epi nan ELISA dirèk chak pwoteyin sib bezwen prepare yon antikò prensipal. ki ka mare espesyalman nan li, eksperyans la se mwens fleksib. Anplis de sa, paske pa gen okenn antikò segondè yo itilize, siyal la pa anplifye, diminye sansiblite nan tès la.
Antijèn an imobilize sou klas ELISA, epi answit antijèn an detekte dirèkteman ak antikò ki make anzim la.
Konpare ak lòt kalite Eksperyans ELISA, Eksperyans ELISA dirèk yo gen mwens etap, deteksyon rapid, pa bezwen sèvi ak antikò segondè, evite kwa-reaktivite, ak rezilta tès yo pa gen tandans fè erè.
Sepandan, paske antijèn ELISA dirèk la pa fiks espesifikman, pwoteyin sib la ak lòt pwoteyin enpurte nan echantiyon an pral mare nan vèsyon ELISA, background eksperimantal la pral pi wo, epi nan ELISA dirèk chak pwoteyin sib bezwen prepare yon antikò prensipal. ki ka mare espesyalman nan li, eksperyans la se mwens fleksib. Anplis de sa, paske pa gen okenn antikò segondè yo itilize, siyal la pa anplifye, diminye sansiblite nan tès la.
Antijèn ke yap teste a encapsulé ant de antikò, youn nan ki imobilize antijèn an sou yon konpayi asirans, sa vle di, antikò kaptire a, ak lòt la se antikò deteksyon an, ki ka mete etikèt sou anzim pou detèminasyon dirèk nan kantite antijèn, oswa san etikèt ak Lè sa a, mezire pa antikò segondè anzim ki make, ki dwe ak anpil atansyon chwazi pou fè pou evite kago kwa-reyaji konpetisyon pou menm kantite sit obligatwa antijèn.
Si antijèn an se yon antijèn, antijèn an ap fè konpetisyon ak antijèn an antikò ki make anzim pou mare antikò anzim ki make sou transpòtè solid-faz la. Si sibstans ki pou detekte a se yon antikò, antikò pou detekte a pral fè konpetisyon ak antikò ki gen etikèt anzim nan sistèm nan pou li mare ak antijèn ki vlope sou konpayi asirans re-solidifye a, lave antikò ki gen etikèt anzim ki mare konpetitif nan lave. , epi finalman ajoute substra a pou devlope koulè a.
Konpetisyon ELISA se yon ti jan pi konplike konpare ak twa metòd ki anwo yo, men twa kalite ELISA ki anwo yo apwopriye pou fòm ELISA konpetisyon, pwen prensipal li se yo detekte echantiyon enpur ak segondè repwodiksyon done, men gen pwoblèm nan pòv. an jeneral sansiblite ak espesifik.
| Encapsulation | Antijèn oswa antikò yo ka fizikman adsorbe sou sifas transpòtè solid-faz la, paske pati idrofob ant pwoteyin ak polystyrène sifas adsorption, apre adsorption ka kenbe reyaksyon antijenik la ak lòt aktivite iminitè. |
| Etikèt | Antijèn oswa antikò yo ka kovalans kole ak anzim yo fòme konjige anzim ki toujou kenbe aktivite iminitè yo ak karakteristik katalitik anzim yo. |
| Devlopman koulè | Apre konjige anzim la mare nan antijèn ki koresponn lan oswa antikò ki ankapsule nan konpayi asirans lan faz solid, li se tou imobilize sou konpayi asirans lan faz solid, ak reyaksyon an devlopman koulè ka rive apre yo fin ajoute anzim-substra a, ak kontni relatif la nan antijèn oswa antikò ka kalkile selon koulè koulè reyaksyon an. |
Espesifik: Espesifik nan twous ELISA an gen rapò ak eleman kle nan twous la, pè a antikò, si youn nan pè yo antikò se antikò miltip, lòt la dwe yon antikò monoklonal, li rekòmande yo sèvi ak yon antikò monoklonal doub.
Sansiblite: Sansiblite reflete kapasite twous la pou detekte kantite minimòm sibstans yo dwe detekte, itilizatè a ka chwazi twous ki apwopriye a selon kantite endikatè yo dwe detekte nan echantiyon yo, si kantite endikatè yo dwe detekte. trè ba, twous jeneral la pa ka satisfè kondisyon yo, ou ka chwazi yon twous ELISA trè sansib.
Repetibilite: eksperyans syantifik mande pou repetibilite, jeneral ELISA twous, ak yon peryòd nan plak la ak koyefisyan varyasyon entèrplat yo ta dwe kontwole nan 15%.
Senplisite: Pi kout tan eksperimantal la ak plis pratik operasyon an, plis chans pou twous la ap akeyi pa itilizatè a, anba kondisyon pou asire done-wo kalite.
| Kesyon | Kòz ki posib | Solisyon |
|---|---|---|
| Segondè background oswa kontwòl negatif se sèlman segondè Antikò ki pa espesifik obligatwa Konjige anzim twò konsantre Tanperati enkubasyon twò wo Ekspozisyon anvan réutilisation de substrate Twòp tan rete anvan lekti plak la | Pwi kontwòl negatif yo kontamine pa echantiyon kontwòl pozitif Solisyon an bloke pa apwopriye, ranplase solisyon an bloke Tanpri tcheke si konjige anzim la dilye dapre enstriksyon yo Tcheke si tanperati enkibatè a kòrèk epi ki estab Lekti yo ta dwe pran nan lespas 3 minit apre yo fin ajoute solisyon revokasyon nan yon kote ki fè nwa, pwoteje kont limyè. | Pa gaye solisyon lave soti nan pwi yo lè w ap lave |
| Koub estanda koub estanda a bon, men echantiyon an pa gen okenn siyal deteksyon Lòt sibstans nan echantiyon an afekte / fènwa deteksyon an Fo valè ki ba akòz efè HOOK akòz gwo konsantrasyon detektè nan echantiyon an | Pa gen oswa trè ba nivo deteksyon nan echantiyon an Apwopriye dilution pou redwi entèferans lòt sibstans, oswa seri dilution, rekiperasyon deteksyon Delye echantiyon an nan miltip apwopriye pou kenbe konsantrasyon tès la nan seri deteksyon twous la | Fikse referans entèn ak re-eksperyans |
| Pov repetibilite Reyaktif pa melanje Enpurte oswa presipite nan echantiyon an koupe pa pwent la pipèt | Ti boul lè nan pwi yo Asire bon melanj de réactifs Anvan w itilize; santrifuje Fè atansyon lè w ajoute likid | Sèvi ak yon pwent zegwi pou chwazi bul lè |
