Kolòn Kwomatografi
Ki sa ki kolòn kwomatografi?
Kolòn kromatografik ka divize an kolòn chaje ak kolòn louvri-tib. Pifò kolòn kwomatografik yo fèt an metal oswa vè. Gen fòm tib dwat, fòm tib mawonnen, tib ki gen fòm U, ak lòt fòm. Kwomatografi likid anjeneral itilize kolòn chaje. Efè separasyon kolòn kwomatografik depann sou faz estasyonè ki chwazi a, ansanm ak kondisyon preparasyon ak fonksyònman kolòn yo.
Kromatografi se yon mwayen pou separasyon ak analiz, ak separasyon se nwayo a, kidonk kolòn nan, ki responsab pou separasyon an, se kè a nan sistèm nan kwomatografik. Kondisyon yo pou la kolòn kwomatografik yo se efikasite kolòn segondè, bon selektivite, vitès analiz vit, elatriye. Komèsyal ki disponib pou HPLC se yon varyete de anbalaj patikil, tankou silica ki pore ak faz ki baze sou silica, alumina, mikwosfè polymère òganik (ki gen ladan rezin echanj iyon), kabòn ki mouye. , elatriye, pandan y ap gwosè patikil li yo jeneralman 3,5,7,10μm, elatriye, valè teyorik efikasite kolòn ka rive nan 5 ~ 160,000 / m. Analiz jeneral la sèlman bezwen 5000 efikasite kolòn nan kantite plak; analiz homolog ka osi lontan ke 500; plis difikilte pou separe pè materyèl yo ka itilize jiska 20,000 kolòn. Se poutèt sa, yon longè kolòn nan apeprè 10 ~ 30cm se jeneralman ase pou analiz la nan melanj konplèks.
Efikasite kolòn afekte pa faktè andedan ak deyò kolòn nan, ak reyalize pi bon efikasite nan kolòn nan, nan adisyon a yon ti volim mouri deyò kolòn nan, yon estrikti kolòn rezonab (minimize volim nan mouri deyò kabann lan chaje) ak teknoloji chaje. yo obligatwa. Menm ak pi bon teknik loading, ranpli nan pati sant kolòn nan ak sou pati miray la toujou diferan. Pati ki toupre miray la se pi lach, pi fasil yo pwodwi koule tranche, ak vitès koule pi vit, ki afekte fòm nan koule nan ajan an rense ak elaji gwoup la espèk, ki se efè a miray. Zòn miray tib sa a se apeprè 30 fwa epesè gwosè patikil la konte soti nan miray tib la anndan an. Nan yon sistèm chromatografi likid jeneral, efè a nan kolòn nan efè sou efikasite kolòn se pi plis pase efè a nan miray la tib.
Menm ak pi bon teknik loading, ranpli nan pati sant kolòn nan ak sou pati miray la toujou diferan. Pati ki toupre miray la se pi lach, pi fasil yo pwodwi koule tranche, ak vitès koule pi vit, ki afekte fòm nan koule nan ajan an rense ak elaji gwoup la espèk, ki se efè a miray. Zòn miray tib sa a se apeprè 30 fwa epesè gwosè patikil la konte soti nan miray tib la anndan an. Nan yon sistèm chromatografi likid jeneral, efè a nan kolòn nan efè sou efikasite kolòn se pi plis pase efè a nan miray la tib.
Estrikti kolòn kwomatografi
Kolòn kromatografik konsiste de yon tib kolòn, yon bouchon presyon, yon ferul (bag sele), yon plak tamiz (filtre plak), jwenti, vis, elatriye. La tib kolòn se sitou te fè nan asye pur, epi lè presyon an pa pi wo pase 70 kg / cm2, ka epè-ranpa vè oswa tib kwatz ka itilize tou, ak miray ranpa a nan enteryè nan tib la mande pou yon wo degre de fini. Yo nan lòd yo amelyore efè a kolòn, epi redwi efè a miray, Nerjaveèi asye kolòn miray polisaj. Genyen tou moun ki nan miray kolòn Nerjaveèi asye kouvwi ak plastik fliyò amelyore fini nan miray enteryè, efè a se menm jan ak polisaj. Genyen tou itilize nan silica fusion oswa pawa vè, pou kolòn tib amann. Jwenti kolòn yo nan tou de bout kolòn chromatografik la ekipe ak yon plak Van andedan, ki se Sinter Nerjaveèi oswa alyaj Titàn ak yon ouvèti 0.2 ~ 20μm (5 ~ 10 & μm), tou depann de gwosè patikil filler la, nan lòd. pou anpeche filler la koule soti.
Anbalaj pou kolòn kwomatografik
Anbalaj kolòn komen: kolòn kabòn 18 [1] (ODS/C18), kolòn kabòn 8 (MOS/C8), kolòn kabòn 6 (Hexyl/C6), kolòn kabòn 4 (Butyl/C4), kolòn kabòn 1 (Methyl/C1). ), kolòn echanj aniyon (SAX), kolòn echanj kasyon (SCX), kolòn fenil (Phenyl), kolòn amine (Amino/NH2), kolòn ki baze sou cyanide (Cyano/CN/Nitril).
Anbalaj kolòn adsorption komen: kolòn jèl silica.
Kalite kolòn kwomatografi
Kolòn kromatografik ka divize an analyse ak preparasyon, dapre itilizasyon yo ak espesifikasyon gwosè diferan jan sa a.
a. Kolòn analyse konvansyonèl (kolòn konstan), dyamèt enteryè 2 ~ 5mm (souvan itilize 4.6mm, domestik 4mm ak 5mm), longè kolòn 10 ~ 30cm.
b. Kolòn ak yon dyamèt etwat (kolòn ak yon tib etwat, ke yo rele tou kolòn ak yon dyamèt tib amann, semi-mikrokolòn), dyamèt enteryè 1 ~ 2mm, longè kolòn 10 ~ 20cm.
c. Kolòn kapilè (yo rele tou mikrokolòn), dyamèt enteryè 0.2 ~ 0.5 mm.
d. Kolòn semi-preparatif, dyamèt enteryè >5mm.
e. Kolòn preparasyon laboratwa ak yon dyamèt enteryè 20 ~ 40mm ak yon longè kolòn 10 ~ 30cm.
f. Dyamèt entèn kolòn preparasyon pwodiksyon yo ka rive plizyè dizèn santimèt. Dyamèt enteryè kolòn nan jeneralman detèmine dapre longè kolòn nan, gwosè patikil anbalaj la ak to koule ki pliye a, ak objektif pou evite efè miray tib la.
Itilizasyon kolòn kwomatografi
Kwomatografi echanj iyon
A. Enstalasyon
a. Premyèman, ou ta dwe konfime ke konektè yo ak tiyo kolòn nan ak enstriman an byen matche. Pou diminye volim mò a, sèvi ak yon liy ki gen pi piti dyamèt enteryè posib pou koneksyon ant valv enjeksyon an, kolòn nan ak detektè a, epi kontwole longè liy koneksyon ant enjektè a, kolòn nan ak detektè a. Anvan ou enstale kolòn nan, konfime ke solvan an nan sistèm chemen koule a annòd. Pou analiz echantiyon ki pi konplèks, li rekòmande pou enstale yon kolòn pwoteksyon.
b. Pou fè pi bon koneksyon ant kolòn nan ak sistèm enstriman an, ou ta dwe eseye itilize bouchon vis la ak konektè konik ki koresponn ak koòdone kolòn nan. Si konektè orijinal la te koresponn ak lòt kalite kolòn pandan yon bon bout tan, li rekòmande pou verifye koòdone a anvan ou konekte nouvo kolòn nan pou evite domaj nan kolòn nan oswa flit ki koze pa move matche kolòn nan.
c. Sèvi ak ekipman inivèsèl, ki sèlman bezwen sere boulon alamen san yon kle espesifik, avèk yon presyon 5000psi; tanperati itilizasyon an pa dwe depase 100 ℃.
B. Faz mobil
a. Sèvi ak yon faz mobil nan omwen 20 fwa volim kolòn nan konplètman ekilibre kolòn nan anvan ou fè deteksyon echantiyon. Toujou sèvi ak yon sòlvan klas kwomatografik pou faz mobil lan. Si ou itilize tanpon faz akeuz la ta dwe prepare chak jou pou kenbe fre pou evite pwodiksyon bakteri.
b. Faz mobil lan ta dwe filtre atravè yon manbràn mikwopor anvan ou itilize li pou elimine domaj nan sistèm kromatografik la ak kolòn nan akòz patikil ki nan faz mobil lan. Tanpon an ta dwe filtre ankò apre melanj li ak lòt faz mobil yo pou evite nouvo presipitasyon ki koze pa chanjman nan solubilite. Pa itilize dlo pi kòm faz mobil pou rense kolòn C18 la pou evite domaj nan pèfòmans kolòn nan (ajoute 5% sòlvan òganik pou rense kolòn nan ka reyalize efè netwayaj sèl tampon an an menm tan. (Li kapab tou fè kolòn nan pi fasil pou balanse).
c. Faz mobil lan bezwen degaze epi itilize pou evite move fonksyònman ponp lan ak detektè a akòz ti boul lè yo. Si faz mobil ki itilize nan tès la siyifikativman diferan de faz mobil ki itilize nan prezèvasyon kolòn nan, li ta dwe ekilibre lè l sèvi avèk fòm surdistribisyon an. Evite domaj nan kolòn nan ak sistèm enstriman an akòz chanjman toudenkou nan faz mobil lan ki lakòz ogmantasyon twòp nan presyon kolòn nan oswa kristalizasyon sèl tampon faz mobil yo. Kolòn faz nòmal yo bezwen yon tan ekilibrasyon ki pi long pase kolòn faz envèse yo.
C. Preparasyon echantiyon an
a. Yo ta dwe fonn echantiyon an nan yon solvan ki fonn nan faz mobil lan chak fwa sa posib. Sòf si yo presize otreman, rezolisyon kolòn nan gen anpil chans pou l diminye si yo itilize yon solvan fò pou fonn echantiyon an.
b. Solisyon echantiyon an ta dwe prefiltre avèk yon filtè zegwi anvan ou mete echantiyon an ladan l. Chanjman souvan nan konpozisyon faz mobil lan ap akselere rediksyon efikasite kolòn nan.
c. Kolòn kromatografik la chaje pa yon metòd omojènizasyon presyon ki wo epi li ka reziste presyon ki wo. Pou jwenn pi bon efè separasyon an, tanpri pa depase 200kgf lè w ap itilize li, epi evite ogmantasyon oswa chanjman presyon toudenkou, sinon, sa ap lakòz destriksyon anbalaj silica a epi diminye lavi sèvis kolòn nan. Tanperati maksimòm fonksyònman an pa ta dwe depase 60°C sof si gen lòt kondisyon.
D. Operasyon anrejistreman
a. Si faz mobil lan gen asid oswa sèl inòganik, li ta dwe premye rense ak dlo deyonize (20 fwa volim kolòn nan). Apre sa, kolòn nan konsève ak 100% asetonitril oswa metanòl. Finalman, sele kolòn nan ak jwenti li yo epi estoke li nan yon anviwònman ki estab.
b. Yo ta dwe evite enpak mekanik dirèk sou kolòn nan oswa tonbe li pou evite degradasyon pèfòmans kolòn nan.
E. Rejenerasyon kolòn kromatografik yo
Kolòn yo te rense ak yon sòlvan ekivalan a 20 fwa volim kolòn nan nan lòd sa a, epi li rekòmande rense nan direksyon flèch la nan kolòn nan, san yo pa backflushing si sa posib. Sekans referans solvang yo itilize nan rense a se dlo, metanol, klowofòm, ak izopropanol.
Kijan pou achte yon kolòn kromatografi?
Si ou enterese nan nou an Kolòn Kwomatografi oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay info@antiteck.com, nou pral reponn ou pi vit ke posib.