Cell Culture Media

Content
1. Kisa medya kilti selilè ye?
    1.1 Konpozisyon ak wòl medya kilti selil yo
2. Kalite medya kilti selilè
    2.1 Mwayen selilè
3. Ki jan yo achte medya kilti selil?

Mwayen kilti selilè se tou de materyèl debaz pou bay nitrisyon selilè ak ankouraje repwodiksyon selilè ak pwopagasyon nan selil kiltive yo, osi byen ke anviwònman k ap viv pou kwasans ak repwodiksyon selil kiltive yo.

Asid amine se inite debaz pwoteyin yo. Diferan kalite selil yo gen diferan kondisyon pou asid amine, men gen plizyè asid amine ke selil yo pa ka sentèz poukont yo epi yo dwe konte sou mwayen kilti a bay yo, ki rele esansyèl asid amine. Pami yo, glutamin se yon asid amine esansyèl pou sentèz asid nikleyik ak pwoteyin, ak nan absans glutamin, selil yo grandi mal epi yo mouri. Asid amine esansyèl yo enkli L-glutamin, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L-methionine, L-phenylalanine, L-threonine, L-triptofan, ak L-valine.

Sibstans biyolojik aktif ki kenbe kwasans selil epi jwe yon wòl regilasyon ak kontwole nan metabolis selilè. Nan kilti selil, byenke serom se yon sous enpòtan nan vitamin, anpil medya kilti yo complétée ak yon varyete de vitamin adapte kwasans lan nan yon seri pi laj nan liy selil yo.
Vitamin idrosolubl tankou A, D, E, ak K.

Vitamin idrosolubl tankou B1, B2, B6, B12, asid pantotènik, asid folik, biotin, C, niacinamid, elatriye.

Anpil vitamin yo patisipe nan konpozisyon gwoup yo aktif nan anzim divès kalite, san yo pa ki anzim yo ta dwe inaktif ak aktivite metabolik pa ta pran plas.

VA se yon konpayi asirans nan gwoup oligosakarid nan sentèz la nan glikoprotein nan selil epi li gen yon wòl enpòtan nan antretyen nan selil epitelyal. vD patisipe nan règleman absòpsyon kalsyòm. ve se yon antioksidan ki anpeche oksidasyon asid gra enstore nan fosfolipid ki fòme manbràn byolojik. Deficiency vK lakòz prothrombin ba ak tan koagulasyon pwolonje.
Asid folik se yon matyè premyè enpòtan pou sentèz tetrahydrofolate, ki jwe yon wòl enpòtan nan byosentèz asid nikleyik ak biosentèz pwoteyin.

Biotin se yon eleman nan yon kantite carboxylases espesifik ki enplike nan pwosesis metabolis sik ak sentèz asid gra.

Kaboyidrat se sous prensipal enèji pou kwasans selil, kèk ladan yo se eleman nan sentèz pwoteyin ak asid nikleyik. Prensipal yo se glikoz, riboz, deoxyribose, sodyòm pyruvate, ak acetate.

Esansyèl nòganik iyon tankou sodyòm, potasyòm, mayezyòm, kalsyòm, ak fosfò, yo nesesè pou konpozisyon selilè epi yo patisipe nan metabolis selil yo.

Fonksyon prensipal sèl inòganik nan mwayen kilti a se ede selil yo kenbe omeyostazi presyon osmotik. Anplis de sa, lè yo bay iyon sodyòm, potasyòm ak kalsyòm, li ede selil yo kontwole fonksyon manbràn selilè yo. Osmolarite a nan mwayen kilti selilè se yon faktè trè enpòtan, ak selil yo ka anjeneral tolere 260 mOsm / kg - 320 mOsm / kg. Osmolarite mwayen kilti estanda a varye nan ranje sa a. Nòt espesyal: Ajoute lòt sibstans nan mwayen kilti a ka chanje siyifikativman osmolarite mwayen kilti a, espesyalman sa ki fonn nan asid fò oswa baz.

Na + se kasyon ki pi enpòtan nan likid ekstraselilè a epi li jwe yon wòl desizif nan kenbe yon presyon osmotik konstan. k + se sitou distribye nan likid entraselilè a, ak intraselilè k + nesesè pou aktive sèten anzim, epi li trè enpòtan tou nan reglemante balans asid-baz nan anviwònman entraselilè a. ca2+ yo itilize nan likid ekstraselilè pou kole selil ki nan tisi youn ak lòt, epi li patisipe nan anpil aktivite fizyolojik selilè ki enpòtan nan selil la. Mg2 + se yon eleman enpòtan nan matris la entèselilè epi li enpòtan pou lyezon ki estab nan selil youn ak lòt. Fonksyon konpoze fosfò pou règleman metabolis materyèl selilè ak fonksyon fizyolojik yo trè vaste ak endispansab.

Gen plizyè kalite klasik medya kilti, pami ki DMEM, RPMI 1640, MEM, ak DMEM/F12 se medya ki pi lajman itilize. Gen lòt tankou M199, IMDM, ak mwayen L15 yo itilize tou pou kilti sèten selil. Karakteristik espesifik yo ak aplikasyon yo se jan sa a.

Debaz Eagle mwayen, ki fèt pa Eagle an 1955, BSS + 12 asid amine + glutamin + 8 vitamin. Li senp, fasil pou ajoute, ak apwopriye pou plizyè liy selil pasaj ak pou rechèch espesyal. Varyete mwayen kilti selil yo amelyore sou baz sa a se MEM, DMEM, IMDM, elatriye.

MEM mwayen kilti selilè, konnen tou kòm mwayen ki ba-limit Eagle a (minim esansyèl mwayen), te modifye soti nan mwayen debaz Eagle a (BME) an 1959. Li te efase lizin ak biotin, konsantrasyon asid amine ogmante se apwopriye pou kwasans lan nan plizyè kalite monocouches selil. , e li gen varyete otoklav, ki se youn nan mwayen ki pi fondamantal ak lajman eseye. Sepandan, akòz konpozisyon eleman nitritif limite li yo, li pa nesesèman mwayen ki pi efikas oswa ekonomik pou itilize pou pwodiksyon kilti selil espesifik ak ekspresyon.

DMEM se yon mwayen Eagle modifye pa Dulbecco, okòmansman ki fèt pou fibroblast sourit. DMEM gen de fwa konsantrasyon asid amine ak kat fwa konsantrasyon vitamin MEM, ak doub konsantrasyon HCO3- ak CO2 pou pi bon tanpon. Fòmasyon orijinal la te genyen 1000 mg / L nan glikoz, ki te pita ajiste a 4500 mg / L pou kwasans lan nan sèten selil, ki souvan refere yo kòm glikoz ki ba ak segondè.

Sik ki ba se apwopriye pou kilti selil depandan aderan, espesyalman pou kilti selil timè ak yon to kwasans rapid ak adezyon pòv. Segondè sik pi apwopriye pou kilti selil sispansyon wo dansite, tou pou kilti klonal ak pòv atachman men li pa vle li detache nan pwen kwasans orijinal li, epi tou pou kilti selil myelom ak selil transfòme transfekte ak ADN nan ibridòm. . Pa egzanp, selil CHO eksprime pwodiksyon vaksen kont epatit B, epi selil CHO eksprime EPO.

Guilber ak Iscove adapte Mwayen Dulbecco a Mwayen Iscove pou kilti eritrosit ak précurseurs makrofaj yo. IMDM tou ankouraje kwasans lenfosit B sourit, selil B ki ankouraje LPS, selil ematopoyetik mwèl zo, selil T ak selil lenfom. IMDM se yon mwayen trè nitritif ki rich epi li ka itilize pou pwopagasyon rapid selil ki gen gwo dansite.

Moore et al. devlope yon mwayen kilti selil RPMI-1640 nan Roswell Park Memorial Institute an 1967. Li fèt pou kilti lenfosit epi li gen BSS + 21 asid amine + 11 vitamin, elatriye. Koulye a, li itilize tou pou kilti selil sispansyon, tankou mamifè, espesyal. Selil ematopoyetik, lekosit nòmal oswa malfezan, selil ibridòm, ak lòt lenfosit adilt tankou K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, selil lenfom T-selil, ak selil epitelyal HCT-15 ka itilize pou referans. .

Ki fèt pa Kam an 1963, li gen eleman tras epi yo ka itilize lè nivo serom yo ba, epi li apwopriye pou kilti klonojèn. f10 apwopriye pou amstè ak selil diploid imen epi li patikilyèman apwopriye pou kilti selil likid amniotik.

F12 Kam te fèt pou klonaj selil CHO nan konsantrasyon serom ki ba epi kounye a se lajman ki itilize tou pou analiz pousantaj fòmasyon klonaj ak kilti prensipal yo. DEME F12 kapab tou melanje ak DMEM nan volim egal pou jwenn yon pwodwi ki konbine gwo konsantrasyon ak divèsite konpozisyon, ak mwayen sa a te itilize pou anpil kilti prensipal epi li pi difisil pou kilti liy selil yo. Li se tou souvan itilize kòm yon mwayen debaz pou kilti san serom paske nan kontni nitritif rich li yo ak kapasite nan sèvi ak mwens serom.

A mwayen kilti selilè ak konpozisyon chimik defini, M-199, ki fèt pa Morgan et al. an 1950, gen 53 konpozan anplis BSS e li se yon mwayen konplè, sitou itilize pou kilti fibroblast anbriyon poul. Mwayen kilti sa a dwe konplete ak serom pou sipòte kilti alontèm. m-199 ka itilize pou kiltive selil ki gen anpil espès orijin epi yo ka kiltive selil transfekte yo. Li se kounye a lajman ki itilize nan viroloji ak pwodiksyon vaksen.

Ki fèt pa MeCoy pou selil sarkom an 1959, BSS + 40 konpozan. Li ka sipòte kwasans plizyè kalite (tankou mwèl zo, po, poumon, ak larat) nan grèf prensipal yo. Anplis de sa yo apwopriye pou kilti selil prensipal jeneral, li se sitou itilize kòm kilti byopsi tisi, kèk kilti lenfosit, ak sipò kwasans pou kèk selil ki difisil pou kilti. Pou egzanp, Jensen rat sarkoma fibroblasts, lenfosit imen, HT-29, BHL-100, ak lòt selil epitelyal.

L-15 kilti mwayen se apwopriye pou kilti a nan selil timè rapidman pwopagasyon epi li se itilize nan kilti liy selil timè nan absans la nan CO2. Mwayen kilti sa a sèvi ak yon sistèm tanpon fosfat ak yon konpozisyon asid amine amelyore plis ak ranplasman glikoz pa galaktoz.

Si ou enterese nan nou an medya kilti selilè oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.