ANTITECK - Aparèy Medikal Asanble Automatisation Solisyon & Ekipman Laboratwa
selil-konjelasyon-medya

Medya konjelasyon selilè

Medya konjelasyon selil yo itilize nan laboratwa

Ki sa ki medya konjelasyon selilè?

konjelasyon-medya
Cryopreservation selil se yon metòd komen nan teknoloji kilti selil pou prezèvasyon ak depo alontèm nan selil yo. Medya konjelasyon selilè, yon solisyon ki dwe itilize pou lyofilizasyon selil yo, yo itilize pou prezèvasyon selil yo epi li jwe yon wòl kle nan achte, voye, echanj, ak livrezon selil yo. Se poutèt sa, li espesyalman enpòtan yo chwazi yon bon mwayen konjelasyon kilti selil.

Mwayen konjelasyon kilti selil

Chèchè yo souvan bezwen jele selil yo epi prezève yo pou eksperyans ki vin apre oswa itilizasyon klinik. Pwosesis debaz la se jistis senp: friz selil yo tou dousman, mete tib kriyoprezèvasyon yo nan nitwojèn likid, epi dekonjle yo byen vit lè sa nesesè. Medya konjelasyon selilè sipòte selil yo epi anpeche kristal glas fòme. Sepandan, rezilta yo nan lè l sèvi avèk diferan medya konjelasyon ka trè diferan.

Medya konjelasyon selil konvansyonèl ajoute yon ajan pwoteksyon nan mwayen kilti a, ki se tipikman 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) ak 10% -90% serom bovin. Pwoblèm yo rankontre lè w konjele selil yo nan konvansyonèl yo solisyon lyofilizasyon selil yo rezime jan sa a.

a. Refwadisman pwosedi (4 ° C → -20 ° C → -80 ° C → nitwojèn likid). Etap sa a se fatigan ak tan konsome.

b. Ki gen serom ki gen yon pi gwo risk pou kontaminasyon selil (viris, mikobakteri, mikoplasm, elatriye).

c. Diferans nan pakèt serom ak bon jan kalite mennen nan diferans pakèt nan medya konjelasyon selil yo.

d. Likid nitwojèn konjelasyon obligatwa pou kondisyon konjelasyon segondè.

e. Mikrovolim ak in situ (egzanp, plak byen) pa ka liofilize.

Twa pwodwi lyofilizasyon selil san serom sa yo se tout refwadisman san serom ak ki pa pwograme epi yo ka mete dirèkteman nan frijidè a -80 °C pou konjelasyon ak depo alontèm.

A. Solisyon lyofilizasyon selil san serom

pwodwi karakteristik
a. San serom ak pwoteyin ki sòti nan bèt pou diminye kontaminasyon pa viris, mikobakteri, ak mikoplasm.

b. Fòmil espesyal ka efektivman amelyore pousantaj siviv nan konjelasyon selilè ak pousantaj rekiperasyon.

c. Pare pou itilize, pa gen okenn preparasyon sou plas obligatwa.

d. Kalite inivèsèl, ki apwopriye pou konjelasyon ak estoke divès kalite liy selil bèt ak imen ak selil prensipal yo.

e. Konpozisyon klè, pa gen okenn varyasyon pakèt-a-pakèt.

f. Pa gen refwadisman pwograme epi pa gen okenn nitwojèn likid ki nesesè. Li ka mete dirèkteman nan -80 ℃ pou konjelasyon alontèm ak depo.

g. Mikwo ak konjelasyon in situ (egzanp konjelasyon selil ibridòm) posib, ekonomize tan ak efikasite.
Efè konjelasyon
Liy selilèTan konjelasyon / (Mwa)Pousantaj siviv selil (%) / (tanperati konjelasyon -80 ℃)
293T1295.58
4T11296.25
HUVEC1288.14
Hela1293.18

B. Serom-gratis ba DMSO selil kriyoprezèvasyon mwayen

pwodwi karakteristik
a. Sekirite segondè, pa gen serom, ak engredyan ki sòti nan bèt, posiblite ki ba pou kontaminasyon pa viris, mikobakteri, ak mikoplasm. Pi wo konsistans kalite pwodwi soti nan pakèt nan pakèt.

b. Ba DMSO ak 5% DMSO (v/v), ki redwi anpil efè toksik potansyèl sou selil yo.

c. Segondè viabilite selil ki pa gen okenn diferans pakèt.

d. Konplètman lyofilize fòmilasyon likid, pare pou itilize dirèk, pratik ak senp. Li ka estoke dirèkteman nan yon frijidè -80 ℃ pou konjelasyon ak depo san yo pa ale nan pwosesis la ki konsome tan nan refwadisman pwograme (ekonomize tan, efò, ak lajan).

e. Li ka jele in situ, tankou subclones nan selil hybridoma, ki ka twouve redwi kantite travay epi evite kontaminasyon.
Efè konjelasyon
Liy selilèTan konjelasyon / (Mwa)Konparezon A
Pousantaj siviv selil (%)
Konparezon B
Pousantaj siviv selil (%)
Pousantaj siviv selil (%)
3T31868997
293E1858693
293F1858592
rekiperasyon-selil-kilti-konjelasyon-mwayen

C. Serom-gratis DMSO-gratis selil kriyokonservasyon mwayen

pwodwi karakteristik
a. Sekirite segondè, pa gen serom, ak engredyan ki sòti nan bèt, posiblite ki ba pou kontaminasyon pa viris, mikobakteri, ak mikoplasm. Pi wo konsistans kalite pwodwi soti nan pakèt nan pakèt.

b. Pa gen DMSO, pa gen okenn efè toksik potansyèl sou selil yo.

c. Segondè viabilite selil ki pa gen okenn diferans pakèt.

d. Ranpli fòmilasyon solisyon lyofilizasyon, yo ka itilize dirèkteman, pratik ak senp.

e. Li ka estoke dirèkteman nan yon frijidè -80 ℃ pou konjelasyon, san yo pa ale nan pwosedi refwadisman ki pran tan (ekonomize tan, efò, ak lajan). Pa bezwen sèvi ak ☆ enstriman refwadisman pwograme, epi pa bezwen mete nan -196 ℃ nitwojèn likid.

f. Li ka jele in situ, tankou subclones nan selil hybridoma, ki ka twouve redwi kantite travay epi evite kontaminasyon.
konjelasyon-medya-dmso
Konparezon inivèsèl selil konjelasyon medya ak twa pi wo a serom-gratis selil konjelasyon medya yo
Mwayen konjelasyon selil inivèsèlSolisyon lyofilizasyon selil san seromSerom-gratis ba DMSO selil kriyokonservasyon mwayenSerom-gratis DMSO-gratis selil kriyokonservasyon mwayen
Eleman prensipal laKi gen serom, DMSOSerom gratis, ak DMSO 10%Serom gratis, ak DMSO 5%Serom-gratis ak DMSO-gratis
Sitotoksisitesegondèsegondèba-
sekiriteba
Gwo risk pou kontaminasyon ak viris, mikobakteri, ak mikoplasm orijin bèt
segondè
Pa gen risk pou kontaminasyon ak viris, mwazi, ak mikoplasm orijin bèt
segondè
Pa gen risk pou kontaminasyon ak viris, mwazi, ak mikoplasm orijin bèt
segondè
Pa gen risk pou kontaminasyon ak viris, mwazi, ak mikoplasm orijin bèt
Kalite selil kriyoprezèveApwopriye pou jele selil ki gen seromObjektif jeneral
Apwopriye pou tout kalite kriyoprezèvasyon selil
Objektif jeneral
Apwopriye pou tout kalite kriyoprezèvasyon selil
Objektif jeneral
Apwopriye pou tout kalite kriyoprezèvasyon selil
Eta kwasans selil kilti san seromFasil chanje, fasil pou retounen soti nan eta a sispann nan eta a ranpaKenbe estati kilti sispansyonKenbe estati kilti sispansyonKenbe estati kilti sispansyon
Diferans pakètGwo diferans nan pakètPa gen diferans pakètPa gen diferans pakètPa gen diferans pakèt
Metòd operasyonEtap ankonbran, ki mande refwadisman pwograme ak konjelasyonFasil epi vit
Yon etap lè w konjele -80 ℃ frijidè
Fasil epi vit
Yon etap lè w konjele -80 ℃ frijidè
Fasil epi vit
Yon etap lè w konjele -80 ℃ frijidè
Ekipman konsèvasyonEgzijans segondè (azòt likid)Kondisyon ki ba (-80 ℃ frijidè)Kondisyon ki ba (-80 ℃ frijidè)Kondisyon ki ba (-80 ℃ frijidè)
Mikwo-konjelasyonFasil lanmò selil ak pousantaj siviv ki baGwo pousantaj siviv selilGwo pousantaj siviv selilGwo pousantaj siviv selil
Konjelasyon an plasPa posibSa posib epi fasil pou itilizeSa posib epi fasil pou itilizeSa posib epi fasil pou itilize

Sèvi ak medya konjelasyon selilè

konjelasyon-selil-dmso

Rekiperasyon selil kilti konjelasyon mwayen

Prensip debaz nan konjelasyon selil ak rekiperasyon se konjelasyon dousman ak dekonjle vit. Eksperyans yo te montre ke sa ka maksimize prezèvasyon viabilite selil yo.

Kounye a, konjelasyon selilè sèvi ak gliserin oswa dimethyl sulfoxide kòm yon ajan pwoteksyon. De sibstans sa yo ka amelyore pèmeyabilite nan manbràn selilè a nan dlo, plis konjelasyon dousman ka fè dlo a andedan selil la koule soti nan selil la, diminye fòmasyon nan kristal glas intraselilè, epi konsa diminye domaj nan selil ki te koze pa fòmasyon nan glas. kristal. Reanimasyon selil yo ta dwe fèt pa dekonjle rapid, ki ka asire ke kristal ekstraselilè yo fonn nan yon tan trè kout epi evite domaj nan selil akòz dekonjle dousman ki pèmèt dlo antre nan selil yo pou fòme rkristalizasyon entraselilè.

Cryopreservation selil se yon zouti teknik enpòtan pou kilti selil, entwodiksyon grenn, prezèvasyon grenn, ak eksperimantasyon lis. Li enpòtan pou jele selil prensipal yo san pèdi tan nan kilti selil ak etablisman liy. Nan pwosesis preparasyon antikò ibridòm monoklonal, konjelasyon an ak prezèvasyon grenn nan selil ibridòm, selil subklonal yo jwenn nan chak klonaj se souvan yon operasyon eksperimantal esansyèl. San yo pa etabli yon liy selil ki estab oswa yon liy selil antikò ki estab, pwosesis kilti selil la ka echwe nenpòt ki lè akòz kontaminasyon selil yo, pèt kapasite antikò pou sekrete oswa mitasyon jenetik, elatriye. San yo pa konjelasyon orijinal la. selil yo, eksperyans la pral pèdi akòz aksidan yo mansyone pi wo a.

A. Kisa konjelasyon selilè ye?

Lè selil yo grandi byen epi rezèv la depase demann lan, yo ka konsidere selil yo nan frizè epi estoke pou itilize pita. Lè tanperati a pi ba pase -70 ℃, aktivite anzimatik andedan selil la sispann ak aktivite metabolik la sispann, kidonk objektif depo alontèm yo ka reyalize. Lè selil yo konjelasyon, kòm tanperati a diminye, dlo a andedan ak deyò selil yo pral kristalize, ak kristal glas yo ki fòme ap lakòz destriksyon nan manbràn selilè ak òganèl, kidonk sa ki lakòz lanmò selil, espesyalman nan etap nan -20-0 ℃, kristal glas yo se tankou zegwi ak fasil lakòz domaj selilè.

B. Ki jan diminye domaj sa a kristal glas intraselilè?

Sèvi ak medya konjelasyon selil yo. Komen an mwayen konjelasyon kilti selil se gliserin oswa dimethyl sulfoxide (DMSO), ki ka byen vit antre nan manbràn selilè a antre nan selil la, bese pwen konjelasyon an, retade pwosesis la lyofilizasyon, ak ogmante pèmeyabilite nan manbràn selilè a, ogmante konsantrasyon nan iyon entraselilè, diminye fòmasyon an. nan kristal glas intraselilè, epi konsa reyalize objektif pwoteksyon selil yo.

C. Preparasyon selil yo pou kriyoprezèvasyon

Preparasyon nan solisyon lyofilizasyon (anjeneral 10% DMSO + 90% FBS ak mwayen kilti). Oswa mwayen konjelasyon selilè: serom: DMSO=7:2:1.

D. Cryopreservation operasyon

Chwazi selil ki gen bon viabilite ak yon dansite apeprè 80%, lè selil yo nan faz kwasans logaritmik epi yo pi apwopriye pou lyofilizasyon. Lyofilizasyon selil yo toujou divize an lyofilizasyon selil miray ak lyofilizasyon selil sispansyon.

Obsève sitiyasyon selil la anba mikwoskòp la. Si dansite selil la te wo epi mwayen an vin jòn, li te nesesè pou chanje likid la pou 4 èdtan anvan operasyon lyofilizasyon an. Apre selil yo fin grandi, yo te aspire mwayen an nan plat kilti a ak anpil atansyon ak yon zam, ak Lè sa a, yo te rense PBS yon fwa oswa de fwa, epi eseye aspire PBS rense a, epi yo te ajoute tripsin pou dijere selil yo. Dijesyon dwe peye atansyon sou kontwòl tan aksyon tripsin, dijesyon nan selil akòz chak selil ki respekte miray la diferan, ak tan dijesyon ap varye anpil. Trypsin dijesyon se yon operasyon delika, pa sèlman pou konplètman dijere selil yo epi kraze yo nan yon sispansyon sèl-selil pou vaksinasyon inifòm, men tou pou evite domaj selil grav ki te koze pa dijesyon twòp. Aktivite tripsin, etap dijesyon, ak reyaktif chak kliyan yo itilize diferan, kidonk tan dijesyon an pa ka konplètman espesifye, epi eksperyans kliyan an genyen. Pou etap dijesyon an, si kliyan an gen ti eksperyans ak selil la epi li pa ka kontwole avèk presizyon tan aksyon tripsin la, nou sijere kliyan an swiv operasyon sa a: premyèman, ajoute selil la apre tripsin la rechofe nan tanperati chanm, mete l nan 37. ℃ enkibatè, ak Lè sa a, kònen selil la chak 30 segonn, si selil la ka kònen apa (pa dijere jiskaske selil la konplètman k ap flote), sa vle di ke dijesyon selil la fini epi dijesyon an ka sispann. Apre dijesyon selil, melanje selil yo osi dousman ke posib pou pa pwodui twòp bul. Si 30 segonn mouche pa travay, rete tann 30 segonn epi repete operasyon an.

Apre dijesyon, ajoute 6-8 ML mwayen konplè pou mete fen nan dijesyon an, melanje selil yo, kolekte sispansyon selil la pa santrifujasyon nan 900-1000 rpm pou 3 min, jete supernatant la, ajoute mwayen lyofilizasyon prepare a, dousman soufle ak yon pipèt. pou fè selil yo omojèn, divize selil yo an tib lyofilizasyon, 1-1.5 ml pou chak tib, mete etikèt sou tib yo lyofilizasyon ak non selil yo, tan an lyofilizasyon ak operatè a, epi mete tib yo lyofilizasyon ak selil yo nan miray epè. bwat kim. Selil yo te mete nan yon bwat kim epè ki gen miray ranpa nan yon frijidè 4 ° C pou 10-30 min epi yo mete yo nan yon frijidè -80 ° C lannwit lan ansanm ak bwat kim la.

Ki jan yo achte medya konjelasyon selilè?

ANTITECK bay ekipman laboratwa, laboratwa consommables, ekipman manifakti nan sektè syans lavi yo.
Si ou enterese nan nou an medya konjelasyon selil yo oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.


    Recent Posts

    Nou itilize bonbon yo nan lòd yo ba ou eksperyans nan pi bon posib sou sit entènèt nou an. Lè ou kontinye sèvi ak sit sa a, ou dakò ak itilizasyon bonbon nou yo.
    Aksepte
    Règleman sou enfòmasyon prive