Medya konjelasyon selilè
Ki sa ki medya konjelasyon selilè?
Cryopreservation selil se yon metòd komen nan teknoloji kilti selil pou prezèvasyon ak depo alontèm nan selil yo. Medya konjelasyon selilè, yon solisyon ki dwe itilize pou selilè liofilizasyon, yo itilize pou prezèvasyon selil epi li jwe yon wòl kle nan acha, anbake, echanj ak livrezon selil yo. Se poutèt sa, li patikilyèman enpòtan pou chwazi yon bon mwayen konjelasyon kilti selil.
Mwayen konjelasyon kilti selil
Chèchè yo souvan bezwen jele selil yo epi prezève yo pou eksperyans ki vin apre oswa itilizasyon klinik. Pwosesis debaz la se jistis senp: friz selil yo tou dousman, mete tib kriyoprezèvasyon yo nan nitwojèn likid, epi dekonjle yo byen vit lè sa nesesè. Medya konjelasyon selilè sipòte selil yo epi anpeche kristal glas fòme. Sepandan, rezilta yo nan lè l sèvi avèk diferan medya konjelasyon ka trè diferan.
Medya konjelasyon selil konvansyonèl ajoute yon ajan pwoteksyon nan mwayen kilti a, ki se tipikman 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) ak 10% -90% serom bovin. Pwoblèm yo rankontre lè w konjele selil yo nan konvansyonèl yo solisyon lyofilizasyon selil yo rezime jan sa a.
a. Refwadisman pwosediral (4°C → -20°C → -80°C → nitwojèn likid). Etap sa a fatigan epi li pran anpil tan.
b. Ki gen sewòm ki gen yon risk ki pi wo pou kontaminasyon selilè (viris, mikobakteri, mikoplasm, elatriye).
c. Diferans nan pakèt ak kalite serom lakòz diferans nan pakèt nan medya konjelasyon selilè.
d. Konjelasyon azòt likid nesesè pou gwo bezwen konjelasyon.
e. Mikwovolim ak in situ (pa egzanp, plak ak pi) pa ka liofilize.
Twa pwodwi lyofilizasyon selil san serom sa yo se tout refwadisman san serom ak ki pa pwograme epi yo ka mete dirèkteman nan frijidè a -80 °C pou konjelasyon ak depo alontèm.
A. Solisyon liyofilizasyon selil san seròm
pwodwi karakteristik
a. San serom ak pwoteyin ki sòti nan bèt pou diminye kontaminasyon pa viris, mikobakteri, ak mikoplasm.
b. Fòmil espesyal la ka amelyore to sivivans selilè a ak to rekiperasyon an efektivman.
c. Pare pou itilize, pa bezwen preparasyon sou plas.
d. Kalite inivèsèl, ki apwopriye pou konjelasyon ak depo divès liy selil bèt ak moun ak selil prensipal yo.
e. Konpozisyon klè, pa gen varyasyon de pakèt a pakèt.
f. Pa gen refwadisman pwograme epi pa gen nitwojèn likid ki nesesè. Li ka mete dirèkteman nan -80 ℃ pou konjelasyon ak depo alontèm.
g. Mikwo-konjelasyon ak konjelasyon in situ (pa egzanp, konjelasyon selil ibridòm) posib, sa ki ekonomize tan ak efikasite.
Efè konjelasyon
| Liy selilè | Tan konjelasyon / (Mwa) | Pousantaj siviv selil (%) / (tanperati konjelasyon -80 ℃) |
|---|---|---|
| 293T | 12 | 95.58 |
| 4T1 | 12 | 96.25 |
| HUVEC | 12 | 88.14 |
| Hela | 12 | 93.18 |
B. Mwayen kriyoprezèvasyon selil san seròm ak ti DMSO
pwodwi karakteristik
a. Segondè sekirite, pa gen sewòm, ak engredyan ki sòti nan bèt, ti posiblite kontaminasyon pa viris, mikobakteri, ak mikoplasm. Pi bon konsistans kalite pwodwi de pakèt an pakèt.
b. DMSO ki ba ak 5% DMSO (v/v), ki diminye anpil efè toksik potansyèl yo sou selil yo.
c. Segondè viabilité selilè san okenn diferans nan pakèt yo.
d. Fòmilasyon likid konplètman liofilize, pare pou itilizasyon dirèk, pratik e senp. Li ka estoke dirèkteman nan yon frijidè -80 ℃ pou konjelasyon ak depo san yo pa bezwen pase nan pwosesis refwadisman pwograme ki pran anpil tan (ekonomize tan, efò ak lajan).
e. Li ka konjele in situ, tankou souklon selil ibridòm, sa ki ka diminye anpil kantite travay epi evite kontaminasyon.
Efè konjelasyon
| Liy selilè | Tan konjelasyon / (Mwa) | Konparezon A Pousantaj siviv selil (%) | Konparezon B Pousantaj siviv selil (%) | Pousantaj siviv selil (%) |
|---|---|---|---|---|
| 3T3 | 1 | 86 | 89 | 97 |
| 293E | 1 | 85 | 86 | 93 |
| 293F | 1 | 85 | 85 | 92 |
C. Mwayen kriyoprezèvasyon selil san serom san DMSO
pwodwi karakteristik
a. Segondè sekirite, pa gen sewòm, ak engredyan ki sòti nan bèt, ti posiblite kontaminasyon pa viris, mikobakteri, ak mikoplasm. Pi bon konsistans kalite pwodwi de pakèt an pakèt.
b. Pa gen DMSO, pa gen okenn efè toksik potansyèl sou selil yo.
c. Segondè viabilité selilè san okenn diferans nan pakèt yo.
d. Fòmilasyon solisyon liofilizasyon konplè, ka itilize dirèkteman, pratik e senp.
e. Li ka estoke dirèkteman nan yon frijidè -80 ℃ pou konjelasyon, san yo pa bezwen pase nan pwosedi refwadisman ki pran anpil tan an (ekonomize tan, efò, ak lajan). Pa bezwen itilize ☆ enstriman refwadisman pwograme, epi pa bezwen mete nan nitwojèn likid -196 ℃.
f. Li ka konjele in situ, tankou souklon selil ibridòm, sa ki ka diminye anpil kantite travay epi evite kontaminasyon.
Konparezon inivèsèl selil konjelasyon medya ak twa pi wo a serom-gratis selil konjelasyon medya yo
| Mwayen konjelasyon selil inivèsèl | Solisyon lyofilizasyon selil san serom | Serom-gratis ba DMSO selil kriyokonservasyon mwayen | Serom-gratis DMSO-gratis selil kriyokonservasyon mwayen | |
|---|---|---|---|---|
| Eleman prensipal la | Ki gen serom, DMSO | Serom gratis, ak DMSO 10% | Serom gratis, ak DMSO 5% | Serom-gratis ak DMSO-gratis |
| Sitotoksisite | segondè | segondè | ba | - |
| sekirite | ba Gwo risk pou kontaminasyon ak viris, mikobakteri, ak mikoplasm orijin bèt | segondè Pa gen risk pou kontaminasyon ak viris, mwazi, ak mikoplasm orijin bèt | segondè Pa gen risk pou kontaminasyon ak viris, mwazi, ak mikoplasm orijin bèt | segondè Pa gen risk pou kontaminasyon ak viris, mwazi, ak mikoplasm orijin bèt |
| Kalite selil kriyoprezève | Apwopriye pou jele selil ki gen serom | Objektif jeneral Apwopriye pou tout kalite kriyoprezèvasyon selil | Objektif jeneral Apwopriye pou tout kalite kriyoprezèvasyon selil | Objektif jeneral Apwopriye pou tout kalite kriyoprezèvasyon selil |
| Eta kwasans selil kilti san serom | Fasil chanje, fasil pou retounen soti nan eta a sispann nan eta a ranpa | Kenbe estati kilti sispansyon | Kenbe estati kilti sispansyon | Kenbe estati kilti sispansyon |
| Diferans pakèt | Gwo diferans nan pakèt | Pa gen diferans pakèt | Pa gen diferans pakèt | Pa gen diferans pakèt |
| Metòd operasyon | Etap ankonbran, ki mande refwadisman pwograme ak konjelasyon | Fasil epi vit Yon etap lè w konjele -80 ℃ frijidè | Fasil epi vit Yon etap lè w konjele -80 ℃ frijidè | Fasil epi vit Yon etap lè w konjele -80 ℃ frijidè |
| Ekipman konsèvasyon | Egzijans segondè (azòt likid) | Kondisyon ki ba (-80 ℃ frijidè) | Kondisyon ki ba (-80 ℃ frijidè) | Kondisyon ki ba (-80 ℃ frijidè) |
| Mikwo-konjelasyon | Fasil lanmò selil ak pousantaj siviv ki ba | Gwo pousantaj siviv selil | Gwo pousantaj siviv selil | Gwo pousantaj siviv selil |
| Konjelasyon an plas | Pa posib | Sa posib epi fasil pou itilize | Sa posib epi fasil pou itilize | Sa posib epi fasil pou itilize |
Sèvi ak medya konjelasyon selilè
Rekiperasyon selil kilti konjelasyon mwayen
Prensip debaz nan konjelasyon selil ak rekiperasyon se konjelasyon dousman ak dekonjle vit. Eksperyans yo te montre ke sa ka maksimize prezèvasyon viabilite selil yo.
Kounye a, konjelasyon selilè sèvi ak gliserin oswa dimethyl sulfoxide kòm yon ajan pwoteksyon. De sibstans sa yo ka amelyore pèmeyabilite nan manbràn selilè a nan dlo, plis konjelasyon dousman ka fè dlo a andedan selil la koule soti nan selil la, diminye fòmasyon nan kristal glas intraselilè, epi konsa diminye domaj nan selil ki te koze pa fòmasyon nan glas. kristal. Reanimasyon selil yo ta dwe fèt pa dekonjle rapid, ki ka asire ke kristal ekstraselilè yo fonn nan yon tan trè kout epi evite domaj nan selil akòz dekonjle dousman ki pèmèt dlo antre nan selil yo pou fòme rkristalizasyon entraselilè.
Cryopreservation selil se yon zouti teknik enpòtan pou kilti selil, entwodiksyon grenn, prezèvasyon grenn, ak eksperimantasyon lis. Li enpòtan pou jele selil prensipal yo san pèdi tan nan kilti selil ak etablisman liy. Nan pwosesis preparasyon antikò ibridòm monoklonal, konjelasyon an ak prezèvasyon grenn nan selil ibridòm, selil subklonal yo jwenn nan chak klonaj se souvan yon operasyon eksperimantal esansyèl. San yo pa etabli yon liy selil ki estab oswa yon liy selil antikò ki estab, pwosesis kilti selil la ka echwe nenpòt ki lè akòz kontaminasyon selil yo, pèt kapasite antikò pou sekrete oswa mitasyon jenetik, elatriye. San yo pa konjelasyon orijinal la. selil yo, eksperyans la pral pèdi akòz aksidan yo mansyone pi wo a.
A. Kisa konjelasyon selilè ye?
Lè selil yo grandi byen epi rezèv la depase demann lan, yo ka konsidere selil yo nan frizè epi estoke pou itilize pita. Lè tanperati a pi ba pase -70 ℃, aktivite anzimatik andedan selil la sispann ak aktivite metabolik la sispann, kidonk objektif depo alontèm yo ka reyalize. Lè selil yo konjelasyon, kòm tanperati a diminye, dlo a andedan ak deyò selil yo pral kristalize, ak kristal glas yo ki fòme ap lakòz destriksyon nan manbràn selilè ak òganèl, kidonk sa ki lakòz lanmò selil, espesyalman nan etap nan -20-0 ℃, kristal glas yo se tankou zegwi ak fasil lakòz domaj selilè.
B. Kijan pou diminye domaj kristal glas entraselulè sa a?
Sèvi ak medya konjelasyon selil yo. Komen an mwayen konjelasyon kilti selil se gliserin oswa dimethyl sulfoxide (DMSO), ki ka byen vit antre nan manbràn selilè a antre nan selil la, bese pwen konjelasyon an, retade pwosesis la lyofilizasyon, ak ogmante pèmeyabilite nan manbràn selilè a, ogmante konsantrasyon nan iyon entraselilè, diminye fòmasyon an. nan kristal glas intraselilè, epi konsa reyalize objektif pwoteksyon selil yo.
C. Preparasyon selil yo pou kriyoprezèvasyon
Preparasyon nan solisyon lyofilizasyon (anjeneral 10% DMSO + 90% FBS ak mwayen kilti). Oswa mwayen konjelasyon selilè: serom: DMSO=7:2:1.
D. Operasyon kriyoprezèvasyon
Chwazi selil ki gen bon viabilite ak yon dansite apeprè 80%, lè selil yo nan faz kwasans logaritmik epi yo pi apwopriye pou lyofilizasyon. Lyofilizasyon selil yo toujou divize an lyofilizasyon selil miray ak lyofilizasyon selil sispansyon.
Obsève estati selil yo anba mikwoskòp la. Si dansite selilè a te wo epi medyòm nan te vin jòn, li te nesesè pou chanje likid la pandan 4 èdtan anvan operasyon liofilizasyon an. Apre selil yo te fin grandi nèt, medyòm ki nan plat kilti a te aspire avèk anpil atansyon ak yon zam, epi answit rense PBS yon fwa oubyen de fwa, epi eseye aspire PBS ki te rense a, epi ajoute tripsin pou dijere selil yo. Dijesyon an dwe peye atansyon sou kontwòl tan aksyon tripsin lan, dijesyon selil yo akòz chak selil ki kole sou miray la diferan, epi tan dijesyon an ap varye anpil. Dijesyon tripsin se yon operasyon delika, pa sèlman pou dijere selil yo nèt epi kraze yo an yon sispansyon yon sèl selil pou yon inokilasyon inifòm, men tou pou evite domaj selil grav ki koze pa dijesyon twòp. Aktivite tripsin, etap dijesyon yo, ak reyaktif chak kliyan itilize yo diferan, kidonk tan dijesyon an pa ka konplètman presize, epi eksperyans kliyan an gen priyorite. Pou etap dijesyon an, si kliyan an pa gen anpil eksperyans ak selil la epi li pa ka kontwole tan aksyon tripsin lan avèk presizyon, nou sijere kliyan an swiv operasyon sa a: premyèman, ajoute selil la apre tripsin lan fin chofe nan tanperati chanm, mete l nan 37 ℃. kouveuz, epi soufle selil la chak 30 segonn, si selil la ka soufle an miyèt moso (pa dijere jiskaske selil la fin flote nèt), sa vle di dijesyon selil la fini epi yo ka fini dijesyon an. Apre dijesyon selil la, melanje selil yo dousman otank posib pou pa pwodui twòp ti boul. Si 30 segonn soufle pa mache, tann 30 segonn epi repete operasyon an.
Apre dijesyon, ajoute 6-8 ML mwayen konplè pou mete fen nan dijesyon an, melanje selil yo, kolekte sispansyon selil la pa santrifujasyon nan 900-1000 rpm pou 3 min, jete supernatant la, ajoute mwayen lyofilizasyon prepare a, dousman soufle ak yon pipèt. pou fè selil yo omojèn, divize selil yo an tib lyofilizasyon, 1-1.5 ml pou chak tib, mete etikèt sou tib yo lyofilizasyon ak non selil yo, tan an lyofilizasyon ak operatè a, epi mete tib yo lyofilizasyon ak selil yo nan miray epè. bwat kim. Selil yo te mete nan yon bwat kim epè ki gen miray ranpa nan yon frijidè 4 ° C pou 10-30 min epi yo mete yo nan yon frijidè -80 ° C lannwit lan ansanm ak bwat kim la.
Kijan pou achte medya pou konjelasyon selilè?
Si ou enterese nan nou an Medya konjelasyon selilè oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay info@antiteck.com, nou pral reponn ou pi vit ke posib.