Catalogue: Ekipman pou Elisa Kit Faktori
ELISA, ke yo rele tou anzim-lye immunosorbent esè, se yon metòd komen pou detèminasyon an quantitative nan kontni an nan pwoteyin sib divès kalite nan likid kò.
Reyaksyon kolorimetrik li pèmèt pou analiz kalitatif oswa quantitative, lè l sèvi avèk HRP anzim-catalysed TMB, reyaksyon an pwodui yon solisyon imine ble, ak adisyon a nan yon solisyon revokasyon transfòme kasyon ble a nan yon biphenylquinone jòn.
Anplis ble ak jòn komen yo, kèk koulè etranj ak divès parèt pandan eksperyans ELISA. Dèyè chak koulè, gen yon siyifikasyon espesyal. Apre sa, nou pral analize sekrè koulè ki kache nan "aparans" ak "pwodiksyon" ELISA.
Gen kèk eleman nan ELISA twous pral gen yon koulè wouj / woz akòz adisyon nan ajan pwoteksyon espesyal, tankou yon seri sèten nan dilusyon konjige anzim ak konsantre. antikò biotinilate. Reyaktif koulè sa a fè nòmalman epi yo ta dwe itilize avèk konfyans selon kondisyon fonksyònman ki nan enstriksyon yo.
Nan eksperyans ELISA, dilyan an gen konsèvatif epi nòmalman se yon likid klè, transparan ak san odè. Si dilyan an vin twoub, pran sant, epi pwodui presipitasyon, chans yo se ke li kontamine ak bakteri epi li pa rekòmande pou plis itilize.
In eksperyans tès imunosorban ki lye ak anzim TMB substrate solisyon ki pa estoke lwen limyè epi kite louvri pou twò lontan yo pral soksid pa anzim HRP nan lè a epi yo pral parèt limyè ble/ble. Itilizasyon dirèk nan sikonstans sa yo ap mennen nan fo rezilta pozitif. Se poutèt sa, li pa rekòmande pou kontinye itilize solisyon TMB ki te vin ble.
Nan yon nòmal Eksperyans ELISA, reyaksyon an fini lè yon gradyan klè ble parèt nan kat premye pwi makè a apre enkubasyon ak solisyon substrate la. Sepandan, lè konsantrasyon nan enkubasyon HRP anzim konjige solisyon k ap travay la twò wo oswa konsantrasyon echantiyon an pi wo pase ranje deteksyon an, pi wo 1-2 pwi gradyan yo oswa pi echantiyon nan koub estanda a ka parèt vèt fonse oswa ble fonse.
Apre echantiyon vèt fonse a fini reyaksyon an, valè OD li nan 450 nm ka pi ba pase aktyèl la; koub kalibrasyon an ble fonse yo pral twò pre valè gradyan OD a yo dwe ekipe pou jwenn yon koub kalibrasyon ki valab epi byen kalkile konsantrasyon echantiyon an.
Rekòmandasyon
1. Fè egzateman kontwole tanperati enkubasyon ak tan nan chak etap epi prepare solisyon an k ap travay konjige HRP anzim dapre enstriksyon yo.
2. Pandan faz devlopman koulè, kontwole tan devlopman koulè pa aparans yon gradyan ble diferan nan kat premye pwi yo.
3. Echantiyon ki gen yon konsantrasyon twò wo bezwen dilye nan seri deteksyon twous la anvan detèminasyon an.
Rezon posib pou koulè jòn rezilta eksperyans ELISA yo
Metòd konpetisyon ELISA opere dapre metòd sandwich: de prensip yo diferan ak etap operasyon yo diferan, tanpri peye atansyon sou distenksyon an.
Move lave: souke plak la twò pre bokit fatra a, sa ki lakòz likid tounen Splash; souke plak la pa sèk, sa ki lakòz rezidi likid oswa koule nan lòt pwi; lave lè chak byen pa enjekte ase solisyon lave, oswa kantite lave pa ase; twòp kontaminasyon likid debòde; tan imèsyon an twò kout.
Move depo nan chromogen, oswa enkubasyon san pwoteksyon limyè, sa ki lakòz devlopman koulè ki pa espesifik.
Tanperati enkubasyon twò wo, oswa tan enkubasyon twò lontan.
Melanje oswa sibstitisyon diferan konpozan twous, sa ki lakòz efè matris oswa adsorption ki pa espesifik, ki mennen nan fo rezilta pozitif.
Apre lekti yo te kalkile, li te jwenn ke anfòm koub estanda a te bon, men echantiyon OD a depase maksimòm OD nan koub estanda a, ki endike ke echantiyon an toujou bezwen dilye oh.
Apre yo fin ajoute solisyon an revokasyon, likid la nan pwi plak ELISA yo vin nwa, oswa yo pwodui presipitasyon nwa.
Kòz ki posib
HRP konsantrasyon anzim twò wo: lè w ap prepare solisyon an k ap travay anzim HRP, asire ke volim nan kalkil ak preparasyon egzat, epi lave plak la dapre volim lave, tan ak kantite fwa nan enstriksyon yo.
Konsantrasyon endikatè a nan echantiyon an twò wo epi echantiyon an toujou bezwen dilye.
Konsantrasyon nan asid silfirik nan solisyon an revokasyon twò wo oswa gate: solisyon an revokasyon se 1M H2SO4, melanje ak konsantrasyon twò wo nan asid silfirik ka mennen nan reyaksyon charring.
