Sistèm HPLC
Ki sa ki sistèm HPLC?
Sistèm chromatografi likid segondè-pèfòmans (sistèm HPLC) se yon enstriman laboratwa ki aplike prensip segondè-pèfòmans likid chromatografi. Li se sitou aplike nan analize konpoze òganik ak yon gwo pwen bouyi ki pa temèt, enstab pa chalè, ak gwo pwa molekilè.
Kwomatografi likid segondè-pèfòmans (HPLC) se yon branch enpòtan nan kwomatografi. Li gen yon pakèt aplikasyon epi li pa limite pa volatilité ak estabilite tèmik nan analit yo. Prèske tout konpoze, ki gen ladan gwo pwen bouyi, polè, konpoze iyonik, ak makromolekil, ka analize ak detèmine pa HPLC, kidonk fè moute pou enpèfeksyon yo nan gaz chromatografi. Apeprè 20% nan konpoze òganik li te ye yo ka analize pa gaz chromatografi, pandan y ap 80% bezwen analize pa segondè-pèfòmans likid chromatografi. HPLC karakterize pa efikasite separasyon segondè, vitès analiz rapid, bon sansiblite deteksyon, ak kapasite nan analize ak separe tèmik enstab sibstans ki sou fizyolojik aktif ak gwo pwen bouyi ki pa ka vaporize. HPLC se lajman ki itilize nan syans lavi, rechèch anviwònman, rechèch pharmaceutique, syans manje, ak rechèch pharmaceutique.
Prensip HPLC
Prensip separasyon kwomatografi a se ke lè eleman yo fonn nan faz mobil la pase nan faz estasyonè a, akòz gwosè a diferan ak fòs nan aksyon an ak faz estasyon an, ki ka adsorption, distribisyon, esklizyon, afinite, ak retansyon diferan. tan nan faz estasyonè a, kidonk siksesif ap koule soti nan faz estasyonè a.
Kromatografi likid pèfòmans-wo se yon metòd ki baze sou klasik chromatografi likid kote likid yo itilize kòm faz mobil ak yon sistèm perfusion wo-presyon yo itilize pou ponpe faz mobil tankou solvang sèl ak diferan polarite oswa solvang melanje ak tanpon nan pwopòsyon diferan nan yon kolòn ekipe ak yon faz estasyonè trè efikas nan patikil trè byen. Lè w itilize metòd sa a, konpozan yo nan kolòn yo separe epi detektè a detekte yo, kidonk pèmèt analiz echantiyon an.
Dyagram HPLC
Konpozisyon sistèm HPLC
The Sistèm HPLC jeneralman konsiste de yon ponp kromatografik, echantiyonè, kolòn, detektè, ak sistèm pwosesis done. Pami yo, ponp kromatografik la, kolòn nan ak detektè a se konpozan kle yo. Anplis de sa, aparèy elisyon gradyan an, sou entènèt degazeur, echantiyon oto, pre-kolòn oswa kolòn pwoteksyon, kolòn kontwolè tanperati, ak sou sa, yo ka configuré selon bezwen enstriman HPLC modèn yo ak sistèm kontwòl mikwo-òdinatè pou kontwòl enstriman otomatik ak pwosesis done. Preparasyon Enstriman HPLC yo tou ekipe ak aparèy koleksyon otomatik fraksyon.
A. Ponp kromatografik
Ponp chromatografik se youn nan eleman ki pi enpòtan nan Sistèm HPLC. Ponp chromatografi yo divize an ponp presyon konstan ak ponp koule konstan dapre faktè a nan likid pwodiksyon konstan. Pèfòmans ponp yo dirèkteman afekte bon jan kalite a nan tout sistèm lan ak fyab nan rezilta analiz yo. Ponp chromatografi yo divize an ponp pneumatik ak ponp mekanik selon mòd operasyon an. Pami ponp mekanik yo, yo ka divize an ponp sereng vis kondwi, ponp piston sèl, ponp doub piston, ak ponp dyafram.
a. Konparezon pèfòmans diferan ponp presyon ki wo yo
| Non | Konstan vòltaj / konstan aktyèl | Batman kè | Ranplasman faz mobil | Elisyon gradyan | Resiklaj | Koute |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Ponp anplifikasyon chanm konpwesyon lè | Konstan vòltaj | Non | Enkonvenyans | De ponp obligatwa | Non | segondè |
| Vis kondwi ponp sereng | Constant aktyèl | Non | Enkonvenyans | De ponp obligatwa | Non | mwayen |
| Single piston ponp resipwòk | Constant aktyèl | Wi | Konvenyans | Wi | Wi | ba |
| Double piston ponp resipwòk | Constant aktyèl | Ti | Konvenyans | Wi | Wi | segondè |
| Ponp dyafram resipyan | Constant aktyèl | Wi | Konvenyans | Wi | Wi | mwayen |
B. Aparèy degazaj
Ti boul nan solisyon faz mobil la se akòz prezans oksijèn ki fonn oswa lè melanje. Yon fwa bul lè antre nan detektè a, yo pral parèt kòm pik bri byen file sou chromatogram la. Ti bul tou dousman akimile epi yo vin gwo bul, ki antre nan chemen an koule oswa kolòn ak ralanti to koule nan faz mobil la oswa lakòz to koule a vin enstab, sa ki lakòz yon debaz fluktue. Pou vin pi mal, yon fwa bul lè antre nan kolòn nan, li pran tan pou mete yo deyò. Nan deteksyon fliyoresans, oksijèn ki fonn kapab tou pasè fliyoresans. Gaz ki fonn yo ka lakòz tou oksidasyon kèk echantiyon oswa chanje pH solisyon an. A pwezan, hors-liy à oscillation dégazage, en inert gaz bulle purge dégazage, ak online vakyòm dégazage abityèlman te itilize pou dégazer faz mobil chromatographie likid.
C. Aparèy elisyon gradyan
HPLC disponib nan tou de elisyon izokratik ak gradyan. Elisyon izokratik se kenbe konpozisyon faz mobil la konstan pandan menm sik analiz la epi li apwopriye pou echantiyon ki gen yon ti kantite konpozan ak ti diferans nan pwopriyete yo. Elisyon gradyan se kontwole konpozisyon faz mobil lan, tankou polarite, fòs iyonik, ak pH sòlvan an, nan yon sik analiz epi li itilize pou echantiyon konplèks ak yon gwo kantite konpozan ak pwopriyete diferan. Avantaj ki genyen nan sèvi ak elisyon gradyan yo se pi kout tan analiz, pi bon separasyon, amelyore fòm pik, ak pi wo sansiblite deteksyon, pandan y ap dezavantaj la se ke li souvan lakòz derive debaz ak diminye repwodiksyon. Elisyon gradyan ki gen de solvang ka melanje nan nenpòt degre, sa ki lakòz yon varyete pwofil elisyon, sètadi lineyè-gradyan, gradyan konkav, gradyan konvèks, ak gradyan etap.
D．Sampler
Sistèm HPLC yo anjeneral ekipe ak yon valv piki sis-fason. Metòd piki tiyo a sis-fason gen de kalite: metòd likid pasyèl chaje ak metòd ranpli likid.
a. Metòd enjeksyon chaj pasyèl
Volim nan piki ta dwe pa plis pase 50% (jiska 75%) nan volim nan bag la quantification epi mande pou chak volim piki yo dwe egzat ak idantik. Se presizyon ak repetibilite nan metòd sa a nan piki detèmine pa konpetans nan echantiyon an sereng, ak fasil yo pwodwi gaye nan pik ki te koze pa piki a.
b. Metòd chajman likid konplè pou enjeksyon
Volim piki a ta dwe pa mwens pase 5 ~ 10 fwa volim nan bag la quantification (omwen 3 fwa), konsa tankou konplètman ranplase faz mobil nan bag la, elimine efè miray la epi asire presizyon ak repetibilite nan piki a. .
E. Sistèm separasyon
Sistèm separasyon an gen ladan kolòn nan, kolòn gad la, ak chanm tanperati kolòn nan.
Kromatografi se yon mwayen separasyon ak analiz. Separasyon se nwayo teknik la, kidonk kolòn nan, ki responsab separasyon an, se kè sistèm kromatografik la. Yon kolòn kromatografik konsiste de yon tib kolòn, yon bouchon presyon, yon ferul (bag sele), yon plak tamiz (filtre plak), jwenti, vis, elatriye. Anbalaj kromatografik la se patikil materyèl yo, anjeneral patikil esferik ki gen gwosè 5-10 patikil, ki itilize pou ranpli kolòn nan apre pwosesis preparasyon an. Kolòn kromatografik yo ka divize an kalite analitik ak preparatif selon itilizasyon yo, epi espesifikasyon gwosè yo diferan tou.
Fonksyon an nan kolòn nan pwoteksyon se anpeche kontaminasyon an nan kolòn nan pa enpurte yo fòtman adsorbed, konsa pwolonje lavi a nan kolòn nan. Pou diferan kalite kolòn, yo ta dwe chwazi kolòn pwoteksyon yo ak anbalaj ki koresponn lan. Peye atansyon sou dat ekspirasyon nwayo kolòn lan, ki ta dwe ranplase regilyèman.
Objektif chanm tanperati kolòn lan se kenbe yon tanperati konstan nan kolòn nan pou fè pou evite chanjman nan tan retansyon ak asire estabilite nan separasyon an.
F. Detektè
Detektè a se yon aparèy ki itilize pou kontwole kontinyèlman konpozisyon ak chanjman kontni efluan an apre separasyon pa kolòn nan epi li se youn nan twa eleman kle nan. Enstriman HPLC. Detektè a nan HPLC mande pou sansiblite segondè, bri ki ba, lajè ranje lineyè, bon repetibilite, ak yon pakèt aplikasyon.
G. Sistèm tretman done
Operasyon yo nan kolekte, estoke, montre, enprime, ak tretman done tès yo pou separasyon, preparasyon, oswa idantifikasyon echantiyon yo ka fèt kòrèkteman se fonksyon yo nan sistèm nan pwosesis done.
2. HPLC kont FPLC
ki sa kwomatografi FPLC?
FPLC ke yo rele tou chromatografi likid pwoteyin vit. Prensip FPLC sanble ak sa kwomatografi likid segondè pèfòmans. Li se yon modèn chromatografi likid devlope pa entwodwi teyori gaz chromatografi soti nan klasik kolòn chromatografi likid, ak refòme kò faz la ak yon ponp perfusion wo-presyon, detektè segondè sansib, aparèy elisyon gradyan, aparèy koleksyon otomatik, ak mikwo-ordinateur.
Sistèm FPLC se ki fèt espesyalman pou separasyon pwoteyin, peptides, ak polinukleotid, ki se yon inovasyon enpòtan nan FPLC nan dènye ane yo. Li pa sèlman kenbe karakteristik sa yo nan HPLC tankou rezolisyon rapid ak segondè, men tou li gen karakteristik sa yo nan kapasite gwo kolòn, efikasite rekiperasyon segondè, ak mwens dezaktivasyon nan makromolekil byolojik. Se poutèt sa, li te lajman itilize nan separasyon an nan pwoteyin, peptides, ak oligonukleotid nan dènye ane yo.
Resanblans ak diferans ki genyen ant sistèm HPLC ak sistèm FPLC
| Resanblans | Diferans | Nouvo Aplikasyon pou Travay | |
|---|---|---|---|
| HPLC | Tou de yo ekipe ak ponp perfusion, detektè trè sansib, aparèy elisyon gradyan, aparèy koleksyon otomatik, ak kontwòl òdinatè, ak tou de yo karakterize pa rapidite, rezolisyon segondè, ak efikasite separasyon segondè. | a. Sistèm kanalizasyon HPLC a sitou fèt an metal. b. Faz mobil kondwi pa ponp resipwòk oswa ponp dyafram. c. Li karakterize pa presyon ki wo, ti kolòn anndan dyamèt, ak gwo presizyon analyse. d. Pousantaj maksimòm koule anjeneral pa depase 20 mL / min (kèk HPLC preparasyon ka rive nan 300 mL / min). e. Pafwa mande pou itilize yon sèten konsantrasyon nan sòlvan òganik, epi li apwopriye pou deteksyon mikwosanp oswa preparasyon ti kantite pirifikasyon. | HPLC ka analize molekil molekil mas molekilè ki ba, ki ba molekil molekil, segondè molekil òganik (ki gen ladan polè ak ki pa polè), konpoze iyonik inòganik, ak byomolekil tèmik enstab. |
| FPLC | a. Sistèm kanalizasyon FPLC konpoze de tib plastik ki reziste presyon ki wo. b. Faz mobil lan sitou kondwi pa yon ponp plonje. c. Li gen karakteristik presyon mwayen ak ba ak gwo dyamèt enteryè kolòn. d. Ranje pousantaj koule 0-100 mL / min (tout maksimòm koule jiska 1,000 mL / min). e. Presizyon analyse a pa osi wo ke HPLC, epi yo itilize sèlman solisyon sèl inòganik konvansyonèl yo. f. Li apwopriye pou pirifikasyon gwo echèl echantiyon yo. | FPLC fèt espesyalman pou separasyon ak pirifikasyon nan pwoteyin, peptides ak polinukleotid. |
Kijan pou achte yon sistèm HPLC?
Si ou enterese nan nou an Sistèm HPLC oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay info@antiteck.com, nou pral reponn ou pi vit ke posib.