Vire Kolòn
Catalogue: Vire Kolòn
Ki sa ki kolòn vire?
Kolòn vire yo ka itilize pou fè ekstraksyon ADN/RNA ak rafineman divès kalite materyèl. La vire kolòn gen yon résine echanj anyon ak kation. Nan reyaksyon an echanj iyon, kasyon (tankou Na +) nan dlo a transfere nan résine a, pandan y ap yon H + echanjeur sou résine a echanj iyon transfere nan dlo a. Pwosesis transfere Na + soti nan dlo a nan résine a se pwosesis ranplasman ion. Ak pwosesis la nan echanj H + sou résine a pou dlo yo rele pwosesis la liberasyon. Kidonk, kòm yon rezilta nan pwosesis ranplasman ak libere, Na + ak H + echanj kote, epi yo rele chanjman sa a echanj ion. Menm jan an tou, résine negatif deplase OH- pou pwodwi H2O. Echanj résine karakterize pa gwo kapasite echanj, ba rezistans koule dlo, segondè fòs mekanik, ak bon estabilite chimik. An menm tan an, echanj résine gen yon reyaksyon revèsib echanj, ki fasilite rejenerasyon ak seleksyon an nan divès adsorption ion reyalize objektif pou yo retire sèl ak pirifikasyon.
Vire-kolòn gen karakteristik sa yo nan operasyon senp, to rekiperasyon segondè, ak pèfòmans ki estab. Kounye a, vire kolòn yo popilè ak pifò laboratwa ak konpayi nan kay ak aletranje. Yo itilize manbràn silica kòm materyèl adsorban espesifik pou asid nikleyik pandan y ap rete lajman ki pa absòbe nan lòt materyèl byolojik. Sa a garanti rekiperasyon maksimòm ADN\RNA nan echantiyon an pandan y ap retire lòt enpurte.
Spin kolòn liy asanble
Pwodwi konpozan
a. Tib koleksyon likid
Tib koleksyon yo fèt ak polypropylène medikal nan volim 2ml ak 50ml.
b. Kolòn
Kolòn nan fèt ak polypropylène medikal-klas ak yon anba may oswa ak yon konektè epi li gen yon kapasite apeprè 1ml oswa 25ml.
c. Joint
Joint a se yon materyèl fib espesyal ki reziste asid ak baz ak pifò solvang òganik epi li pa adsorbe nan pifò biomolekil.
d. Manbràn filtre
Silikon espesyalman optimize oswa manbràn fib vè ki fèt ak matyè premyè enpòte ka adsorb molekil asid nikleyè nan limit maksimòm.
Karakteristik nan kolòn vire
A. Vire kolòn pou pirifye ADN.
B. Vire kolòn pou pirifye RNA.
C. Kapasite lyezon 45-50µg.
D. Gwosè fragman an se 65bp a 10kbp.
E. Fòmilasyon tampon yo apwopriye pou preparasyon plasmid an ti kantite, ekstraksyon jèl, ak clearance PCR.
F. la vire kolòn se plen ak yon gwo kantite manbràn fib vè, ki se yon teknik ki baze sou metòd la ekstraksyon fib vè pou ekstraksyon rapid nan asid nikleyik.
Aplikasyon nan kolòn vire
Vire kolòn ak tib koleksyon gen anpil itilizasyon nan laboratwa a, pou egzanp:
a. RNA pirifikasyon,
b. Ekstraksyon ADN plasmid,
c. Ekstraksyon ADN jenomik,
d. Pirifikasyon rapid pwodwi anplifikasyon PCR yo,
e. Rekiperasyon fil ADN ki soti nan jèl agaroz,
f. Izolasyon ADN espesifik nan melanj reyaksyon,
g. Pirifikasyon pwodwi PCR yo,
h. Pirifikasyon ADN oswa ARN yon sèl oswa doub fil nan enpurte tankou sèl, sòlvan, anzim, oswa pwoteyin,
i. Lòt moun.
Vire kolòn pou pirifye ADN
A. Prensip eksperimantal pou pirifikasyon ADN plasmid
Bromi etidyòm mare ak ADN lè li entegre tèt li ant baz yo, sa ki lakòz doub eliks la dewoule, sa ki ogmante longè ADN lineyè a. Pou konpanse, yo entwodui inite superelik nan ADN plasmid bouk fèmen an. Inite superelik yo ogmante konsiderableman, sa ki anpeche molekil bromi etidyòm nan kontinye entegre. Sepandan, molekil lineyè a pa limite epi li ka kontinye mare plis bromi etidyòm jiskaske li rive nan saturation (apeprè 1 molekil bromi etidyòm pou chak 2 pè baz). Dansite flotan molekil ADN lineyè ak bouk fèmen nan degre klori sezyòm ki gen kantite satire bromi etidyòm diferan akòz diferans nan kantite lank ki mare. Pandan plizyè ane, santrifijasyon ekilib gradyan klori sezyòm-bromi etidyòm te metòd ki pi pito pou prepare gwo kantite ADN plasmid. Sepandan, pwosesis sa a chè epi li pran anpil tan, epi yo te devlope anpil metòd altènatif pou objektif sa a. Metòd ki te gen ladan separasyon ADN plasmid ak ADN lame a lè l sèvi avèk kromatografi echanj iyon, kromatografi filtrasyon jèl, presipitasyon gradyèl, elatriye. Pami yo, metòd presipitasyon gradyèl polietilèn glikòl la se metòd ki pi souvan itilize a.
B. Kolòn pirifikasyon PCR
a. Pirifikasyon dirèk pwodwi a
Apre anplifikasyon PCR a fini, pwodwi a bezwen detekte pa elektwoforèz jèl agaroz. Nan ka yon sèl bann san lòt bann fo, pwodwi a ka pirifye dirèkteman. Metòd pirifikasyon komen yo se jèl silica. kolòn kwomatografi metòd, metòd pèl mayetik, ak lòt metòd pou pirifye.
b. Kolòn silik pou ekstraksyon ADN
Prensip kolòn vire manbràn silica
Ki sa ki adsorbe ADN nan pifò kolòn santrifujeur nan vire kolòn santrifijez la se yon manbràn silica, ki se yon kouch fib vè. Sifas li gen yon gwo kantite modifye Silisyòm hydroxyl gwoup (Si-OH). Gwoup hydroxyl silica a chaje negatif apre dissociasyon nan solisyon, ak Lè sa a, fòme yon pon elektrik ak iyon sèl chaje pozitivman ak ADN chaje negatif, ki se adsorption ADN, ki fè ADN doub-bloke nan yon sèl-bloke epi yo pa eluye pa solvang biomolekilè. Sepandan, li ka idrate pa tanpon dlo-idrosolubl ak Lè sa a, dwe refè quantitatively, konsa reyalize pirifikasyon ak separasyon.
Apre anplifikasyon PCR fini, eksepte fragman ADN, gen tou iyon, dNTP, primè, ak polymerase prezan nan sistèm reyaksyon an, ki pral afekte eksperyans klonaj ak sekans ki vin apre, kidonk pirifikasyon pwodwi yo se yon etap endispansab.
Spin kolòn pirifikasyon pwoteyin
Izolasyon ak pirifikasyon pwoteyin yo lajman itilize nan aplikasyon rechèch byochimik. Yon selil ekaryotik tipik ka gen plizyè milye pwoteyin diferan, kèk trè abondan ak kèk ki gen sèlman kèk kopi. Pou etidye yon pwoteyin patikilye, yo dwe premye pirifye pwoteyin sa a nan lòt pwoteyin ak molekil ki pa pwoteyin. Objektif la nan pirifikasyon pwoteyin se separe pwoteyin sib la soti nan tout eleman nan lysate selil la, pandan y ap toujou kenbe aktivite byolojik la ak entegrite chimik nan pwoteyin nan. Separasyon an ak pirifikasyon nan pwoteyin se yon travay difisil ak mande, epi ou bezwen chwazi metòd pou pirifye ki apwopriye a amelyore pite nan pwodwi yo jwenn pwoteyin dapre karakteristik sa yo nan pwoteyin.
Diferan sekans asid amine ak estrikti espasyal diferan pwoteyin mennen nan diferans nan pwopriyete fizik, chimik ak byolojik yo. Sèvi ak diferans ki genyen nan pwopriyete ant pwoteyin yo dwe izole ak lòt pwoteyin, yo ka fèt yon konplo pirifikasyon pwoteyin rezonab.
Pwosedi jeneral pou izolasyon ak pirifikasyon yon pwoteyin patikilye ka divize an twa etap: pre-tretman, klasman koryas, ak sibdivizyon.
Pre-tretman an
Pou izole epi pirifye yon pwoteyin, pwoteyin nan dwe premye libere nan tisi orijinal la oswa selil la nan yon eta idrosolubl epi rete nan eta natirèl orijinal li san pèt aktivite byolojik. Pou rezon sa a, materyèl bèt yo dwe premye retire nan tisi konjonktif ak gra yo, materyèl grenn yo dwe premye kale oswa menm retire nan kouch grenn nan pou evite kontaminasyon pa tanin ak lòt sibstans, epi grenn lwil yo ta dwe degrese premye ak yon sòlvan òganik ki gen yon pwen ebulisyon ki ba tankou etè. Apre sa, tisi yo ak selil yo kraze dapre metòd ki apwopriye a chwazi pou chak ka. Tisi ak selil bèt yo ka kraze ak pilon elektrik oswa omojeneize oubyen kraze ak tretman iltrason. Tisi ak selil plant yo, paske yo gen mi selilè ki konpoze de seluloz, emiseluloz, ak pektin, jeneralman bezwen yon metòd pou moulen ak sab kwatz oswa poud vè, epi ekstrè apwopriye ansanm oswa tretman ak selulaz kapab sèvi tou objektif la. Fragmantasyon selil bakteri yo pi pwoblèmatik paske tout skelèt mi selilè bakteri a se yon makromolekil ki sanble ak yon sak peptidoglikan ki konekte pa lyezon kovalan, ki trè solid. Metòd komen pou kraze mi selil bakteri yo enkli kraze ak iltrason, moulen ak sab, èkstruzyon anba gwo presyon, oswa tretman lizozim. Apre fragmentasyon tisi ak selil, yo ekstrè pwoteyin yo vle a lè yo chwazi yon tanpon ki apwopriye. Materyèl ensolubl tankou debri selilè yo retire pa santrifijasyon oswa filtrasyon.
Si pwoteyin vle a konsantre nan yon sèl fraksyon selilè, tankou nwayo a, kwomozòm, ribozom, oswa sitoplasm idrosolubl, yo ka separe pa santrifijasyon diferans epi yo kolekte fraksyon selilè kòm materyèl pou pwochen etap pirifikasyon an. Si pwoteyin vle a mare nan manbràn selilè a oswa òganèl manbràn, yo dwe depolymerize estrikti manbràn nan lè l sèvi avèk ultrason oswa dekontaminan ak Lè sa a, ekstrè ak medya apwopriye.
Separasyon koryas
Yon fwa yo jwenn ekstrè pwoteyin yo (pafwa melanje ak asid nikleyik, polisakarid, elatriye), yo ta dwe chwazi yon seri metòd apwopriye pou separe pwoteyin vle a soti nan lòt pwoteyin divès. Anjeneral, etap sa a nan separasyon fèt pa salinizasyon, presipitasyon pwen izoelektrik, ak separasyon gradye ak solvang òganik. Metòd sa yo karakterize pa senplisite ak gwo volim pwosesis, sa ki ka retire yon gwo kantite enpurte epi tou konsantre solisyon an pwoteyin. Gen kèk ekstrè pwoteyin yo gwo epi yo pa apwopriye pou konsantrasyon pa presipitasyon oswa sale, yo ka konsantre pa plis pase filtraj, filtraj jèl, friz-vakyòm siye, oswa lòt metòd.
Separasyon byen
Apre yo fin separe echantiyon an pa klasifikasyon koryas, volim nan jeneralman piti epi pi fò nan heteroproteins yo te retire. Pou pirifye plis, metòd chromatografik ki gen ladan filtraj jèl, chromatografi echanj iyon, chromatografi adsorption, ak chromatografi afinite yo jeneralman itilize. Elektwoforèz, ki gen ladan elektwoforèz bann zòn ak konsantre izoelektrik, ka chwazi tou kòm etap pirifikasyon final la si sa nesesè. Metòd yo itilize pou separasyon byen gradye yo jeneralman piti nan echèl men wo nan rezolisyon.
Kristalizasyon se etap final la nan separasyon pwoteyin ak pirifikasyon. Malgre ke pwosesis la kristalizasyon pa garanti ke pwoteyin nan se nesesèman omojèn, kristalizasyon ka fèt sèlman si yon pwoteyin se quantitatively dominan nan solisyon an. Pwosesis kristalizasyon an tèt li akonpaye pa yon degre pou pirifye, ak rkristalizasyon retire ti kantite pwoteyin ki bloke. Depi pa gen okenn pwoteyin denatire yo janm jwenn pandan kristalizasyon, kristalizasyon pwoteyin se pa sèlman yon siy pite, men tou yon endikatè fò ke pwodwi a se nan eta natirèl li yo.
Kolòn vire konsantratè pwoteyin
Metòd la nan kolòn vire pwoteyin refere a yon metòd kwomatografik kote yo itilize yon tanpon oswa sòlvan òganik kòm faz mobil epi yo itilize yon adsorban solid kòm faz estasyonè pou fè konpozisyon kolòn nan.
Spin kolòn asanble machin ak insert filtre
Ki jan yo achte kolòn vire?
Si ou enterese nan nou an Vire Kolòn oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay info@antiteck.com, nou pral reponn ou pi vit ke posib.