Vire Kolòn

Content
1. Ki sa ki kolòn vire?
2. Karakteristik nan kolòn vire
3. Aplikasyon nan kolòn vire
    3.1 Vire kolòn pou pirifye ADN
    3.2 Spin kolòn pwoteyin pirifikasyon
4. Ki jan yo achte kolòn vire?

Catalogue: Vire Kolòn

Kolòn vire yo ka itilize pou fè ekstraksyon ADN/RNA ak rafineman divès kalite materyèl. La vire kolòn gen yon résine echanj anyon ak kation. Nan reyaksyon an echanj iyon, kasyon (tankou Na +) nan dlo a transfere nan résine a, pandan y ap yon H + echanjeur sou résine a echanj iyon transfere nan dlo a. Pwosesis transfere Na + soti nan dlo a nan résine a se pwosesis ranplasman ion. Ak pwosesis la nan echanj H + sou résine a pou dlo yo rele pwosesis la liberasyon. Kidonk, kòm yon rezilta nan pwosesis ranplasman ak libere, Na + ak H + echanj kote, epi yo rele chanjman sa a echanj ion. Menm jan an tou, résine negatif deplase OH- pou pwodwi H2O. Echanj résine karakterize pa gwo kapasite echanj, ba rezistans koule dlo, segondè fòs mekanik, ak bon estabilite chimik. An menm tan an, echanj résine gen yon reyaksyon revèsib echanj, ki fasilite rejenerasyon ak seleksyon an nan divès adsorption ion reyalize objektif pou yo retire sèl ak pirifikasyon.

Vire-kolòn gen karakteristik sa yo nan operasyon senp, to rekiperasyon segondè, ak pèfòmans ki estab. Kounye a, vire kolòn yo popilè ak pifò laboratwa ak konpayi nan kay ak aletranje. Yo itilize manbràn silica kòm materyèl adsorban espesifik pou asid nikleyik pandan y ap rete lajman ki pa absòbe nan lòt materyèl byolojik. Sa a garanti rekiperasyon maksimòm ADN\RNA nan echantiyon an pandan y ap retire lòt enpurte.

Tib koleksyon yo fèt ak polypropylène medikal nan volim 2ml ak 50ml.

Kolòn nan fèt ak polypropylène medikal-klas ak yon anba may oswa ak yon konektè epi li gen yon kapasite apeprè 1ml oswa 25ml.

Joint a se yon materyèl fib espesyal ki reziste asid ak baz ak pifò solvang òganik epi li pa adsorbe nan pifò biomolekil.

Silikon espesyalman optimize oswa manbràn fib vè ki fèt ak matyè premyè enpòte ka adsorb molekil asid nikleyè nan limit maksimòm.

A. Vire kolòn pou pirifye ADN.

B. Vire kolòn pou pirifye RNA.

C. Kapasite obligatwa 45-50µg.

D. Gwosè fragman an se 65bp a 10kbp.

E. Fòmilasyon tanpon yo apwopriye pou preparasyon plasmid an ti kantite, ekstraksyon jèl, ak clearance PCR.

F. La vire kolòn se plen ak yon gwo kantite manbràn fib vè, ki se yon teknik ki baze sou metòd la ekstraksyon fib vè pou ekstraksyon rapid nan asid nikleyik.

Vire kolòn ak tib koleksyon gen anpil itilizasyon nan laboratwa a, pou egzanp:
a. RNA pirifikasyon,
b. Ekstraksyon ADN plasmid,
c. ekstraksyon ADN jenomik,
d. Pirifikasyon rapid nan pwodwi anplifikasyon PCR,
e. Rekiperasyon seksyon ADN nan jèl agaroz,
f. Izolasyon ADN espesifik nan melanj reyaksyon,
g. Pirifikasyon pwodwi PCR,
h. Pirifikasyon ADN oswa RNA yon sèl oswa doub-chachen nan enpurte tankou sèl, sòlvan, anzim, oswa pwoteyin,
mwen. Lòt moun.

Bromur Etidyòm mare nan ADN lè li mete tèt li ant baz, ki an vire lakòz doub helix la dewoule, ogmante longè ADN lineyè a. Pou konpanse, inite superhelical yo prezante nan ADN plasmid bouk fèmen. Inite superhelical yo ogmante konsiderableman, kidonk anpeche plis entegrasyon nan molekil bromur etidyòm. Molekil lineyè a, sepandan, pa limite epi li ka kontinye mare plis bromur etidyòm jiskaske saturation rive (apeprè 1 molekil bromur etidyòm pou chak 2 pè baz). Dansite flotan nan molekil ADN lineyè ak fèmen-bouk nan degre klori Sezyòm ki gen kantite satire nan bromur etidyòm diferan akòz diferans ki genyen nan kantite lank mare. Pandan plizyè ane, santrifujasyon ekilib gradyan klori sezyòm-etidyòm bromur te metòd chwa pou prepare gwo kantite ADN plasmid. Sepandan, pwosesis sa a se chè ak tan konsome, ak anpil metòd altènatif yo te devlope pou objektif sa a. Metòd ki enkli separasyon ADN plasmid ak ADN lame lè l sèvi avèk kwomatografi echanj iyon, kwomatografi filtraj jèl, presipitasyon gradye, elatriye.

Apre anplifikasyon PCR fini, pwodwi a bezwen yo dwe detekte pa elektwoforèz jèl agarose. Nan ka yon bann moun ki pa marye san lòt bann spurious, pwodwi a ka fè pirifye dirèkteman. Metòd pirifikasyon komen yo se metòd kolòn kwomatografi jèl silica, metòd mayetik pèl, ak lòt metòd pou pirifye.

Ki sa ki adsorbe ADN nan pifò kolòn santrifujeur nan centrifuge kolòn vire se yon manbràn silica, ki se yon kouch fib vè. Sifas li gen yon gwo kantite modifye Silisyòm hydroxyl gwoup (Si-OH). Gwoup hydroxyl silica a chaje negatif apre dissociasyon nan solisyon, ak Lè sa a, fòme yon pon elektrik ak iyon sèl chaje pozitivman ak ADN chaje negatif, ki se adsorption ADN, ki fè ADN doub-bloke nan yon sèl-bloke epi yo pa eluye pa solvang biomolekilè. Sepandan, li ka idrate pa tanpon dlo-idrosolubl ak Lè sa a, dwe refè quantitatively, konsa reyalize pirifikasyon ak separasyon.

Apre anplifikasyon PCR fini, eksepte fragman ADN, gen tou iyon, dNTP, primè, ak polymerase prezan nan sistèm reyaksyon an, ki pral afekte eksperyans klonaj ak sekans ki vin apre, kidonk pirifikasyon pwodwi yo se yon etap endispansab.

Izolasyon ak pirifikasyon pwoteyin yo lajman itilize nan aplikasyon rechèch byochimik. Yon selil ekaryotik tipik ka gen plizyè milye pwoteyin diferan, kèk trè abondan ak kèk ki gen sèlman kèk kopi. Pou etidye yon pwoteyin patikilye, yo dwe premye pirifye pwoteyin sa a nan lòt pwoteyin ak molekil ki pa pwoteyin. Objektif la nan pirifikasyon pwoteyin se separe pwoteyin sib la soti nan tout eleman nan lysate selil la, pandan y ap toujou kenbe aktivite byolojik la ak entegrite chimik nan pwoteyin nan. Separasyon an ak pirifikasyon nan pwoteyin se yon travay difisil ak mande, epi ou bezwen chwazi metòd pou pirifye ki apwopriye a amelyore pite nan pwodwi yo jwenn pwoteyin dapre karakteristik sa yo nan pwoteyin.

Diferan sekans asid amine ak estrikti espasyal diferan pwoteyin mennen nan diferans nan pwopriyete fizik, chimik ak byolojik yo. Sèvi ak diferans ki genyen nan pwopriyete ant pwoteyin yo dwe izole ak lòt pwoteyin, yo ka fèt yon konplo pirifikasyon pwoteyin rezonab.

Pwosedi jeneral pou izolasyon ak pirifikasyon yon pwoteyin patikilye ka divize an twa etap: pre-tretman, klasman koryas, ak sibdivizyon.

Pou izole ak pirifye yon pwoteyin, yo ta dwe premye lage pwoteyin nan tisi oswa selil orijinal la nan yon eta idrosolubl epi rete nan eta natirèl orijinal li san yo pa pèdi aktivite byolojik. Pou rezon sa a, materyèl bèt yo ta dwe premye retire nan tisi konjonktif ak gra, materyèl grenn yo ta dwe premye dwe kale oswa menm retire nan rad la grenn pou evite kontaminasyon pa tanen ak lòt sibstans, ak grenn lwil oliv ta dwe de preferans dwe degrese premye ak yon bouyi ki ba. pwen sòlvan òganik tankou etè. Lè sa a, tisi yo ak selil yo kraze dapre metòd ki apwopriye yo chwazi pou chak ka. Tisi bèt ak selil yo ka kraze ak mashers elektrik oswa homogenizers oswa kraze ak tretman ultrasons. Tisi plant ak selil yo, paske yo gen mi selil ki konpoze de seluloz, emizeluloz, ak pèktin, jeneralman mande pou yon metòd pou fanm k'ap pile ak sab kwatz oswa poud vè, ak ekstrè ki apwopriye ansanm oswa tretman ak selulaz ka sèvi tou objektif la. Fragmantasyon selil bakteri yo gen plis pwoblèm paske tout eskèlèt mi selil bakteri an se yon makromolekil peptidoglycan ki sanble ak sak ki konekte pa lyezon kovalan, ki trè difisil. Metòd komen pou kraze mi selil bakteri yo enkli ultrasons kraze, fanm k'ap pile ak sab, ekstrizyon wo-presyon, oswa tretman lizozim. Apre fwagmantasyon tisi ak selil yo, yo retire pwoteyin vle a lè w chwazi tanpon ki apwopriye a. Materyèl ensolubl tankou debri selil yo retire pa santrifujasyon oswa filtraj.

Si pwoteyin vle a konsantre nan yon sèl fraksyon selilè, tankou nwayo a, kwomozòm, ribozom, oswa sitoplasm idrosolubl, yo ka separe pa santrifijasyon diferans epi yo kolekte fraksyon selilè kòm materyèl pou pwochen etap pirifikasyon an. Si pwoteyin vle a mare nan manbràn selilè a oswa òganèl manbràn, yo dwe depolymerize estrikti manbràn nan lè l sèvi avèk ultrason oswa dekontaminan ak Lè sa a, ekstrè ak medya apwopriye.

Yon fwa yo jwenn ekstrè pwoteyin yo (pafwa melanje ak asid nikleyik, polisakarid, elatriye), yo ta dwe chwazi yon seri metòd apwopriye pou separe pwoteyin vle a soti nan lòt pwoteyin divès. Anjeneral, etap sa a nan separasyon fèt pa salinizasyon, presipitasyon pwen izoelektrik, ak separasyon gradye ak solvang òganik. Metòd sa yo karakterize pa senplisite ak gwo volim pwosesis, sa ki ka retire yon gwo kantite enpurte epi tou konsantre solisyon an pwoteyin. Gen kèk ekstrè pwoteyin yo gwo epi yo pa apwopriye pou konsantrasyon pa presipitasyon oswa sale, yo ka konsantre pa plis pase filtraj, filtraj jèl, friz-vakyòm siye, oswa lòt metòd.

Apre yo fin separe echantiyon an pa klasifikasyon koryas, volim nan jeneralman piti epi pi fò nan heteroproteins yo te retire. Pou pirifye plis, metòd chromatografik ki gen ladan filtraj jèl, chromatografi echanj iyon, chromatografi adsorption, ak chromatografi afinite yo jeneralman itilize. Elektwoforèz, ki gen ladan elektwoforèz bann zòn ak konsantre izoelektrik, ka chwazi tou kòm etap pirifikasyon final la si sa nesesè. Metòd yo itilize pou separasyon byen gradye yo jeneralman piti nan echèl men wo nan rezolisyon.

Kristalizasyon se etap final la nan separasyon pwoteyin ak pirifikasyon. Malgre ke pwosesis la kristalizasyon pa garanti ke pwoteyin nan se nesesèman omojèn, kristalizasyon ka fèt sèlman si yon pwoteyin se quantitatively dominan nan solisyon an. Pwosesis kristalizasyon an tèt li akonpaye pa yon degre pou pirifye, ak rkristalizasyon retire ti kantite pwoteyin ki bloke. Depi pa gen okenn pwoteyin denatire yo janm jwenn pandan kristalizasyon, kristalizasyon pwoteyin se pa sèlman yon siy pite, men tou yon endikatè fò ke pwodwi a se nan eta natirèl li yo.

Metòd la nan kolòn vire pwoteyin refere a yon metòd kwomatografik kote yo itilize yon tanpon oswa sòlvan òganik kòm faz mobil epi yo itilize yon adsorban solid kòm faz estasyonè pou fè konpozisyon kolòn nan.

Si ou enterese nan nou an vire kolòn oswa ou gen nenpòt kesyon, tanpri ekri yon imèl bay [imèl pwoteje], nou pral reponn ou pi vit ke posib.