ANTITECK - Ipprovdi Tagħmir tal-Lab, Awtomazzjoni Industrijali, Moulding Mediku u Soluzzjoni Turnkey.
tagħmir-bijoloġija-laboratorju

15 Mistoqsijiet Frekwenti f'Esperimenti ELISA

Posted fuq Ottubru 29, 2022 by Zeng YingELISA

introduzzjoni

esperiment ELISA prinċipju huwa sempliċi, inqas passi, proċess qasir, il-kit huwa relattivament faċli biex topera, in-novizzi sperimentali jista 'faċilment jibda. Madankollu, għalkemm l-esperiment jibda malajr, mhuwiex daqshekk faċli li tikseb riżultati sperimentali affidabbli. Sabiex tgħin aħjar l-esperiment, hawn se tkun imħassba dwar il-kits ELISA u kampjuni mistoqsijiet frekwenti huma organizzati kif ġej.

Katalgu: Tagħmir Għall-Elisa Kit Manufacturing

kits ELISA

Kits-ELISA
Kits-ELISA
ELISA washer, magna tal-kisi ELISA

1. Liema speċi jistgħu jiskopru l-kits ELISA?

Il-kurrent kits ELISA huma prinċipalment għall-bniedem, ġurdien u far; numru żgħir ta 'indikaturi jinvolvu speċi speċjali bħal xadina, fenek, ħanżir u tiġieġ.

Jekk il- Kit ELISA huwa msemmi b'punt speċifiku, dan ifisser li huwa speċifikament għal din l-ispeċi; jekk l-ebda speċi ma tkun speċifikata, dan ifisser li l-kit huwa universali fi ħdan l-ispeċi involuti (eż. bniedem, ġurdien, far, xadina, fenek, eċċ.). Għal speċi speċifiċi oħra, jekk jogħġbok ikkuntattja l-appoġġ tekniku biex tikkonferma l-adegwatezza tat-test.

2. Kemm jistgħu jiġu ttestjati kampjuni bil-kit ELISA 96T? Għandi bżonn nagħmel bjar duplikati?

Sabiex tiġi żgurata l-eżattezza tar-riżultati sperimentali, nirrakkomandaw li l-istandards u l-kampjuni jsiru f'bjar multipli, iżda ma jġiegħelx li l-esperiment ELISA għandu jsir f' bjar multipli / 3 bjar multipli, il-klijenti jistgħu jistabbilixxu l-bżonnijiet tagħhom stess skont l-esperiment tal-bir multipli.

Kurva tal-ImmarkarKampjunNumru ta' kampjuni ttestjati
L-ebda toqba kompostaL-ebda toqba komposta88
Agħmel toqba kompostL-ebda toqba komposta80
L-ebda toqba kompostaAgħmel toqba kompost44
Agħmel toqba kompostAgħmel toqba kompost40

3. In-numru ta 'bjar jista' jitnaqqas għal numru kbir ta 'kampjuni li jridu jiġu ttestjati?

Biex tiġi żgurata l-eżattezza tar-riżultati, mhux rakkomandat li jitnaqqas in-numru ta 'bjar.

4. Il-kit ELISA għandu jintuża diversi drabi, iżda l-kampjuni huma kbar, huwa possibbli li ssir kurva standard waħda biss?

Għalkemm il-passi tal-operazzjoni ta esperimenti ELISA huma l-istess, id-diversi fatturi li jinfluwenzaw se jinbidlu għal kull esperiment. Għalhekk, il-kurva standard għandha titfassal mill-ġdid għal kull esperiment biex jinkisbu riżultati ta 'skoperta aktar preċiżi u affidabbli.

Jekk għandek bżonn tagħmel esperimenti multipli, l-ogħla konċentrazzjoni tal-istandard wara x-xoljiment tista 'tinħażen f'kondizzjoni ta' -20 ℃ f'pakketti separati biex tevita l-iffriżar u t-tidwib ripetuti, u użata b'mod effettiv fi żmien nofs xahar.

5. X'inhi d-differenza bejn kits ta' riċerka ELISA u kits kliniċi ELISA?

Ir-reaġenti kliniċi huma approvati minn aġenziji awtorevoli, bħall-FDA, CFDA, eċċ. Ir-reaġenti tar-riċerka huma ġeneralment żviluppati mill-manifatturi nfushom u m'għandhomx għalfejn jiġu vverifikati minn istituzzjonijiet awtorevoli.

L-organizzazzjonijiet li jittrattaw prodotti dijanjostiċi kliniċi jeħtieġ li jiksbu l-Liċenzja tal-Intrapriża tan-Negozju tal-Apparat Mediku. Ir-reaġenti tar-riċerka m'għandhomx bżonn dan id-dokument.

Kitts kliniċi huma ġeneralment użati biss biex jittestjaw tip wieħed ta 'kampjun ta' sekrezzjoni bħal serum/plażma tal-bniedem. Kitts ta 'riċerka għandhom firxa ħafna usa' ta 'tipi ta' kampjuni u testijiet minn kits kliniċi. Madankollu, b'mod ġenerali, il-kwalità u l-istabbiltà tal-kits kliniċi huma aħjar minn kits xjentifiċi.

6. Il-kits ELISA fihom ingredjenti tossiċi u ta 'ħsara? Kemm huma sikuri l-kits?

Kits ELISA, ħlief għaż-żieda ta 'BSA bħala proteina protettiva, ma fihom l-ebda ingredjent ieħor ta' oriġini mill-annimali u jissodisfaw ir-rekwiżiti tal-protokoll ta 'bijosigurtà ta' Cartagena. Barra minn hekk, il-preservattiv tal-kit huwa proclin 300, li huwa inqas tossiku u sikur għall-ambjent.

7. Jistgħu jintużaw kits ELISA f'partijiet? Kif naħżen komponenti tar-reaġenti mhux użati?

Il-kits ELISA jistgħu jintużaw fi kwantitajiet differenti. L-istrixxi ta 'l-enżimi tagħna jistgħu jinqalgħu, sabiex tkun tista' tiddetermina n-numru ta 'strixxi li għandek bżonn għal kull esperiment u l-kontenut ta' kull komponent ta 'reaġent skond il-bżonnijiet sperimentali tiegħek.

L-istandards solubilizzati huma rrakkomandati li jinħażnu fl-ogħla konċentrazzjoni/lott prinċipali, maqsuma u maħżuna f'-20 ° C, jevitaw iffriżar u tidwib ripetuti, u użati b'mod effettiv fi żmien nofs xahar.

Is-soluzzjoni tax-xogħol tal-antikorpi bijotinilati u s-soluzzjoni tax-xogħol tal-konjugat tal-enżima HRP jeħtieġ li jiġu ppreparati u użati issa. Konċentrati mhux użati u komponenti oħra għandhom jinħażnu f'2 ~ 8 ℃/-20 ℃ rispettivament skont l-istruzzjonijiet fil-ħin, u jistgħu jinħażnu għal 6 xhur.

Kampjuni ELISA

ELISA-standard-kurva
ELISA-standard-kurva

8. X'tip ta 'tubu tal-ġbir tad-demm bil-vakwu għandu jintuża biex jiġbor kampjuni tal-plażma tas-serum f'ELISA?

Serum: Għal Testijiet ELISA, tubi tal-ġbir tad-demm mhux antikoagulanti/prokoagulanti huma meħtieġa

(ġeneralment tubi tal-ġbir tad-demm ħomor, isfar, b'kappa oranġjo)

Plażma: għal analiżi immunosorbenti marbuta mal-enżimi, tubi tad-demm b'antikoagulant. (ġeneralment tubi ħodor, b'kappa vjola)

Wara l-ġbir tal-kampjuni tal-ELISA, jekk l-assaġġ isir fi żmien ġimgħa, jista 'jinħażen f'1-2°C. Jekk ma tistax tiġi ttestjata fil-ħin, jekk jogħġbok agħtiha f'ammont li jintuża darba u ffriżaha f'-8 ° C (assaġġ fi żmien xahar) jew -20 ° C (assaġġ fi żmien 1 xhur) biex tevita l-iffriżar u t-tidwib ripetuti.

Qabel l-ittestjar, ħoll bil-mod il-kampjuni ffriżati u ċentrifuga biex jitneħħew il-preċipitati ġġenerati matul il-proċess tal-iffriżar u t-tidwib.

9. Kif tista 'tiġi evitata l-emolisi kemm jista' jkun meta tinġabar?

L-emolisi tista 'tkun ikkawżata minn varjetà ta' fatturi fiżikokimiċi u tossini. In vitro, l-emolisi tista 'tkun ikkawżata minn tħawwad qawwi mekkaniku, iffriżar krijoġeniku u triggers oħra. Biex jiġi evitat l-effett tal-emolisi fuq ir-riżultati tat-test, għandha tingħata attenzjoni.

Meta tiġbor id-demm ġol-vini, il-pressjoni tal-ippumpjar m'għandhiex tkun għolja wisq.

L-ammont ta 'demm miġbur f'ħin wieħed m'għandux ikun żgħir wisq.

Id-demm kollu miġbur m'għandux jitħawwad bil-qawwa.

Il-veloċità taċ-ċentrifugazzjoni m'għandhiex tkun għolja wisq.

Id-demm sħiħ miġbur għandu jiġi pproċessat fis-serum/plażma kemm jista 'jkun malajr u d-demm sħiħ m'għandux jiġi ffriżat jew imdewweb.

Jekk anestesija hija meħtieġa għall-ġbir tad-demm, għandhom jintużaw anestetiċi mingħajr effett emolitiku.

10. Kif għandu jitwettaq il-proċess ta '"iffriżar-tidwib ripetut" imsemmi fil-ġbir tal-kampjuni tat-tessuti/ċelluli?

Kampjuni tat-tessuti: wara t-tħin tat-tessut, poġġihom f'-80°C għal 1h/nitroġenu likwidu għal 0.5h, imbagħad poġġihom f'banju ta' l-ilma ta' 30°C b'ċaqliq żgħir biex tagħmilhom jinħall malajr, u rrepeti l-operazzjoni 1-2 darbiet .

Kampjuni taċ-ċelluli: iffriżar-ħoll 2-3 darbiet ripetutament skont il-passi tal-operazzjoni ta 'hawn fuq. Fil-każ ta 'proteini tal-membrana, l-ivvibrar jista' jsir b'mod xieraq, iżda t-temperatura u l-frekwenza tal-ivvibrar jeħtieġ li jiġu kkontrollati.

Huwa rakkomandat li jiżdiedu inibituri tal-protease mal-kampjun minn qabel. PMSF huwa rakkomandat f'każijiet ta' rutina.

11. Kif nista' niddetermina jekk kampjun ta' ELISA għandux bżonn jiġi dilwit jew ipproċessat mod ieħor?

Il-firxa ta 'skoperta tal-kit mhix l-istess bħall-firxa ta' konċentrazzjoni tal-analite fil-kampjun. Huwa rrakkomandat li tiġi stmata l-konċentrazzjoni tal-analite fil-kampjun permezz ta 'letteratura rilevanti qabel l-esperiment u tiġi ddeterminata l-konċentrazzjoni attwali tal-kampjun permezz ta' qabel l-esperiment.

F'każ ta' tipi ta' kampjuni ta' rutina, jista' jiġi kkonsultat appoġġ tekniku ELISA biex tinkiseb id-dilwizzjoni rakkomandata tal-kampjun u tirranġa għal ttestjar pre-sperimentali.

Jekk il-konċentrazzjoni tal-analite li trid titkejjel fil-kampjun hija għolja wisq jew baxxa wisq, agħmel dilwizzjoni jew konċentrazzjoni xierqa tal-kampjun.

Jekk il-konċentrazzjoni ta 'l-analite fil-kampjun hija ħafna aktar baxxa mil-limitu minimu ta' skoperta tal-kit, huwa rakkomandat li tagħżel kit aktar sensittiv għall-assaġġ.

12. X'għandek tagħmel b'kampjuni b'ħafna xaħam fl-esperimenti ELSIA?

Kampjuni b'ħafna xaħam fihom xaħam, mhux soluzzjoni omoġenja, jekk direttament fuq il-kampjun, se taffettwa l-irbit ta ' l-antikorp antiġen, li jirriżulta f'valuri ta ' kejl mhux eżatti. Huwa rrakkomandat li tiċċentrifuga b'veloċità għolja (5000 × g) l-ewwel, ħalliha toqgħod għal 10 min, ħu s-saff tan-nofs ta 'likwidu aktar ċċarat, imbagħad ċentrifuga għal darba oħra b'veloċità għolja (≥5000 × g), ħu n-nofs u aktar baxx saff ta 'likwidu ċar u użah għall-ittestjar.

13. X'inhu l-protokoll tad-dilwizzjoni tal-kampjuni tal-ELISA?

Il-firxa ta' skoperta tal-kit ELISA mhijiex ekwivalenti għall-firxa ta' konċentrazzjoni tal-analite li se jiġi ttestjat fil-kampjun. Qabel l-esperiment, huwa rakkomandat li tiġi stmata l-konċentrazzjoni tal-analite fil-kampjun mil-letteratura rilevanti u tiddetermina l-konċentrazzjoni attwali tal-kampjun permezz ta 'esperimenti minn qabel.

Jekk il-kampjun tal-assaġġ tal-ELISA tiegħek jeħtieġ dilwizzjoni, il-protokoll ta' referenza tad-dilwizzjoni huwa kif ġej.

Ħinijiet ta' dilwizzjoniProgramm ta' dilwizzjoni
Dilwizzjoni 100 darbaDilwizzjoni f'pass wieħed. Ħu 5μL ta' kampjun f'495μL ta' dilwent standard u kampjun u agħmel dilwizzjoni ta' 100 darba.
Dilwizzjoni 1000 darbaDilwizzjoni f'żewġ stadji. Ħu 5 μL ta 'kampjun f'95 μL ta' dilwent standard & kampjun u ħallat 20 darba, imbagħad ħu 5 μL ta 'kampjun dilwit 20 darba f'245 μL ta' dilwent standard u kampjun u ħallat 50 darba, dilwizzjoni totali 1000 darba.
Dilwizzjoni 100000 darbaTliet passi dilwizzjoni. Ħu 5μL ta 'kampjun f'195μL ta' standard u dilwent tal-kampjun u ħallat 40 darba, imbagħad ħu 5μL ta '40 darba kampjun dilwit f'245μL ta' standard u dilwent tal-kampjun u ħallat 50 darba, u finalment ħu 5μL ta' 2000 darba kampjun dilwit f'245μL ta' standard & dilwent tal-kampjun u ħallat 50 darba, għal dilwizzjoni totali ta '100000 darba.

Għal kull pass ta' dilwizzjoni, il-volum ta' likwidu meħud m'għandux ikun inqas minn 3 μL u d-dilwizzjoni m'għandhiex teċċedi 100 darba. Kull pass tad-dilwizzjoni għandu jitħallat sew.

Ipproċessar tad-data ELISA

ELISA-kampjun
ELISA-kampjun

14. Liema funzjoni ta 'twaħħil tintuża għall-kurva standard tal-ELISA? Nista' nuża Excel biex nagħmel kurva standard? Għaliex il-kurva standard li għamilt mhix linja dritta?

Huwa rakkomandat li tuża softwer Oriġini jew softwer ieħor li jkun fih mudell 4-PL (loġistika ta 'erba' parametri) biex taqbel mal-kurva standard. Il-metodu ta 'twaħħil 4-PL jista' jirrifletti b'mod aktar preċiż ir-relazzjoni lineari bejn il-konċentrazzjoni u l-assorbiment, u b'hekk jikseb b'mod aktar preċiż il-konċentrazzjoni tas-sustanza li għandha titkejjel fil-kampjun. Dawn iż-żewġ metodi ta 'twaħħil mhumiex rakkomandati għalihom standards ELISA.

dejta ELISA
dejta ELISA

15. Kif tuża Oriġini biex tfassal kurvi standard u tikkalkula r-riżultati tal-ELISA?

Il-kalkolu tar-riżultat tal-esperiment ELISA jinkludi t-twaħħil tal-kurva standard u l-kalkolu tal-konċentrazzjoni tal-kampjun. Il-valuri medji OD tal-bjar standard u replikati tal-kampjun ġew ikkalkulati, u l-valuri OD tal-bjar vojta tnaqqsu bħala l-valuri ta 'korrezzjoni. Bil-konċentrazzjoni bħala l-koordinata orizzontali u l-valur OD bħala l-koordinata vertikali, twaħħlet kurva standard ta 'funzjoni loġistika ta' erba 'parametri fuq koordinati logaritmiċi doppji, u mbagħad il-valur OD tal-kampjun ġie sostitwit fil-kurva standard biex jinkiseb il-valur tal-konċentrazzjoni tal-kampjun. Jekk il-kampjun ġie dilwit qabel il-kejl, il-konċentrazzjoni attwali tal-kampjun għandha tiġi mmultiplikata bil-fattur tat-trattib.

Aħna nużaw cookies sabiex jagħtuk l-aħjar esperjenza possibbli fuq il-websajt tagħna. Billi tkompli tuża dan is-sit, taqbel mal-użu tagħna tal-cookies.
Aċċetta
Regoli tal-privatezza