Dixx tal-Kultura taċ-Ċelloli

kontenut
1. X'inhu dixx tal-kultura taċ-ċelluli?
    1.1 Speċifikazzjoni tad-dixx tal-kultura taċ-ċelluli
2. Tip ta 'dixx tal-kultura taċ-ċelluli
3. Użu ta 'dixx tal-kultura taċ-ċelluli
4. Applikazzjoni ta 'dixx tal-kultura taċ-ċelluli
    4.1 Teknoloġija tat-trattament tal-wiċċ bi pjanċi tal-kultura
    4.2 Dixx tal-kultura taċ-ċelluli fil-mikrobijoloġija
5. Kif tixtri dixx tal-kultura taċ-ċelluli?

Dixx tal-kultura taċ-ċelluli huwa reċipjent tal-laboratorju użat għall-kultura tal-mikrobi jew taċ-ċelluli, li jikkonsisti f'qiegħ ċatt bħal diska u għatu, ġeneralment magħmul minn ħġieġ jew plastik. Il-materjali tad-dixx Petri huma maqsuma f'żewġ kategoriji, prinċipalment plastik u ħġieġ, ħġieġ jista 'jintuża għal materjal tal-pjanti, kultura mikrobjali u kultura tal-ħajt taċ-ċelluli tal-annimali jistgħu jintużaw ukoll. Dawk tal-plastik jistgħu jkunu magħmula mill-polyethylene, u hemm dawk li jintremew u b'ħafna użu, li huma adattati għal operazzjonijiet tal-laboratorju ta 'inokulazzjoni, delineazzjoni u separazzjoni ta' batterji, u jistgħu jintużaw għall-kultura ta 'materjali tal-pjanti.

Kien oriġinarjament iddisinjat fl-1887 minn Julius Richard Petri (1852-1921), batterologu li jaħdem taħt il-bijologu Ġermaniż Robert Koch, u għalhekk huwa magħruf ukoll bħala l-"Platt Petri". Dixxijiet Petri huma fraġli u fraġli, għalhekk għandhom jitnaddfu u jitqiegħdu b'attenzjoni u kawtela. L-aħjar huwa li tnaddaf il-platti wara l-użu u taħżinhom f'post sigur u fiss biex tevita ħsara u ksur.

Dixx tal-kultura taċ-ċelluli huwa adattat għal stazzjonijiet ta 'prevenzjoni ta' epidemija, sptarijiet, prodotti bijoloġiċi, l-industrija tal-ikel, l-industrija farmaċewtika, u unitajiet oħra għall-iżolament u l-kultura tal-batterja, test tal-qawwa antimikrobika, u analiżi tat-test kwalitattiv. Fl-agrikoltura, riċerka akkwatika u xjentifika oħra tintuża għall-kultura artifiċjali taż-żerriegħa tas-snien tax-xagħar, pjanti, insetti, speċi ta 'ħut, u riċerka tat-tfaqqis. Industrija elettronika jew industriji oħra użati bħala bastimenti.

a. Skond l-użi differenti ta ' Dixxijiet Petri jistgħu jinqasmu platti tal-kultura taċ-ċelluli u, platti tal-kultura batterjali.

b. Skont il-materjali tal-manifattura differenti, id-dixxijiet tal-kultura taċ-ċelluli huma maqsuma platti tal-kultura tal-plastik u, platti tal-kultura tal-ħġieġ, iżda l-platti tal-kultura importati u platti tal-kultura li jintremew huma materjali tal-plastik.

c. Skond id-daqs, dixx tal-kultura taċ-ċelluli jista 'jinqasam f'platti ta' dijametru ta '35mm, 60mm, 90mm u 150mm.

d. Skont is-separazzjonijiet differenti, id-dixx tal-kultura taċ-ċelluli jista 'jinqasam f'dixx tal-kultura maqsuma 2, dixx tal-kultura maqsuma 3, eċċ.

e. Dixxijiet tal-kultura taċ-ċelluli huma maqsuma f'żewġ kategoriji f'termini ta 'materjal, plastik u ħġieġ. Il- platti tal-kultura tal-qiegħ tal-ħġieġ jista 'jintuża għall-materjal tal-pjanti, kultura mikrobjali u kultura ta' appplanazzjoni taċ-ċelluli tal-annimali, eċċ. Dixxijiet tal-plastik tal-kultura taċ-ċelluli huma l-aktar magħmula mill-polyethylene u huma maqsuma f'dawk li jintremew u li jintużaw ħafna. Huma adattati għal operazzjonijiet tal-laboratorju ta 'inokulazzjoni, delineazzjoni u separazzjoni ta' batterji, u jistgħu jintużaw ukoll għall-kultura ta 'materjali tal-pjanti.

a. Dixx tal-kultura taċ-ċelluli jeħtieġ li jitnaddaf u jiġi ddiżinfettat qabel l-użu minħabba li l-indafa jew mod ieħor tad-dixxijiet tal-kultura taċ-ċelluli għandha impatt akbar fuq ix-xogħol, li jista 'jaffettwa l-pH tal-medju tal-kultura, u jekk ċerti kimiċi jkunu preżenti, jistgħu jinibixxu t-tkabbir tal-batterja.

b. Mixtrija ġdida platti tal-kultura taċ-ċelluli għandha titlaħlaħ bl-ilma sħun l-ewwel, imbagħad titqiegħed f'soluzzjoni ta '1% jew 2% frazzjoni tal-massa ta' aċidu idrokloriku għal diversi sigħat biex tneħħi l-materjal alkalin ħieles, u mbagħad laħlaħ darbtejn b'ilma distillat.

c. Jekk trid tikkultura batterji, għandek bżonn tpoġġi dixx tal-kultura taċ-ċelluli bi fwar bi pressjoni għolja (ġeneralment 6.8 * 10 ta '5 darbiet Pa fwar bi pressjoni għolja), sterilizzazzjoni ta' 30min f'temperatura ta '120 ℃, imqiegħda f'temperatura tal-kamra biex tinxef , jew bi sterilizzazzjoni tas-sħana niexfa, jiġifieri, id-dixx petri jitqiegħed fil-forn, il-kontroll tat-temperatura fil-każ ta 'madwar 120 ℃ biex iżżomm 2h, tista' toqtol il-blanzuni taċ-ċelluli batteriċi.

d. Sterilizzat biss platti tal-kultura taċ-ċelluli jista 'jintuża għall-kultura ta' tilqim.

Meta l- dixx tal-kultura taċ-ċelluli jipproduċi aktar fwar tal-ilma, il-fwar tal-ilma se jikkondensa fuq l-għatu u jipproduċi qtar tal-ilma. Jekk il- platt petri huwa kwadru, il-qtar ta 'l-ilma se jxerrdu l-kolonji, għalhekk kolonja kbira tista' tkun imxerrda f'ħafna kolonji żgħar, li se jikkawżaw problemi kbar għall-kultura u l-għadd ta 'batterji. Għalhekk, bil-medju fuq nett u l-għatu fuq il-qiegħ, il-qtar tal-ilma mhux se jqattar fuq il-kolonji.

Trattament ta ' pjanċi tal-kultura bil-kollaġen żnaturat itejjeb it-tkabbir ta 'varjetà ta' ċelloli, bħall-abbiltà taċ-ċelloli epiteljali li jaderixxu. Il-kollaġen żnaturat huwa mgħotti billi titferra soluzzjoni ta 'kollaġen estratt waħdu jew mibjugħa kummerċjalment (eż., Akamu, sigma, Thermo Fisher, eċċ.) Sostituti fid-dixx tal-kultura, imbagħad sempliċement aspira s-soluzzjoni żejda u tħalli r-residwu jinxef.

Il-kollaġen jista 'jintuża wkoll bħala ġel mhux denaturant li jappoġġa t-tkabbir sinaptiku fil-gangli spinali embrijoniċi tal-flieles, it-tkabbir u d-divrenzjar morfoloġiku ta' ċelloli mammarji, ċelloli staminali, ċelloli tal-fwied, u ċelloli epiteljali oħra, u jippromwovi l-espressjoni ta 'ħafna tessut ieħor speċifiku. funzjonijiet f'ċelloli iżolati, komunement użati f'tekniki ta 'kultura ta' ċelluli tridimensjonali (3D). Il-kollaġen huwa dilwit b'medja fi proporzjon ta '1:10. L-ammont ta 'kollaġen użat jista' jiġi ttestjat b'esperimenti gradjent għall-konċentrazzjoni ottima għal ċelloli differenti, u mbagħad il-pH jiġi aġġustat għal 7.4. Il-kollaġen likwidu jsir ġel, għalhekk id-dilwizzjoni u t-tqassim għandhom ikunu rapidi. Preferibbilment, wara li l-mezz tat-tkabbir jiġi miżjud mal-ġel, jitħalla joqgħod f'4 ° C għal 4-24 siegħa biex jiġi żgurat li l-ġell irid jifforma ekwilibriju mal-medju qabel ma żżid iċ-ċelloli. Matul dan iż-żmien, proteini addizzjonali bħal fibronectin jew laminin jistgħu wkoll jiġu miżjuda.

Matriċi kummerċjali bħal ġellijiet matriċi ta 'Becton Dickinson ġeneralment fihom laminin, fibronectin, u proteoglycan, bil-laminin tkun l-aktar abbundanti. Prodotti oħra tal-matriċi jinkludu laminin F, haptoglobin, acetyl heparin sulfate, EHS Natrix, ECL, u Cell-tak. Il-kompożizzjoni kimika ta 'xi wħud minn dawn il-prodotti mhijiex determinazzjoni sħiħa, iżda ġiet ippurifikata; oħrajn huma taħlitiet ta' sottostrati li huma diffiċli biex jiġu kkaratterizzati u jista' jkun fihom ukoll xi fatturi ta' tkabbir li jorbtu. Dawn il-matriċi jistgħu jintużaw jekk l-adeżjoni taċ-ċelluli hija importanti għas-sopravivenza u jekk ma jkunx hemm bżonn li tiġi speċifikata l-kompożizzjoni ta 'dawn l-adeżjonijiet, bħal fil-każ ta' xi linji ta 'ċelluli tat-tumur użati b'mod komuni fil-kultura. Madankollu, fil-każ ta 'studju ta' kwistjonijiet mekkanistiċi, dawn il-matriċi spiss jintużaw biss bħala stadju intermedju fit-triq għall-użu ta 'adeżjoni b'kompożizzjoni definita bis-sħiħ. Għalhekk, l-użu ta 'kampjuni b'kompożizzjoni definita sew u purità għolja, bħal ġelatina u kollaġen, bħala sottostrati għal kultura ta' ċelluli tridimensjonali (3D) għall-istudju tal-mekkaniżmi qed isir dejjem aktar mifrux.

Jekk ikun meħtieġ kisi tal-wiċċ mhux attiv, jistgħu jiġu kkunsidrati tipi xierqa ta' kulturi ta' ċelloli monosaff biex jipprovdu matriċi xierqa għal xi tipi speċifiċi ta' ċelloli.

Il-kisi tas-sottostrat jgħin fit-twaħħil taċ-ċelluli, it-tkabbir u d-divrenzjar. Xi ċelloli diffiċli biex jiġu kkultivati, speċjalment dawk li huma aktar diffiċli biex jiġu kkultivati ​​f'densitajiet baxxi ta 'ċelluli, jeħtieġu ċelloli ħajjin biex iżommuhom. Eżempji huma l-kultura ta 'ċelloli staminali multifunzjonali (iPS) u ċelloli NK. Dan jista 'jkun parzjalment minħabba tnixxija ta' metaboliti minn ċelluli tas-saff alimentatriċi jew fatturi ta 'tkabbir imnixxija li għandhom effett kumplimentari fuq il-mezz tal-kultura, iżda wkoll minħabba prodotti taċ-ċelluli li jottimizzaw il-wiċċ tat-twaħħil taċ-ċelluli.

Xi drabi, l-operaturi ma jridux it-twaħħil taċ-ċelluli meta jikkultivaw iċ-ċelloli minħabba li ċ-ċelloli mhux trasformati f'dawn il-matriċi aderenti ma jiffurmawx faċilment kolonji. Pereżempju, meta nikkulturaw ċelloli staminali ematopojetiċi għad-differenzjazzjoni tal-kolonji, aħna ġeneralment inlaqqmu ċ-ċelloli staminali ematopojetiċi fuq ġel agar u nissupplimentawha biċ-ċitokini rilevanti.

Din is-sistema ta 'għażla ta' wiċċ ta 'twaħħil mhux adeżiv tinvolvi żewġ fatturi importanti.

a. Prevenzjoni tat-twaħħil mal-qiegħ tal- dixx tal-kultura taċ-ċelluli, għaliex ladarba ċ-ċelloli huma mwaħħla mal-qiegħ, iseħħ it-tixrid u t-tkabbir dipendenti mill-appożizzjoni.

b. Is-sekwestru taċ-ċelloli sabiex iċ-ċelloli bint prodotti mid-diviżjoni jkunu jistgħu jaggregaw (anke jekk ma jaderixxux) flimkien biex jiffurmaw kolonji. Agar, agarose, jew methylcellulose huma bħalissa l-aktar komunement użati. L-ewwel tnejn huma ġellijiet u l-aħħar huwa sol viskuż ħafna. Minħabba li l-methylcellulose hija solut li fih iċ-ċelluli jistgħu jegħrqu bil-mod, ħafna drabi jitqiegħed saff ta 'kollaġen taħtu.

Dixxijiet Petri jintużaw ħafna fil-bijoloġija biex jikkultivaw mikro-organiżmi bħal batterji, ħmira u forom. Huwa l-aktar adattat għal organiżmi li jirnexxu fuq uċuħ solidi jew semi-solidi.

Il-medju tal-kultura taċ-ċelluli ġeneralment ikun pjanċa tal-agar b’saffi ta’ diversi millimetri ta’ agar ħoxna jew ġel tal-agarose li jkun fih kwalunkwe nutrijenti li jeħtieġ l-organiżmu (bħal demm, melħ, karboidrati, aċidi amminiċi) u ingredjenti oħra mixtieqa (bħal żebgħa, indikaturi, u drogi). Ħoll l-agar u ingredjenti oħra f’ilma sħun u ferra’ ġo trej biex jibred. Ladarba l-mezz ikun solidifikat, inokula ("plating") il-kampjuni tal-organiżmu.

Dixxijiet tal-kultura taċ-ċelluli imbagħad jitħallew mhux disturbati għal sigħat jew jiem matul it-tkabbir tal-organiżmu u jistgħu jitqiegħdu f'inkubatur. Normalment ikunu mgħottija jew imqiegħda rasu 'l isfel biex jitnaqqas ir-riskju ta' kontaminazzjoni bl-ispori fl-arja.

Kultura ta 'virus jew phage teħtieġ li lott ta' batterji jiġi kkultivat f'dixx Petri l-ewwel, u mbagħad id-dixx Petri jsir il-mezz għall-inoculum virali.

Għalkemm id-dixxijiet Petri huma komuni fir-riċerka mikrobijoloġika, dixxijiet Petri iżgħar ħafna drabi jintużaw għal studji fuq skala kbira li fihom il-kultivazzjoni taċ-ċelloli fid-dixxijiet Petri tista 'tkun relattivament għalja u ta' xogħol intensiv.

Jekk inti interessat tagħna dixx tal-kultura taċ-ċelluli jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil [protett bl-email], aħna se nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.