Kunjett tal-Kultura taċ-Ċelloli
X'inhu flixkun tal-kultura taċ-ċelluli?
Kultura taċ-ċelluli hija teknika sperimentali importanti ħafna u saret modalità ta 'riċerka indispensabbli fl-oqsma tal-bijofarmaċewtiċi, ix-xjenzi tal-ħajja, u t-trapjant kliniku. Il-kultura taċ-ċelluli għandha ssir bl-għajnuna ta 'konsumabbli taċ-ċelluli biex jinkisbu l-kundizzjonijiet meħtieġa għat-tkabbir taċ-ċelluli, u flixkun tal-kultura taċ-ċelluli hija waħda mill-aktar għodod komuni tal-laboratorju.
Kunjetti tal-kultura taċ-ċelluli jippermettu għat-tkabbir u l-proliferazzjoni b'suċċess ta 'ċelluli mikrobjali, insetti, jew mammiferi. Il-kultura in vitro taċ-ċelloli u t-tessuti saret parti mir-riċerka u l-prattika tal-ħajja. Firxa wiesgħa ta 'tipi ta' ċelluli hija kkultivata, minn viruses għal batterji u fungi, u minn ċelluli umani għal ċelluli ta 'annimali u pjanti. Xi ċelluli u tessuti jistgħu jitkabbru f'sospensjoni, iżda proporzjon sinifikanti ta 'ċelluli tal-mammiferi jeħtieġu appożizzjoni tal-wiċċ. Għalhekk, il-garafini tal-kultura, il-pjanċi u d-dixxijiet użati biex jipprovdu ambjenti ta 'kultura taċ-ċelluli in vitro mhumiex biss trasparenti u mhux tossiċi iżda wkoll sterili. Jeħtieġ ukoll li jiġu modifikati fil-wiċċ biex ikunu jistgħu jaderixxu, jaqsmu u jikbru.
Kunjett tal-kultura taċ-ċelluli tas-sospensjoni
Minn meta daħlet fis-seklu 21, il-bijoloġija daħlet fi stadju innovattiv ta 'żvilupp, u l-pożizzjoni tax-xjenzi tal-ħajja fid-dixxiplini naturali ġiet rivoluzzjonata. Fosthom, il-bijoloġija molekulari, il-ġenetika, il-bijoloġija taċ-ċelluli, il-bijoloġija tal-iżvilupp, in-newroloġija, l-ekoloġija, ix-xjenzi tal-ħajja fl-ispazju, u dixxiplini oħra se jiżviluppaw gradwalment f'dixxiplini ewlenin.
Bijoloġija molekulari (inkluża l-ġenetika molekulari) fil-mainstream tax-xjenzi tal-ħajja, kif ukoll ir-rwol kbir tagħha fil-promozzjoni tal-iżvilupp tax-xjenzi tal-ħajja kollha kemm hi hija indiskutibbli. Iċ-ċellula hija l-unità strutturali u funzjonali bażika tal-attività tal-ħajja, il-bijoloġija taċ-ċelluli bħala d-dixxiplina bażika tal-istatus tax-xjenza bijoloġika teħtieġ ukoll li tingħata attenzjoni. Meta wieħed jitkellem dwar il-kultura taċ-ċelluli, skond il-klassifikazzjoni attwali taċ-ċelloli huma prinċipalment maqsuma fi: ċelloli ta 'sospensjoni u ċelloli tal-ħajt. Il-kultura taċ-ċelloli tas-sospensjoni issa hija l-kultura taċ-ċelluli prinċipali u effiċjenti fix-xjenzi tal-ħajja. Il-kontenituri meħtieġa għall-esperimenti tal-kultura taċ-ċelluli tas-sospensjoni saru wkoll għodda bażika fix-xogħol tax-xjenzati.
Fil-preżent, hemm tliet tipi ta ' reċipjenti tal-kultura taċ-ċelluli tas-sospensjoni komuni kif ġej.
A. Flixkun Erlenmeyer
Fl-1861, ix-xjentist nazzjonali Erlenmeyer, sabiex jiżgura l-istabbiltà tas-sħana tar-reazzjoni tal-kampjun garafina, tejjeb ir-reċipjent tat-tisħin u vvinta l-flixkun koniku. L-eċċellenza tal-flixkun koniku hija riflessa fil-forma speċjali tiegħu. Meta mqabbel ma' wieħed tond garafina, din il-forma speċjali żżid l-istabbiltà tal-istrument u tagħmilha inqas probabbli li tinqaleb. Barra minn hekk, matul il-proċess tat-tħawwid, l-"għonq" tal-flixkun koniku jagħmel il-likwidu ġewwa l-flixkun inqas probabbli li jittajjar 'il barra, sabiex is-soluzzjoni tal-kultura ma tittajjarx 'il barra mill-kontenitur matul il-proċess tal-kultura taċ-ċelloli tas-sospensjoni, u b'hekk tiżgura l-istabbiltà tas-sistema ta' reazzjoni. Illum il-ġurnata, kulturi tipiċi ta' ċelloli CHO, SF9, NK, eċċ. jitkabbru fi fliexken tat-tħawwid. Teoretikament, sabiex jiġi żgurat ammont tajjeb ta' ossiġnu maħlul, il-volum tal-kultura tal-flixkun tat-tħawwid huwa madwar 10% tal-volum tal-kontenitur, iżda jista' jiżdied fil-prattika.
B. Flixkun tal-kultura taċ-ċelluli
Fil-kulturi taċ-ċelluli tal-mammiferi u tal-insetti, fejn iċ-ċelloli juru vijabbiltà għolja u espressjoni ta' proteini, ANTITECK fliexken tal-mudelli kollha juru żieda sinifikanti fil-vijabbiltà taċ-ċelluli u l-attività fil-kultura taċ-ċelluli. Grazzi għall-uniku low-shear spoiler tal- flixkun tal-kultura taċ-ċelluli, l-effiċjenza ta 'l-arjazzjoni tiżdied, sabiex il-volum tal-mili jista' jilħaq 60% tal-volum totali. Tipi oħra ta 'kunjett ta' ħawwad jistgħu jżommu biss 30% tal-volum totali.
il flixkun tal-kultura taċ-ċelluli jippermetti tkabbir taċ-ċelluli b'saħħithom, li jirriżulta f'żieda fl-espressjoni ta 'prodotti fil-mira bħal proteini tal-membrana, proteini mnixxija, u antikorpi monoklonali; tiżdied l-espressjoni tal-proteina taċ-ċelluli tal-insetti b'200%. Għal xi ċelloli stabbli u ċelloli ta 'espressjoni temporanji, l-espressjoni tal-proteini tista' tiżdied bi 300%.
Bl-użu fliexken tal-kultura taċ-ċelluli, il-proporzjon tal-volum tal-likwidu tal-mili jiżdied u l-espressjoni għal kull unità ta 'volum tiżdied. Il-konsum tal-garafina tal-kultura u l-medju tal-kultura jistgħu jiġu ffrankati b'mod sostanzjali. Fliexken tal-kultura taċ-ċelluli b'riproduċibbiltà għolja, tkabbir ta 'sottoċellula skalabbli minn lott għal lott, u konsistenza għolja fir-rendiment.
Ċ. Fernbach
il flixkun tal-kultura, imsemmija wara l-bijologu Franċiż Auguste Fernbach, huwa fil-fatt titjib fuq il-flixkun tat-ħawwad. Iż-żona tal-qiegħ tal-flask tat-ħawwad ġiet imkabbra, u b'hekk tiżdied iż-żona ta 'skambju ta' ossiġnu bejn il-mezz tal-kultura u l-arja. Kemm fetħiet ċatti kif ukoll bil-kamin huma disponibbli, għalhekk jista 'jintgħażel għatu li jieħu nifs minnu. Il-ftuħ kbir inaqqas id-diffikultà tat-trasferiment tal-mezz. Il-baffle fil-qiegħ iżid il-fluss tal-likwidu meta l-flixkun jitħawwad biex tiżdied il-probabbiltà ta 'kuntatt bejn il-likwidu u l-ossiġnu. Il-flixkun Bach iżid ir-rendiment tal-prodott aktar minn flixkun ħawwad regolari.
Tipi ta' flixkun tal-kultura taċ-ċelluli
Il-kultura taċ-ċelluli hija metodu biex tissimula l-ambjent in vitro sabiex tgħix, tikber, tirriproduċi u żżomm strutturi u funzjonijiet ewlenin. Varjetà ta 'konsumabbli tal-kultura taċ-ċelluli jintużaw għall-kultivazzjoni taċ-ċelloli, li minnhom fliexken tal-kultura taċ-ċelluli huma wieħed mill-aktar użati.
Il - forma tal - flixkun tal-kultura taċ-ċelluli huwa ddisinjat biex ikun kwadru b'għonq wiesa', li huwa maħsub biex jiffaċilita l-ħsad taċ-ċelloli. Id-disinn matt ġeneralment jintuża fuq il-ġenb tal-flixkun biex jiffaċilita r-rekord tal-operatur. F'termini ta' speċifikazzjonijiet, dan il-konsumabbli huwa komunement disponibbli f'25cm2, 75cm2, 175cm2, 225cm2, eċċ. L-ispeċifikazzjonijiet li ġeneralment nirreferu għalihom huma l-kapaċità tal-mezz tal-kultura li jista' jżomm il-flixkun. Skont l-ispeċifikazzjonijiet differenti, hemm xenarji ta' applikazzjoni differenti.
Il-fliexken ta 'daqs żgħir ta' 25 cm2 u 75 cm2 jintużaw prinċipalment għall-irkupru taċ-ċelluli u l-espansjoni fuq skala żgħira, prinċipalment fil-fażi ta 'qabel il-kultura. Jista 'jintuża wkoll bħala kontenitur tal-ħażna għal varjetà ta' ċelluli ħomor tad-demm. Il-fliexken ta 'daqs akbar ta' 175 cm2 u 225 cm2 jintużaw prinċipalment għal kultura ta 'ċelluli fuq skala medja jew espressjoni ta' proteina ewkarjotika, eċċ. Il-fliexken ta 'daqs akbar ta' 175 cm2 u 225 cm2 jintużaw prinċipalment għal kultura taċ-ċelluli fuq skala medja jew espressjoni ta 'proteina ewkarjotika. L-espressjoni tal-proteini hija teknika ta 'bijoloġija molekulari li tuża batterji, ħmira, ċelluli ta' l-insetti, ċelloli tal-mammiferi, jew ċelloli tal-pjanti biex tesprimi proteini tal-ġeni eżoġeni, u hija waħda mill-komponenti importanti tat-teknoloġija tal-inġinerija ġenetika.
Kunjetti tal-kultura taċ-ċelluli jintużaw prinċipalment għall-kultura ta 'ċelluli b'ħitan. Għalkemm speċifikazzjonijiet differenti jvarjaw fl-użu tagħhom, kollha jridu jissodisfaw ir-rekwiżiti għat-tkabbir taċ-ċelluli, bħall-ebda enzimi tad-DNA, l-ebda enzimi RNA, l-ebda endotossini, l-ebda sorsi tal-annimali, trattament TC tal-wiċċ, eċċ.
Użu ta' flixkun tal-kultura taċ-ċelluli
Kif tiddiġerixxi aħjar iċ-ċelloli fil-garafini tal-kultura taċ-ċelluli?
Kunjett tal-kultura taċ-ċelluli huwa wieħed mill-konsumabbli tal-kultura taċ-ċelluli l-aktar użati meta jikkultivaw iċ-ċelloli. Il-kultivazzjoni taċ-ċelloli hija biċċa xogħol rigoruża ħafna, u teħtieġ il-kundizzjonijiet it-tajba għal tkabbir aħjar. Il-ħsad taċ-ċelloli huwa involut meta t-tkabbir jilħaq ċertu livell. Meta tuża fliexken tal-kultura taċ-ċelluli, jistgħu jiġu segwiti l-erba 'passi li ġejjin.
a. Ferra’ l-mezz il-qadim u żid ammont żgħir ta’ mezz ġdid biex taħsel darba jew darbtejn, l-iskop li tagħmel dan huwa li taħsel kemm jista’ jkun ċelluli mejta li jkunu qed jiċċaqalqu madwarek.
b. Żid ammont żgħir ta' mezz ġdid u nefħu direttament darba, din id-darba biex tneħħi ċ-ċelloli li mhumiex imwaħħlin sew mal-ħajt. Aħsel mill-ġdid bil-mezz u ħallat is-sospensjoni darbtejn biex tgħaddi f'mezz ġdid. flixkun tal-kultura taċ-ċelluli.
c. Aspira l-likwidu li jifdal fil-flixkun, żid madwar 0.3 ml ta' tripsina biex taħslu darba, aspirah u armih, u mbagħad żid madwar 1 ml ta' tripsina biex tiddiġerixxih. Meta d-distakk bejn iċ-ċelloli jkun ovvju, aspira u armi t-tripsina immedjatament, żid mezz ġdid u ibda jonfoħ, jonfoħ 2-3 darbiet u mbagħad aspira s-sospensjoni f' tubu tat-test jew flixkun ġdid għal ħażna temporanja. Aħsel b'2ml tal-mezz il-ġdid u ħallat ma' dak ta' qabel.
d. Kompli ddiġerixxi ċ-ċelloli li jifdal li jkunu mwaħħlin sew bi trypsin frisk miżjud mal-flixkun. Kompli osserva mikroskopikament, u meta l-lakuni fiċ-ċelloli li jifdal ikunu evidenti u ċ-ċelloli jkunu miftuħa b'mod indipendenti, aspira t-trypsin, żid mezz ġdid u nefaħ u għaddi s-sospensjoni fi flixkun ġdid għall-kultura.
Il-passi ta 'hawn fuq se jirriżultaw fi kwalità aħjar ta' ċelluli diġeriti mill-garafini tal-kultura taċ-ċelluli u status ta 'tkabbir aħjar matul il-passaġġi ta' wara.
Kif tibdel is-soluzzjoni fil-garafina tal-kultura taċ-ċelluli?
Fil-proċess tal-kultivazzjoni taċ-ċelloli, l-iskambju tal-fluwidu huwa operazzjoni ta 'rutina ħafna, li hija prinċipalment biex tneħħi diversi skart metaboliku prodott miċ-ċelloli waqt it-tkabbir, timla l-medju tal-kultura frisk u tippromwovi t-tkabbir taċ-ċelluli.
Biex twettaq il-passi li ġejjin, flixkun tal-isprej tal-alkoħol li jkun fih 75% alkoħol sterili mediku, buffer PBS, medium li fih is-serum, siringa Pap, pipetta, u vażett tal-iskart huma meħtieġa.
a. Poġġi t-tagħmir fuq il-mejda ultra-nadifa u ixgħel l-UV irradjazzjoni għall-isterilizzazzjoni. Jekk iċ-ċelloli kkultivati huma sensittivi għat-temperatura, tista' tpoġġi l-fliexken tal-midja li fihom is-serum f'banju tal-ilma ta' 37°C biex it-temperatura tal-midja tkun ta' 37°C, u mbagħad tittrasferihom għal mejda ultra-nadifa għall-isterilizzazzjoni UV. Barra minn hekk, il-kamra tal-kultura taċ-ċelloli teħtieġ ukoll irradjazzjoni UV għal madwar nofs siegħa.
b. Neħħi l-flixkun tal-kultura taċ-ċelluli mill- inkubatur, iddiżinfetta l-wiċċ tal-flixkun bi flixkun tal-isprej b'75% alkoħol, ittrasferixxi għal fuq il-mejda ultra-nadifa, iftaħ l-għatu, aspira bil-mod il-mezz tal-kultura l-qadim, u żid mezz frisk li fih is-serum b'pipetta. Innota li l-mezz m'għandux jiżdied min-naħa annessali taċ-ċelloli, iżda mill-ħajt tal-ġenb, b'movimenti ġentili sabiex ma jinħaslux iċ-ċelloli.
c. Wara li żżid il-mezz, agħlaq l-għatu u immarka l-flixkun b'informazzjoni bħall-ħin tal-bidla tal-fluwidu, it-tip ta' ċellula, u l-operatur.
d. Qabel ma tpoġġi l-fliexken fl-inkubatur, għandek tisprejja l-wiċċ tal-fliexken bl-alkoħol mill-ġdid, u mbagħad għandek tiftakar li torganizza l-mejda tal-operazzjoni, timsaħ il-wiċċ ultra-nadif tal-mejda bl-alkoħol, u tnaddaf il-likwidu tal-iskart u ż-żibel.
Meta twettaq l-operazzjoni ta 'skambju likwidu, agħti attenzjoni għall-asepsi matul il-proċess kollu. L-operaturi għandhom jilbsu ħwejjeġ sterilizzati, ingwanti sterilizzati, u maskri, u għandhom joqogħdu attenti meta jdejhom imissu l-ħalq tal- flixkun tal-kultura taċ-ċelluli biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni.
Kif tixtri flixkun tal-kultura taċ-ċelluli?
Jekk inti interessat tagħna Kunjett tal-Kultura taċ-Ċelloli jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.