ANTITECK - Ipprovdi Tagħmir tal-Lab, Awtomazzjoni Industrijali, Moulding Mediku u Soluzzjoni Turnkey.
tagħmir-bijoloġija-laboratorju

Għaliex għandek Kuluri Diversi fl-Esperiment ELISA?

Posted fuq Ottubru 29, 2022 by Zeng YingELISA

KatalguTagħmir Għall-Elisa Kit Manufacturing

introduzzjoni

ELISA, magħruf ukoll bħala assaġġ immunosorbent marbut ma 'l-enżimi, huwa metodu komuni għad-determinazzjoni kwantitattiva tal-kontenut ta' diversi proteini fil-mira fil-fluwidi tal-ġisem.

Ir-reazzjoni kolorimetrika tagħha tippermetti analiżi kwalitattiva jew kwantitattiva, bl-użu tat-TMB katalizzat bl-enżimi HRP, ir-reazzjoni tipproduċi soluzzjoni ta 'imine blu, u ż-żieda ta' soluzzjoni ta 'terminazzjoni tittrasforma l-katjoni blu f'biphenylquinone isfar.

Minbarra l-blu u l-isfar komuni, iseħħu xi kuluri mhux tas-soltu u diversi waqt esperimenti ELISA. Wara kull kulur, hemm tifsira speċjali. Sussegwentement, se nanalizzaw is-sigrieti tal-kulur moħbija fid-"dehra" u l-"output" ta 'ELISA.

Dehra ELISA (komponent)

It-test ELISA juri kulur roża

Assaġġ-immunosorbenti marbut ma' enzimi
Assaġġ-immunosorbenti marbut ma' enzimi

Għaliex xi kits ELISA fihom dilwizzjonijiet u antikorpi bijotinilati kkonċentrati li huma ta 'kulur roża?

Xi komponenti tal- Kit ELISA se jkollu kulur aħmar/roża minħabba ż-żieda ta 'aġenti protettivi speċjali, bħal ċerta serje ta' dilwizzjonijiet ta 'konjugat ta' enzima u kkonċentrati antikorpi bijotinilati. Ir-reaġenti ta 'dan il-kulur jaħdmu b'mod normali u għandhom jintużaw b'kunfidenza skont ir-rekwiżiti operattivi fl-istruzzjonijiet.

It-test ELISA juri kulur isfar

ELISA-teknika
ELISA-teknika

Għaliex id-dilwizzjoni ta' ELISA hija isfar ċar?

Fl-esperimenti ELISA, id-dilwent fih preservattivi u normalment huwa likwidu ċar, trasparenti u bla riħa. Jekk id-dilwent isir imdardar, jinxtamm, u jipproduċi preċipitazzjoni, l-odds huma li jkun ikkontaminat bil-batterja u mhux rakkomandat għal aktar użu.

It-test ELISA jidher blu jew isfar-aħdar

test ELISA
test ELISA

Is-soluzzjoni tas-sottostrat TMB tibdel il-kulur qabel ma tintuża f'esperimenti ELISA?

In esperimenti ta' analiżi immunosorbenti marbuta ma' enżimi sottostrat TMB soluzzjonijiet mhux maħżuna 'l bogħod mid-dawl u li jitħallew miftuħa għal żmien twil wisq se jiġu ossidizzati mill-enzima HRP fl-arja u jidhru blu ċar/blu. L-użu dirett taħt ċirkostanzi bħal dawn iwassal għal riżultati pożittivi foloz. Għalhekk, mhuwiex rakkomandat li tkompli tuża soluzzjoni TMB li saret blu.

Riżultat ta' esperimenti ELISA (riżultati)

L-esperiment ELISA jirriżulta f'aħdar skur/blu skur

reazzjoni ELISA
reazzjoni ELISA

Wara l-inkubazzjoni bis-soluzzjoni tas-sottostrat, is-soluzzjoni sew tal-pjanċa tal-enżima ssir aħdar skur jew blu skur

B'mod normali esperiment ELISA, ir-reazzjoni tintemm meta gradjent blu ċar jidher fl-ewwel erba 'bjar tal-markatur wara l-inkubazzjoni bis-soluzzjoni tas-sottostrat. Madankollu, meta l-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tax-xogħol tal-konjugat tal-enżima HRP inkubata tkun għolja wisq jew il-konċentrazzjoni tal-kampjun hija ħafna ogħla mill-firxa ta 'skoperta, l-ogħla 1-2 bjar gradjent jew bjar tal-kampjun tal-kurva standard jistgħu jidhru aħdar skur jew blu skur.

Wara li l-kampjun aħdar skur itemm ir-reazzjoni, il-valur OD moqri f'450 nm jista 'jkun inqas mill-attwali; il-kurva tal-kalibrazzjoni blu skur tkun qrib wisq tal-valur OD tal-gradjent biex titwaħħal biex tikseb kurva tal-kalibrazzjoni valida u tikkalkula b'mod preċiż il-konċentrazzjoni tal-kampjun.

Rakkomandazzjonijiet

1. Ikkontrolla b'mod strett it-temperatura u l-ħin tal-inkubazzjoni f'kull pass u pprepara s-soluzzjoni tax-xogħol tal-konjugat tal-enżima HRP skont l-istruzzjonijiet.

2. Matul il-fażi tal-iżvilupp tal-kulur, ikkontrolla l-ħin tal-iżvilupp tal-kulur bid-dehra ta 'gradjent blu distint fl-ewwel erba' bjar.

3. Kampjuni b'konċentrazzjoni għolja wisq jeħtieġ li jiġu dilwiti fil-medda ta 'skoperta tal-kit qabel id-determinazzjoni.

L-esperiment ELISA jirriżulta f'kulur isfar

Wara li r-reazzjoni ELISA tkun mitmuma, il-pjanċa kollha ssir isfar

riżultati tat-test ELISA
riżultati tat-test ELISA

Raġunijiet possibbli għall-kulur isfar tar-riżultati tal-esperimenti ELISA

Il-metodu tal-kompetizzjoni ELISA jitħaddem skont il-metodu sandwich: iż-żewġ prinċipji huma differenti u l-passi tal-operazzjoni huma differenti, jekk jogħġbok agħti attenzjoni għad-distinzjoni.

Ħasil ​​mhux xieraq: ħawwad il-pjanċa qrib wisq tal-barmil tal-iskart, li jirriżulta fi tixrid ta 'dahar likwidu; ħawwad il-pjanċa mhux niexfa, li jirriżulta f'residwu likwidu jew fluss fi bjar oħra; ħasil meta kull bir ma jkunx injettat biżżejjed soluzzjoni tal-ħasil, jew in-numru tal-ħasil mhux biżżejjed; wisq kontaminazzjoni tal-overflow likwidu; il-ħin tal-immersjoni huwa qasir wisq.

Ħażna mhux xierqa ta 'kromoġenu, jew inkubazzjoni mingħajr protezzjoni tad-dawl, li tirriżulta fi żvilupp ta' kulur mhux speċifiku.

It-temperatura ta 'inkubazzjoni hija għolja wisq, jew il-ħin ta' inkubazzjoni huwa twil wisq.

Taħlit jew sostituzzjoni ta 'komponenti ta' kit differenti, li jirriżultaw f'effett ta 'matriċi jew adsorbiment mhux speċifiku, li jwassal għal riżultati pożittivi foloz.

Ir-riżultati tat-test ELISA huma normali għall-kurva standard u isfar għall-bjar tal-kampjun

ELISA-esperimenti
ELISA-esperimenti

Wara li l-qari ġie kkalkulat, instab li t-twaħħil tal-kurva standard kien tajjeb, iżda l-OD tal-kampjun qabeż l-OD massimu tal-kurva standard, li jindika li l-kampjun xorta kien jeħtieġ li jiġi dilwit oh.

Ir-riżultati tat-test ELISA bl-iswed

Kits-ELISA
Kits-ELISA

Wara li żżid is-soluzzjoni tat-terminazzjoni, il-likwidu fil-bjar tal-pjanċa ELISA isir iswed, jew tiġi prodotta preċipitazzjoni sewda

Kawżi possibbli

Il-konċentrazzjoni tal-enżima HRP hija għolja wisq: meta tħejji s-soluzzjoni tax-xogħol tal-enzima HRP, żgura li l-kalkolu u l-volum tal-preparazzjoni huma preċiżi, u aħsel il-pjanċa skont il-volum tal-ħasil, il-ħin u n-numru ta 'drabi fl-istruzzjonijiet.

Il-konċentrazzjoni tal-indikatur fil-kampjun hija għolja wisq u l-kampjun għad irid jiġi dilwit.

Il-konċentrazzjoni ta 'aċidu sulfuriku fis-soluzzjoni tat-terminazzjoni hija għolja wisq jew maħmuġ: is-soluzzjoni tat-terminazzjoni hija 1M H2SO4, it-taħlit ma' konċentrazzjoni għolja wisq ta 'aċidu sulfuriku jista' jwassal għal reazzjoni ta 'charring.

Aħna nużaw cookies sabiex jagħtuk l-aħjar esperjenza possibbli fuq il-websajt tagħna. Billi tkompli tuża dan is-sit, taqbel mal-użu tagħna tal-cookies.
Aċċetta
Regoli tal-privatezza