- introduzzjoni
- Dehra ELISA (komponent)
- Riżultat ta' esperimenti ELISA (riżultati)
Katalgu: Tagħmir Għall-Elisa Kit Manufacturing
introduzzjoni
ELISA, magħruf ukoll bħala assaġġ immunosorbent marbut ma 'l-enżimi, huwa metodu komuni għad-determinazzjoni kwantitattiva tal-kontenut ta' diversi proteini fil-mira fil-fluwidi tal-ġisem.
Ir-reazzjoni kolorimetrika tagħha tippermetti analiżi kwalitattiva jew kwantitattiva, bl-użu tat-TMB katalizzat bl-enżimi HRP, ir-reazzjoni tipproduċi soluzzjoni ta 'imine blu, u ż-żieda ta' soluzzjoni ta 'terminazzjoni tittrasforma l-katjoni blu f'biphenylquinone isfar.
Minbarra l-blu u l-isfar komuni, waqt l-esperimenti tal-ELISA jidhru xi kuluri mhux tas-soltu u diversi. Wara kull kulur, hemm tifsira speċjali. Sussegwentement, se nanalizzaw is-sigrieti tal-kulur moħbija fid-"dehra" u l-"output" tal-ELISA.
Dehra ELISA (komponent)
It-test ELISA juri kulur roża
Għaliex xi kits ELISA fihom dilwizzjonijiet u antikorpi bijotinilati kkonċentrati li huma ta 'kulur roża?
Xi komponenti tal- Kit ELISA se jkollu kulur aħmar/roża minħabba ż-żieda ta 'aġenti protettivi speċjali, bħal ċerta serje ta' dilwizzjonijiet ta 'konjugat ta' enzima u kkonċentrati antikorpi bijotinilati. Ir-reaġenti ta 'dan il-kulur jaħdmu b'mod normali u għandhom jintużaw b'kunfidenza skont ir-rekwiżiti operattivi fl-istruzzjonijiet.
It-test ELISA juri kulur isfar
Għaliex id-dilwizzjoni ta' ELISA hija isfar ċar?
Fl-esperimenti ELISA, id-dilwent fih preservattivi u normalment huwa likwidu ċar, trasparenti u bla riħa. Jekk id-dilwent isir imdardar, jinxtamm, u jipproduċi preċipitazzjoni, l-odds huma li jkun ikkontaminat bil-batterja u mhux rakkomandat għal aktar użu.
It-test ELISA jidher blu jew isfar-aħdar
Is-soluzzjoni tas-sottostrat TMB tibdel il-kulur qabel ma tintuża f'esperimenti ELISA?
In esperimenti ta' analiżi immunosorbenti marbuta ma' enżimi sottostrat TMB soluzzjonijiet mhux maħżuna 'l bogħod mid-dawl u li jitħallew miftuħa għal żmien twil wisq se jiġu ossidizzati mill-enzima HRP fl-arja u jidhru blu ċar/blu. L-użu dirett taħt ċirkostanzi bħal dawn iwassal għal riżultati pożittivi foloz. Għalhekk, mhuwiex rakkomandat li tkompli tuża soluzzjoni TMB li saret blu.
Riżultat ta' esperimenti ELISA (riżultati)
L-esperiment ELISA jirriżulta f'aħdar skur/blu skur
Wara l-inkubazzjoni bis-soluzzjoni tas-sottostrat, is-soluzzjoni sew tal-pjanċa tal-enżima ssir aħdar skur jew blu skur
B'mod normali esperiment ELISA, ir-reazzjoni tintemm meta gradjent blu ċar jidher fl-ewwel erba 'bjar tal-markatur wara l-inkubazzjoni bis-soluzzjoni tas-sottostrat. Madankollu, meta l-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tax-xogħol tal-konjugat tal-enżima HRP inkubata tkun għolja wisq jew il-konċentrazzjoni tal-kampjun hija ħafna ogħla mill-firxa ta 'skoperta, l-ogħla 1-2 bjar gradjent jew bjar tal-kampjun tal-kurva standard jistgħu jidhru aħdar skur jew blu skur.
Wara li l-kampjun aħdar skur itemm ir-reazzjoni, il-valur OD moqri f'450 nm jista 'jkun inqas mill-attwali; il-kurva tal-kalibrazzjoni blu skur tkun qrib wisq tal-valur OD tal-gradjent biex titwaħħal biex tikseb kurva tal-kalibrazzjoni valida u tikkalkula b'mod preċiż il-konċentrazzjoni tal-kampjun.
Rakkomandazzjonijiet
1. Ikkontrolla b'mod strett it-temperatura u l-ħin tal-inkubazzjoni f'kull pass u pprepara s-soluzzjoni tax-xogħol tal-konjugat tal-enżima HRP skont l-istruzzjonijiet.
2. Matul il-fażi tal-iżvilupp tal-kulur, ikkontrolla l-ħin tal-iżvilupp tal-kulur bid-dehra ta 'gradjent blu distint fl-ewwel erba' bjar.
3. Kampjuni b'konċentrazzjoni għolja wisq jeħtieġ li jiġu dilwiti fil-medda ta 'skoperta tal-kit qabel id-determinazzjoni.
L-esperiment ELISA jirriżulta f'kulur isfar
Wara li r-reazzjoni ELISA tkun mitmuma, il-pjanċa kollha ssir isfar
Raġunijiet possibbli għall-kulur isfar tar-riżultati tal-esperimenti ELISA
Il-metodu tal-kompetizzjoni ELISA jitħaddem skont il-metodu sandwich: iż-żewġ prinċipji huma differenti u l-passi tal-operazzjoni huma differenti, jekk jogħġbok agħti attenzjoni għad-distinzjoni.
Ħasil mhux xieraq: ħawwad il-pjanċa qrib wisq tal-barmil tal-iskart, li jirriżulta fi tixrid ta 'dahar likwidu; ħawwad il-pjanċa mhux niexfa, li jirriżulta f'residwu likwidu jew fluss fi bjar oħra; ħasil meta kull bir ma jkunx injettat biżżejjed soluzzjoni tal-ħasil, jew in-numru tal-ħasil mhux biżżejjed; wisq kontaminazzjoni tal-overflow likwidu; il-ħin tal-immersjoni huwa qasir wisq.
Ħażna mhux xierqa ta 'kromoġenu, jew inkubazzjoni mingħajr protezzjoni tad-dawl, li tirriżulta fi żvilupp ta' kulur mhux speċifiku.
It-temperatura ta 'inkubazzjoni hija għolja wisq, jew il-ħin ta' inkubazzjoni huwa twil wisq.
Taħlit jew sostituzzjoni ta 'komponenti ta' kit differenti, li jirriżultaw f'effett ta 'matriċi jew adsorbiment mhux speċifiku, li jwassal għal riżultati pożittivi foloz.
Ir-riżultati tat-test ELISA huma normali għall-kurva standard u isfar għall-bjar tal-kampjun
Wara li l-qari ġie kkalkulat, instab li t-twaħħil tal-kurva standard kien tajjeb, iżda l-OD tal-kampjun qabeż l-OD massimu tal-kurva standard, li jindika li l-kampjun xorta kien jeħtieġ li jiġi dilwit oh.
Ir-riżultati tat-test ELISA bl-iswed
Wara li żżid is-soluzzjoni tat-terminazzjoni, il-likwidu fil-bjar tal-pjanċa ELISA isir iswed, jew tiġi prodotta preċipitazzjoni sewda
Kawżi possibbli
Il-konċentrazzjoni tal-enżima HRP hija għolja wisq: meta tħejji s-soluzzjoni tax-xogħol tal-enzima HRP, żgura li l-kalkolu u l-volum tal-preparazzjoni huma preċiżi, u aħsel il-pjanċa skont il-volum tal-ħasil, il-ħin u n-numru ta 'drabi fl-istruzzjonijiet.
Il-konċentrazzjoni tal-indikatur fil-kampjun hija għolja wisq u l-kampjun għad irid jiġi dilwit.
Il-konċentrazzjoni ta 'aċidu sulfuriku fis-soluzzjoni tat-terminazzjoni hija għolja wisq jew maħmuġ: is-soluzzjoni tat-terminazzjoni hija 1M H2SO4, it-taħlit ma' konċentrazzjoni għolja wisq ta 'aċidu sulfuriku jista' jwassal għal reazzjoni ta 'charring.