Kaxxi tal-Friżer
X'inhuma l-kaxxi tal-friża?
Il-krijopreservazzjoni taċ-ċelloli hija waħda mill-metodi ewlenin ta' preservazzjoni taċ-ċelloli. Bl-użu lajofilizzazzjoni Teknoloġija biex tippreserva ċ-ċelloli f'nitroġenu likwidu f'temperatura ta' -196°C, iċ-ċelloli jistgħu jitneħħew temporanjament mit-tkabbir u l-proprjetajiet ċellulari tagħhom jistgħu jiġu ppreservati sabiex iċ-ċelloli jkunu jistgħu jerġgħu jiġu attivati għal esperimenti meta jkun hemm bżonn. Dan jipprevjeni li ċ-ċelloli jintilfu minħabba kontaminazzjoni taċ-ċelloli fil-kultura jew avvenimenti oħra mhux mistennija u jservi wkoll bħala aġent għall-preservazzjoni taċ-ċelloli. Meta ċ-ċelloli jiġu ffriżati direttament mingħajr ebda aġent protettiv addizzjonali, il-kristalli tas-silġ jiffurmaw mill-ilma kemm ġewwa ċ-ċelloli kif ukoll fl-ambjent estern, li jistgħu jwasslu għal ħsara mekkanika, żieda fil-livell ta' nitroġenu. elettroliti, bidliet fil-pressjoni osmotika, deidrazzjoni, bidliet fil-PH, denaturazzjoni tal-proteini, eċċ., li jistgħu jikkawżaw mewt taċ-ċelluli. Għalhekk, meta tiffriża u taħżen, għandhom jiżdiedu aġenti protettivi mas-soluzzjoni tal-kultura, li jistgħu jbaxxu l-punt tal-iffriżar. Taħt kundizzjonijiet ta' ffriżar bil-mod, dan jista' jġiegħel l-ilma intraċellulari joħroġ miċ-ċelluli qabel ma jiffriża. Il-ħażna fin-nitroġenu likwidu tista' tnaqqas il-formazzjoni ta' kristalli tas-silġ. F'dan il-punt, kaxxi tal-friża huma għażla tajba.
Għaliex huwa importanti li jiġu ffriżati ċ-ċelloli immuni?
Il-ħażna taċ-ċelluli hija l-estrazzjoni ta 'ċelloli minn tessuti umani jew demm permezz ta' mezzi tekniċi speċjali, direttament iżolati u purifikati jew wara kultura u amplifikazzjoni in vitro, maħżuna f'ambjent ta 'nitroġenu likwidu f'-196 ℃. F'dan l-ambjent ta 'temperatura ultra-baxxa, ir-reazzjonijiet bijokimiċi kollha fiċ-ċelloli jieqfu u jitneħħew temporanjament mill-istat tat-tkabbir, u l-funzjoni u l-attività taċ-ċelloli mhumiex affettwati b'mod sinifikanti, u l-ħin tal-preservazzjoni tagħhom jista' jilħaq aktar minn 20 sena.
Bħalissa, iż-żewġ tipi ewlenin ta 'ċelloli użati komunement fil-ħażna taċ-ċelloli huma ċelloli staminali u ċelloli immuni. Fost dawn, ċelloli staminali jinkludu ċelloli staminali ematopojetiċi tad-demm tal-kurdun, ċelloli staminali tal-kurdun taż-żokra, ċelloli staminali tal-plaċenta, ċelloli staminali adipożi, ċelloli staminali endometrijali, ċelloli staminali tal-polpa dentali, eċċ.; ċelluli immuni jinkludu ċelluli immuni tad-demm periferali u ċelluli immuni tad-demm tal-kurdun taż-żokra.
Il-ħażna ta 'ċelluli immuni hija ta' sinifikat kbir
A. Kif tlaħħaq ma' inċidenza għolja ta' kanċer
Bl-inċidenza għolja tal-kanċer illum, il-ħażna taċ-ċelloli immuni hija miżura li ssalva l-ħajja biex jitnaqqas ir-riskju tal-kanċer u jiġi evitat li dan iseħħ fl-ewwel lok.
B. Kif tlaħħaq mar-realtà ta’ sistema immunitarja li qed tiddeterjora wara l-pubertà
L-organi immuni jonqsu bl-età. L-aktar eżempju ovvju huwa l-glandola tat-timu, li tibda tiddeġenera wara l-pubertà, u twassal għal tnaqqis fiċ-ċelloli T. Il-Professur Ryo Yasube tal-Università tax-Xjenza ta’ Tokyo fil-Ġappun, li ilu jistudja l-immunoloġija, qal, “L-akbar raġuni għat-tnaqqis fl-immunità hija ż-żieda fl-età.” Wara li l-immunità tal-ġisem tilħaq il-quċċata tagħha fl-età ta’ 20 sena, is-sistema immuni gradwalment tinżel bl-età; fl-età ta’ 40 sena, l-immunità hija biss nofs il-quċċata tagħha, u fl-età ta’ 70 sena, hija biss 1/10 tal-quċċata tagħha. Il-ħażna taċ-ċelloli immuni tgħin biex tintervjeni fil-proċess tat-tnaqqis tas-sistema immuni.
Ċ. Prevenzjoni ta' mard ikkawżat mit-tnaqqis tas-sistema immunitarja
L-iżvilupp ta’ ħafna mard huwa relatat mill-qrib mat-tnaqqis tas-sistema immunitarja. Minħabba t-tnaqqis tas-sistema immunitarja fix-xjuħija, l-anzjani huma suxxettibbli għal mard ta’ immunodefiċjenza bħal infezzjonijiet, mard awtoimmuni, u kanċer. Għalhekk, xi studjużi jqisu t-tixjiħ bħala “marda immuni epidemika”. Waħda mill-konsegwenzi serji tat-tnaqqis tas-sistema immunitarja hija li l-“għajnejn xjuħ” jiżbaljaw it-tessuti jew iċ-ċelloli normali għall-għadu u jattakkaw dawn it-tessuti, u jikkawżaw infjammazzjoni u ħsara, li tirriżulta f’mard awtoimmuni bħall-artrite rewmatojde u l-lupus eritematosu sistemiku. Il-ħażna taċ-ċelloli immuni u r-“riforniment” tas-sistema immunitarja f’kull ħin jistgħu jgħinu fil-prevenzjoni ta’ dawn il-mard ikkawżati mit-tnaqqis tas-sistema immunitarja.
D. Jikkontrobatta t-tixjiħ tal-ġisem minħabba tnaqqis fil-funzjoni immuni
Ix-xjentisti sabu li t-tnaqqis fil-funzjoni immuni huwa relatat mat-tixjiħ tal-bniedem, u għalhekk ipproponew it-teorija immuni tat-tixjiħ. Il-funzjoni tas-sistema immuni tonqos bl-età, u meta tilħaq l-età avvanzata, ma tkunx tista' tagħraf bidliet sottili fiċ-ċelloli jew molekuli fil-ġisem, u anke jekk tista', ma tistax timmobilizza r-rispons immuni biex tneħħihom b'mod effettiv. B'riżultat ta' dan, l-inċidenza ta' ċelloli malinni tiżdied fix-xjuħija. Barra minn hekk, it-tnaqqis fil-funzjoni immuni jwassal għal dgħufija tal-effett stimulanti tas-sistema immuni fuq is-sistemi nervużi u endokrinali, li jirriżulta fi tnaqqis fiċ-ċelloli tan-nervituri, telf ta' memorja, rispons aktar bil-mod, funzjoni ta' stress imnaqqsa, u atrofija u funzjoni mnaqqsa tat-testikoli maskili u l-ovarji femminili, fost sinjali oħra tat-tixjiħ tal-bniedem. Taħżen iċ-ċelloli immuni, timlahom meta jkun meħtieġ, ittejjeb il-funzjoni immuni, toqtol u tneħħi ċ-ċelloli malinni, iċ-ċelloli senexxenti, u ċ-ċelloli mejta, u b'hekk tikseb l-iskop ta' kontra t-tixjiħ.
Għaliex iċ-ċelloli immuni huma maħżuna f'kaxxi tal-friża?
A. Allokazzjoni raġonevoli
Ħażna ta 'ċelluli immuni tad-demm periferali kollezzjoni waħda tad-demm hija ġeneralment 150-200ml, wara s-separazzjoni u l-purifikazzjoni tal-komponenti huma prinċipalment limfoċiti, numru żgħir ta' monoċiti u granuloċiti, eċċ., Ir-rata medja ta 'rkupru ta' madwar 80%, il-bniedem normali il-limfoċiti huma ġeneralment 1 × 10^6 ~ 2 × 10^6 / ml, għalhekk iċ-ċelluli immuni finali jistgħu jiġu iżolati madwar 1.5 × 10^8 ~ 3 × 10^8 8, jiġifieri, 1.6 × 10^7 sa 3.3 × 10 ^ 7 ċelluli għal kull tubu iffriżar speċifikazzjoni.
L-applikazzjonijiet attwali tat-teknoloġija taċ-ċelluli immuni jinkludu prinċipalment CIK, NK, NKT, CTL, CAR-T, CAR-NK, eċċ In-numru ta 'ċelluli meħtieġa għal applikazzjoni waħda huwa madwar 30 miljun, jiġifieri, in-numru ta' tubi ta 'applikazzjoni huwa 1 sa 2. 9 tubi jistgħu jissodisfaw bis-sħiħ l-applikazzjoni tal-kultura taċ-ċelluli għal 3 sa 4 darbiet ta 'kors ta' trattament.
B. Ġestjoni faċli
It-tubi lijofilizzati li fihom iċ-ċelloli ma jistgħux jitqiegħdu direttament fin-nitroġenu likwidu u jeħtieġu spacer u apparat ta' appoġġ bejniethom – a kaxxa tal-friża. Il-mudell konvenzjonali ta kasett tal-lijofilizzazzjoni hija kaxxa kwadra 9 × 9, fejn 9 tubi ta 'ċelloli jikkorrispondu għal kolonna waħda għal kampjun wieħed, li huwa wkoll konvenjenti għall-ġestjoni u l-użu fil-futur.
C. Naqqas l-iskart u r-riskju
Il-kapaċità ta 'tubu ta' lajofilizzazzjoni waħda hija ffissata, u ftit wisq tubi ta 'lijofilizzazzjoni jistgħu jirriżultaw f'ħafna ċelluli f'tubu wieħed meta n-numru ta' ċelloli jiġi applikat li jwassal għal skart taċ-ċelluli, u ċ-ċelloli b'densità ta 'lyophilization wisq huma fi stat ifqar wara risuxxitazzjoni u n-numru ta 'applikazzjonijiet taċ-ċelluli jitnaqqas. Wisq tubi ta ' lajofilizzazzjoni għal darb'oħra jagħmlu n-numru ta ' ċelluli f'tubu wieħed insuffiċjenti għall-applikazzjoni, u b'hekk jeħtieġu risuxxitazzjoni multipli, u wisq soluzzjoni ta ' lajofilizzazzjoni se jwassal għal rkupru aktar baxx u wkoll skart taċ-ċelluli. Fl-istess ħin, wisq tubi lajofilizzazzjoni jfissru wisq kuntatt, li għandu t-tendenza li jżid ir-riskju ta 'kontaminazzjoni waqt operazzjonijiet ta' risuxxitazzjoni. Għalhekk, huwa aħjar li tapplika 1 sa 2 tubi għal kull risuxxitazzjoni u li tagħmel użu sħiħ miċ-ċelloli.
Karatteristiċi tal-kaxxi tal-friża
a. Iż-żamma tal-kampjuni tiegħek siguri
b. Ġestjoni awtomatizzata tal-kampjuni
ċ. Faċli biex taqbad
d. Għażliet aktar konvenjenti
e. Faċli biex tużah
f. Ħieles mill-alkoħol u sustanzi likwidi oħra
g. Spiża aktar baxxa meta mqabbla ma' tagħmir ta' liofilizzazzjoni bbażat fuq l-alkoħol
h. Proporzjon ogħla ta' rkupru taċ-ċelluli u vijabbiltà taċ-ċelluli
i. Riproduċibbiltà tajba
j. Faċli biex tużah, faċli biex tistandardizza l-operazzjoni
k. Materjali differenti bħal kaxxi tal-liofilizzazzjoni tal-plastik u tal-karta għal ħażna fit-tul jew għal żmien qasir.
l. Identifikazzjoni tal-post fuq l-għatu tal-kaxxi kollha liofilizzati.
m. Kaxxi tal-plastik li jistgħu jiġu awtoklavati u użati fil-medda ta' temperatura minn -196°C sa +121°C.
n. Diviżorji u toqob tal-ventilazzjoni fil-qiegħ tal-kasett tal-kaxxa tal-liofilizzazzjoni għall-ħruġ tal-likwidu u ċ-ċirkolazzjoni tal-arja.
o. Ipprovdi varjetà ta' speċifikazzjonijiet, bħal 81 toqba ta' 2 pulzieri, 100 toqba ta' 2 pulzieri, eċċ.
Kif twettaq il-krijopreservazzjoni taċ-ċelluli?
Il-krijopreservazzjoni taċ-ċelloli hija teknika għall-ħażna taċ-ċelloli f'ambjent ta' temperatura baxxa biex jitnaqqas il-metaboliżmu taċ-ċelloli u jinkiseb ħażna fit-tul. Fil-biċċa l-kbira tal-linji taċ-ċelloli, iċ-ċelloli jakkumulaw bidliet hekk kif jixjieħu u jevolvu, li jirriżultaw f'"drift tal-kultura" fenotipiku u ġenotipiku, u l-immaniġġjar xieraq u l-kundizzjonijiet xierqa tal-iffriżar matul il-proċess tal-iffriżar jistgħu jnaqqsu l-bidla jew it-telf tal-karatteristiċi ċellulari u jservu bħala għodda ta' konservazzjoni taċ-ċelloli. Għalhekk, l-iffriżar xieraq u ta' suċċess għandu rwol importanti ħafna fl-applikazzjoni fit-tul taċ-ċelloli.
A. Kultura xierqa u ġbir ġentili taċ-ċelluli
Iċ-ċelloli għandhom ikunu fl-aħjar kondizzjoni ta 'tkabbir (f'fażi logaritmika jew esponenzjali) qabel il-liofilizzazzjoni, u idealment, il-medium għandu jinbidel 24 siegħa qabel il-ħsad. Huwa rrakkomandat li l-kulturi jiġu ttestjati għal kontaminanti mikrobjali, speċjalment mycoplasma, biex jiġi żgurat li ċ-ċelloli jkunu ħielsa minn kwalunkwe kontaminazzjoni. Matul il-ġbir taċ-ċelluli, manipulazzjonijiet sperimentali għandhom ikunu kemm jista 'jkun ġentili biex tiġi evitata l-ħsara taċ-ċelluli.
B. Protettiv xieraq minn temperatura baxxa
Bħalissa, it-teknika l-aktar użata għall-krijopreservazzjoni taċ-ċelluli hija l-krijopreservazzjoni tan-nitroġenu likwidu, li prinċipalment juża metodu ta 'iffriżar bil-mod b'ammont xieraq ta' aġent protettiv biex jiffriża ċ-ċelloli u jnaqqas il-ħsara liċ-ċelloli matul il-proċess tal-iffriżar. Meta ċ-ċelloli jiġu ffriżati direttament mingħajr ebda aġent protettiv, l-ilma ġewwa u barra ċ-ċelloli se jifforma malajr kristalli tas-silġ, li jikkawżaw serje ta 'reazzjonijiet avversi.
Il-polivinilpirrolidon, l-etilen glikol, il-metanol, u l-metil aċetamide huma kollha krijoprotettanti. L-aktar komuni fil-krijopreservazzjoni taċ-ċelloli huma d-dimetil sulfossidu (DMSO) u l-gliċerol, li t-tnejn għandhom piżijiet molekulari żgħar, solubilità għolja, jippenetraw iċ-ċelloli faċilment, ibaxxu l-punt tal-iffriżar, itejbu l-permeabilità tal-membrani taċ-ċelloli għall-ilma, u kruċjalment, mhumiex tossiċi b'mod sinifikanti għaċ-ċelloli. Il-konċentrazzjoni tas-soltu tad-DMSO hija 5 – 10% (v/v), u l-konċentrazzjoni ottima tvarja skont il-linja taċ-ċelloli. Il-konċentrazzjoni finali tal-gliċerol fil-mezz tal-iffriżar hija 5 – 15%, għal darb'oħra, il-konċentrazzjoni ottima tiddependi fuq il-linja taċ-ċelloli. Biex tittejjeb is-sopravivenza taċ-ċelloli li huma aktar diffiċli biex jiġu ppreservati, il-konċentrazzjoni tas-serum fil-mezz tal-preservazzjoni tista' tiżdied b'mod fakultattiv meta jiġu ffriżati. Għal krijopreservazzjoni taċ-ċelloli aktar mgħaġġla u stabbli, soluzzjoni ta' krijopreservazzjoni taċ-ċelloli tkun għażla tajba. Mhi meħtieġa l-ebda preparazzjoni, żid biss l-ammont xieraq ta' soluzzjoni ta' krijopreservazzjoni direttament maċ-ċelloli, u jista' jkollok ċelloli b'vijabbiltà għolja b'operazzjoni sempliċi.
Ċ. Veloċità baxxa tal-iffriżar
L-iffriżar bil-mod huwa importanti ħafna għall-irkupru tal-vijabbiltà taċ-ċelloli. Għal ħafna ċelloli tal-annimali, tnaqqis ta' -1 sa -3°C kull minuta jippermetti liċ-ċelloli jadattaw aħjar għall-istat iffriżat. Metodu komuni użat fil-biċċa l-kbira tal-laboratorji llum huwa t-tkessiħ bil-gradjent: 30 minuta f'4°C, imbagħad -20°C għal sagħtejn, segwit minn iffriżar matul il-lejl fi friġġ ta' -80°C, u trasferiment tat-tubi għal tank tan-nitroġenu likwidu l-għada għal ħażna fit-tul. Kassett tal-liofilizzazzjoni taċ-ċelloli li jista' jerġa' jintuża jista' jiffranka l-ħin tat-trasferiment ripetut taċ-ċelloli diversi drabi billi jpoġġi t-tubi tal-liofilizzazzjoni taċ-ċelloli ppreparati fil-kasett u jittrasferihom għal tank tan-nitroġenu likwidu direttament wara l-lejl f'-80°C. Irrispettivament mill-metodu ta' liofilizzazzjoni użat, huwa importanti li t-trasferiment tal-post tal-ħażna jsir malajr, u huwa rakkomandat li t-tubi tal-liofilizzazzjoni jitqiegħdu fis-silġ niexef f'temperatura kostanti biex jiġi evitat l-effett tal-bidliet fit-temperatura fuq il-vijabbiltà taċ-ċelloli waqt it-trasferiment.
D. Ħażna kontinwa f'temperatura baxxa
It-temperatura taċ-ċellula għandha dejjem tinżamm taħt -130 ° C għall-aqwa sopravivenza. Jekk it-temperatura tal-ħażna ma tkunx ikkontrollata tajjeb, ir-rata ta 'sopravivenza tonqos maż-żmien. Huwa rakkomandat li ċ-ċelloli jinħażnu taħt kundizzjonijiet ta 'nitroġenu likwidu għal perjodu twil ta' żmien. L-issikkar tat-tank tan-nitroġenu likwidu u l-adegwatezza tal-volum tan-nitroġenu likwidu jeħtieġ li jiġu kkontrollati manwalment perjodikament biex tiġi evitata ħsara liċ-ċelloli minħabba l-kundizzjonijiet tal-ħażna.
Kif tixtri kaxxi tal-friża?
Jekk inti interessat tagħna Kaxxi tal-Friżer jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.