ANTITECK - Ipprovdi Tagħmir tal-Lab, Awtomazzjoni Industrijali, Moulding Mediku u Soluzzjoni Turnkey.
tagħmir-bijoloġija-laboratorju

Kif Aħsel ELISA Microplate?

Posted fuq Ottubru 29, 2022 by Zeng YingELISA

Katalgu: Tagħmir Għall-Elisa Kit Manufacturing

ELISA Microplate - taffettwa direttament ir-riżultati ELISA

Wieħed mill-punti kritiċi fl-ottimizzazzjoni ELISA huwa l-ħasil tal- Mikroplate ELISA. il-pass tal-ħasil tal-pjanċa ELISA inaqqas is-sinjal fl-isfond ikkawżat minn antikorpi mhux marbuta, u b'hekk iżid il-proporzjon tas-sinjal għall-ħoss tal-analiżi. Il-ħasil bejn il-gradi jiżgura li jinżammu biss avvenimenti vinkolanti speċifiċi, li jiġġenera sinjal fl-aħħar pass. Ħasil ​​inadegwat jista 'jwassal għal diskrepanzi u sfond għoli, li jirriżulta f'riżultati subottimali.

Meta tagħmel esperimenti ELISA, hemm żewġ modi kif taħsel il-mikroplates ELISA: metodu manwali aħsel pjanċi ELISA u woxers tal-pjanċa biex taħsel pjanċi ELISA. M'hemm l-ebda differenza essenzjali bejn it-tnejn, sakemm l-operazzjoni tkun konformi mar-rekwiżiti, it-tnejn jistgħu jiksbu riżultati korretti u affidabbli.

Ħasil ​​manwali tal-mikroplate ELISA

riżultat-ELISA
riżultat-ELISA
Sealer tal-pjanċa ELISA, Pjanċa PCR Siġillatur

Ħasil ​​manwali Pjanċa ELISA fattur uman huwa relattivament kbir, l-esperimentatur għandu jkun esperjenzat, in-numru ta 'ħasliet li jkun biżżejjed, l-impatt mhuwiex kbir wisq, li żżid l-ammont ta' soluzzjoni tal-ħasil għal bjar ta 'reazzjoni sħaħ biss bħala limitu biex jipprevjeni l-ħalq tal-pori b'enzima ħielsa fallew biex taħsel, filwaqt li tevita l-cross likwidu bejn il-pori u t-toqba. Huwa wkoll importanti ħafna li jinżamm niexef wara l-ħasil, inkella, huwa faċli li tikkawża pożittivi foloz. Wara kull ħasla, bil-mod pat il-pjanċa nixxef fuq karta assorbenti, u pat il-pjanċa vertikalment biex tevita infezzjoni inkroċjata. Il-forza m'għandhiex tkun vjolenti wisq biex tevita li l-kumpless antiġen-antikorp jinqala '; il-karta assorbenti għandha tintuża darba, u karta assorbenti li mhix faċli biex titfa 'fdalijiet għandha tintuża kif xieraq. Il-konjugat ta 'l-enżima mhuwiex reżistenti għat-tnixxif, speċjalment f'temperaturi ogħla, huwa aktar probabbli li jkun inattivat, għalhekk il-pjanċa ta' reazzjoni mnixxfa għandha tkun patted biex tqassar il-ħin ta 'espożizzjoni fl-arja kemm jista' jkun, aktar ma jkun itwal il-ħin, iktar ikun baxx il-valur tal-assorbiment.

It-tindif manwali tal-mikroplates tal-assaġġ immunosorbenti marbuta mal-enżimi jitwettaq kemm b’metodi ta’ immersjoni kif ukoll ta’ flow-through

Immersjoni

1. Aspira jew ħawwad nixxef is-soluzzjoni tar-reazzjoni fil- Mikroplate ELISA.

2. Aħsel il-pjanċa darba b'soluzzjoni tal-ħasil (wara li timla l-bjar bis-soluzzjoni tal-ħasil, imbagħad ħawwad).

3. Xarrab, jiġifieri imla l-bjar b'soluzzjoni tal-ħasil, poġġi għal 1 ~ 2 minuti, ħawwad b'mod intermittenti, il-ħin tat-tixrib m'għandux jitqassar arbitrarjament.

4. Ġbid nixxef il-likwidu fit-toqba. Ġbid niexef għandu jkun bir-reqqa, pompa disponibbli jew Pompa tal-vakwu ġbid, jista 'wkoll jitħawwad barra l-likwidu f'xugaman nadif jew karta assorbenti pat dry.

5. Irrepeti l-passi tat-tħaddim 3 u 4, aħsel 3 sa 4 darbiet (jew kif speċifikat fl-istruzzjonijiet). Fil-metodu indirett jekk l-isfond huwa ogħla, tista 'żżid in-numru ta' ħasliet jew testendi l-ħin tat-tixrib.
Il-pjanċa tat-titrazzjoni mikro tintuża l-aktar permezz tal-metodu tal-ħasil tal-immersjoni. Is-soluzzjoni tal-ħasil hija l-aktar buffer newtrali li fih deterġent mhux joniku. Il-kombinazzjoni ta 'trasportatur tal-polistirene u proteina hija idrofobika, u d-deterġent mhux joniku fih kemm gruppi idrofobiċi kif ukoll idrofiliċi, li l-gruppi idrofobiċi tagħhom huma kkombinati ma' gruppi idrofobiċi ta 'proteini permezz ta' bonds idrofobiċi, u b'hekk idgħajjef il-kombinazzjoni ta 'proteina u trasportatur ta' fażi solida, u bil-kombinazzjoni ta 'gruppi idrofiliċi u molekuli ta' l-ilma, il-proteina terġa 'lura għall-istat ta' soluzzjoni milwiema, u għalhekk hija separata mit-trasportatur tal-fażi solida.
Id-deterġent mhux joniku fis-soluzzjoni tal-ħasil huwa ġeneralment Tween 20, li l-konċentrazzjoni tiegħu tista 'tkun bejn 0.05% u 0.2%, ogħla minn 0.2%, tista' tagħmel l-antiġen jew l-antikorp inkapsulat fid-desorbiment tal-fażi solida u tnaqqas is-sensittività tal- test.

Tip ta 'flushing ta' l-ilma li jiċċirkola

Il-metodu tat-tlaħliħ tal-ilma li jiċċirkola inizjalment jintuża għall-ħasil ta 'trasportaturi ta' żibeġ żgħar, u s-soluzzjoni tal-ħasil hija biss ilma distillat jew saħansitra ilma tal-vit. Waqt il-ħasil, jitwaħħal apparat speċjali, sabiex iż-żibeġ żgħar jiġu rrumblati u mxerrda kontinwament taħt l-impatt ta 'ilma ġieri, u wara t-tlaħliħ kontinwu għal 2 minuti, il-likwidu jitbattal, u mbagħad jixxarrab f'ilma distillat għal 2 minuti u jitbattal. . It-tip ta 'tixrib huwa bħal banju tal-banju, it-tip tat-tlaħliħ tal-ilma huwa bħal doċċa, l-effett tal-ħasil tiegħu huwa aktar bir-reqqa, u wkoll sempliċi, veloċi.

L-esperimenti wrew li t-tip tat-tlaħliħ huwa applikabbli wkoll għall-ħasil ta 'pjanċi ta' mikrotitrazzjoni ELISA. Meta taħsel, ipprova żżid il-fluss tal-ilma jew iżżid il-pressjoni tal-ilma, ħalli l-ilma jolqot il-wiċċ tat-toqba tal-pjanċa, l-effett tal-ħasil huwa aħjar.

Washer tal-pjanċa għall-mikroplate ELISA

pjanċa ELISA
pjanċa ELISA

Il-washer tal-pjanċa taħsel pjanċi ELISA bi ftit fatturi umani, kundizzjonijiet veloċi u kostanti, iżda għandhom jiġu nnutati t-tliet punti ewlenin li ġejjin meta tuża l-washer tal-pjanċa biex taħsel il-pjanċi.

Parametri għall-ħasil tal-pjanċi ELISA

Il-parametru ewlieni għall-ħasil tal-mikroplates ELISA huwa l-volum tal-ħasil. Il-washer tal-pjanċa awtomatika tagħti s-soluzzjoni tal-ħasil. Jekk esperjenzajt sfond għoli qabel, allura toqgħodx lura milli tissettja l-volum tal-ħasil għal għoli, preferibbilment ogħla mill-volum tal-pakkett. Ftit wisq soluzzjoni tal-ħasil se tħalli porzjon tal-wiċċ analizzat mhux maħsul, u b'hekk iżid b'mod sinifikanti l-isfond. Il-volum tal-ħasil għandu jkun l-istess għall-bjar tar-reazzjoni kollha.

Numru ta' ċikli tal-ħasil fil-pjanċa ELISA

Il-parametru ewlieni li jaffettwa l-effettività tal-ħasil tal-mikroplates ELISA huwa l-ammont ta 'ċikli tal-ħasil. Naturalment, iktar ma jkun għoli n-numru ta’ ħasliet, iktar ikun baxx l-isfond. Madankollu, wisq ħasliet jistgħu jnaqqsu l-intensità tas-sinjal u jagħmluha diffiċli għall-assaġġ. Hija prattika komuni li tirrepeti l-ħasil tliet darbiet wara kull inkubazzjoni ta 'antikorp jew antiġen. Madankollu, b'mod ġenerali, pjanċi mgeżwra jeħtieġu inqas ħasliet minn pjanċi mgeżwra mill-utent. Għal mikropjanċi ELISA miksija mill-utent, il-frekwenza tal-ħasliet għandha tiġi ottimizzata.

Mod ieħor biex tikkontrolla l-ammont u n-numru ta 'ħasliet huwa li żżid eċċess ta' soluzzjoni tal-ħasil. Tipikament, pjanċa ta '96-bir iżżomm 330 sa 460 µl kull bir. madankollu, xi woxers tal-pjanċa awtomatizzati jistgħu jiġu pprogrammati biex iqassmu ħafna aktar minn dan l-ammont ta 'soluzzjoni tal-ħasil, pereżempju 1 ml. kif tagħmel dan? Fil-fatt huwa pjuttost sempliċi: il-funzjoni ta 'aspirazzjoni tinxtegħel fl-istess ħin tat-tqassim. Fi kliem ieħor, hekk kif id-dispenser iqassam aktar likwidu, l-aspiratur ukoll jerdgħa l-likwidu. Din it-teknika żżid l-ammont ta 'ħasil, iżda mingħajr ma tinxtered fi bjar oħra.

Aspirazzjoni ta' mikropjanċi ELISA

Kit tat-test ELISA
Kit tat-test ELISA

Hemm ukoll numru ta 'parametri li jaffettwaw l-effettività tal-pass tal-ħasil ta' pjanċa ELISA. Dawn il-parametri jinkludu l-għoli tal-aspirazzjoni u l-pożizzjoni tal-aspirazzjoni, li t-tnejn jistgħu jiġu aġġustati biex inaqqsu l-isfond (volum residwu) u l-varjazzjoni.

Likwidi residwi fihom antiġeni jew antikorpi mhux marbuta, li jżidu s-sinjal fl-isfond. Iktar ma jkun żgħir il-volum residwu, inqas likwidu residwu hemm u l-inqas likwidu li jinterferixxi jiġi trasferit għall-pass li jmiss.

L-għoli tal-aspirat jista 'jaffettwa b'mod sinifikanti l-volum residwu; jekk id-distanza bejn il-ponta tal-ħasil u l-qiegħ tar-reazzjoni sew hija kemmxejn akbar, allura l-volum residwu jiżdied b'mod drammatiku. Bil-maqlub, jekk il-ponta tal-ħasil tkun ippressata sew mal-qiegħ tar-reazzjoni, allura wkoll tagħmel l-aspirazzjoni inqas effiċjenti u l-ammont residwu jiżdied.

Magni attwali għall-ħasil tal-pjanċi ELISA ġeneralment jużaw żewġ tipi ta 'rjus tal-ħasil: riġidi u li jżommu f'wiċċ l-ilma. Ir-ras tal-ġbid f'ras tal-ħasil li jżomm f'wiċċ l-ilma tista 'timxi liberament 'il fuq u' l isfel matul il-proċess tal-ħasil, filwaqt li ras tal-ħasil riġidu huwa ffissat fil-pożizzjoni xierqa. L-operazzjonijiet tal-ħasil b'irjus tal-ħasil riġidi huma aktar ikkumplikati biex jiġu ottimizzati minħabba li għandek bżonn taġġusta l-għoli tal-ġbid b'attenzjoni kbira. Jekk il-laboratorju tiegħek juża diversi pjanċi differenti, jista' jieħu ħafna ħin. Meta tuża ras tal-ħasil f'wiċċ l-ilma, il ponta tal-pipetta se tinżel sew fil-qiegħ tar-reazzjoni. L-aġġustament tal-għoli ma jkunx importanti ħafna, għalhekk ir-ras tal-ħasil tinżel fil-qiegħ.

Il-pożizzjoni tal-ġbid għandha wkoll effett importanti fuq il-volum residwu; jekk jintuża punt ta 'ġbid wieħed biss għal kull bir (li huwa komuni minħabba li huwa aktar mgħaġġel), allura l-pożizzjoni tal-ġbid jeħtieġ li tiġi ottimizzata. Il-post ottimali jiddependi fuq il-karatteristika tar-ras tal-ħasil, iżda bilkemm huwa fin-nofs tar-reazzjoni tajjeb, anke jekk dan huwa l-post default l-aktar komuni għall-ħasliet kollha. B'mod ġenerali, il-post ottimali huwa x'imkien bejn in-nofs tat-toqba u l-ħajt tat-toqba.

Il-forma tal-bjar tar-reazzjoni taffettwa wkoll l-ammont residwu. mikropjanċi b'qigħan f'forma ta' Ċ (qigħan ċatti b'kantunieri tondi) ġeneralment ikollhom ammonti residwi aktar baxxi minn dawk b'qiegħ ċatt b'kantunieri li jaqtgħu.

Prekawzjonijiet għall-ħasil tal-pjanċa ELISA

a. L-ammont ta 'injezzjoni likwida u l-ammont ta' likwidu residwu għandhom jiġu kkoreġuti kuljum, u l-ammont ta 'likwidu residwu wara l-ħasil m'għandux ikun akbar minn 2 μl.

b. Ibdel il-labra tal-aspirazzjoni miksura fil-ħin biex tevita li tagħmel ħsara lill-kisi tas-sottostrat.

c. Oqgħod attent biex taġġusta l-għoli tal-qatra tar-ras tal-aspirazzjoni għal manifatturi differenti ta 'pjanċi tal-enzimi biex tevita li l-labra tal-laħlaħ tiġġammja l-pjanċa.

d. Oqgħod attent biex taġġusta l-ammont ta 'soluzzjoni tal-ħasil, wisq soluzzjoni tal-ħasil se tfur u ftit wisq mhux se tikseb l-effett tal-ħasil.

e. Uża ilma distillat biex tlaħlaħ il-pipeline qabel ma tagħlaq il-magna biex tevita li l-materja kristallina tas-soluzzjoni tal-ħasil timblokka l-pipeline.

f. Huwa strettament ipprojbit li tħallat is-soluzzjonijiet tal-ħasil ta 'kits differenti.

konklużjoni

Sabiex tagħmel il - Pjanċa ELISA effett tal-ħasil aħjar, il-laboratorju jista 'juża taħlita ta' magna u metodu ta 'ħasil manwali, wara l-ħasil tal-magni u mbagħad pjanċa tal-ħasil manwali 1 sa 2 darbiet, jista' jikseb l-effett tal-ħasil ideali. Ir-riżultati huma garantiti!

Uża ilma distillat biex tlaħlaħ il-pipeline qabel ma tagħlaq il-magna biex tevita li l-materja kristallina tas-soluzzjoni tal-ħasil timblokka l-pipeline.

Huwa strettament ipprojbit li tħallat is-soluzzjonijiet tal-ħasil ta 'kits differenti.

Aħna nużaw cookies sabiex jagħtuk l-aħjar esperjenza possibbli fuq il-websajt tagħna. Billi tkompli tuża dan is-sit, taqbel mal-użu tagħna tal-cookies.
Aċċetta
Regoli tal-privatezza