Kolonna tal-Kromatografija
X'inhi l-kolonna tal-kromatografija?
Kolonna kromatografika jista 'jinqasam f'kolonna ppakkjata u kolonna b'tubu miftuħ. Ħafna kolonni kromatografiċi huma magħmula minn metall jew ħġieġ. Hemm forom ta 'tubi dritti, forom ta' tubi kkoljati, tubi f'forma ta 'U, u forom oħra. Il-kromatografija likwida normalment tuża kolonni ppakkjati. L-effett ta 'separazzjoni tal-kolonni kromatografiċi jiddependi fuq il-fażi stazzjonarja magħżula, kif ukoll il-preparazzjoni u l-kundizzjonijiet operattivi tal-kolonni.
Kromatografija huwa mezz ta 'separazzjoni u analiżi, u s-separazzjoni hija l-qalba, għalhekk il-kolonna, li hija responsabbli għas-separazzjoni, hija l-qalba tas-sistema kromatografika. Ir-rekwiżiti għall- kolonna kromatografika huma effiċjenza għolja fil-kolonna, selettività tajba, veloċità ta 'analiżi mgħaġġla, eċċ Kummerċjalment disponibbli għall-HPLC hija varjetà ta' ppakkjar tal-partikuli, bħal silika poruża u fażi marbuta mas-silika, alumina, mikrosferi ta 'polimeru organiku (inklużi reżini ta' skambju joniku), karbonju poruż , eċċ., Filwaqt li d-daqs tal-partiċelli tiegħu huwa ġeneralment 3,5,7,10μm, eċċ., Il-valur teoretiku tal-effiċjenza tal-kolonna jista 'jilħaq 5 ~ 160,000 / m. L-analiżi ġenerali teħtieġ biss 5000 effiċjenza tal-kolonna tan-numru ta 'pjanċi; analiżi omologu jista 'jkun twil sa 500; aktar diffikultà biex tissepara l-pari materjali jistgħu jintużaw sa 20,000 kolonna. Għalhekk, tul tal-kolonna ta 'madwar 10 ~ 30cm huwa ġeneralment biżżejjed għall-analiżi ta' taħlitiet kumplessi.
L-effiċjenza tal-kolonna hija affettwata minn fatturi ġewwa u barra l-kolonna, u biex tinkiseb l-aħjar effiċjenza tal-kolonna, flimkien ma 'volum żgħir mejjet barra l-kolonna, struttura ta' kolonna raġonevoli (li timminimizza l-volum mejjet barra s-sodda ppakkjata) u teknoloġija tat-tagħbija huma meħtieġa. Anke bl-aħjar teknika ta 'tagħbija, il-mili fil-parti ċentrali tal-kolonna u tul il-parti tal-ħajt huwa dejjem differenti. Il-parti ħdejn il-ħajt hija aktar laxka, aktar faċli biex tipproduċi fluss tat-trinka, u rata ta 'fluss aktar mgħaġġla, li taffettwa l-forma tal-fluss tal-aġent tat-tlaħliħ u twessa' l-faxxa spettrali, li hija l-effett tal-ħajt. Din iż-żona tal-ħajt tat-tubu hija madwar 30 darba l-ħxuna tad-daqs tal-partiċelli magħduda mill-ħajt tat-tubu 'l ġewwa. F'sistema ta 'kromatografija likwida ġenerali, l-effett tal-effett barra l-kolonna fuq l-effiċjenza tal-kolonna huwa ħafna akbar mill-effett tal-ħajt tat-tubu.
Anke bl-aħjar teknika ta 'tagħbija, il-mili fil-parti ċentrali tal-kolonna u tul il-parti tal-ħajt huwa dejjem differenti. Il-parti ħdejn il-ħajt hija aktar laxka, aktar faċli biex tipproduċi fluss tat-trinka, u rata ta 'fluss aktar mgħaġġla, li taffettwa l-forma tal-fluss tal-aġent tat-tlaħliħ u twessa' l-faxxa spettrali, li hija l-effett tal-ħajt. Din iż-żona tal-ħajt tat-tubu hija madwar 30 darba l-ħxuna tad-daqs tal-partiċelli magħduda mill-ħajt tat-tubu 'l ġewwa. F'sistema ta 'kromatografija likwida ġenerali, l-effett tal-effett barra l-kolonna fuq l-effiċjenza tal-kolonna huwa ħafna akbar mill-effett tal-ħajt tat-tubu.
Struttura tal-kolonna tal-kromatografija
Kolonna kromatografika consists of a column tube, pressure cap, ferrule (sealing ring), sieve plate (filtru plate), joint, screws, etc. The tubu tal-kolonna hija magħmula l-aktar minn azzar li ma jissaddadx, u meta l-pressjoni ma tkunx ogħla minn 70 kg/cm2, jistgħu jintużaw ukoll tubi tal-ħġieġ jew tal-kwarz b'ħitan ħoxnin, u l-ħajt ta 'ġewwa tat-tubu jeħtieġ grad għoli ta' finitura. Sabiex ittejjeb l-effett tal-kolonna, u tnaqqas l-effett tal-ħajt, illustrar tal-ħajt tal-kolonna tal-istainless steel. Hemm ukoll nies fil-ħajt tal-kolonna tal-istainless steel miksi bil-plastik tal-fluworin biex itejbu l-finitura tal-ħajt ta 'ġewwa, l-effett huwa l-istess bħall-illustrar. Hemm ukoll l-użu ta 'silika mdewba jew inforra tal-ħġieġ, għal kolonni ta' tubi fini. Il-ġonot tal-kolonna fiż-żewġt itruf tal-kolonna kromatografika huma mgħammra bi pjanċa tal-għarbiel ġewwa, li hija azzar inossidabbli sinterizzat jew liga tat-titanju b'apertura ta '0.2 ~ 20μm (5 ~ 10 & μm), skond id-daqs tal-partiċelli tal-mili, sabiex biex jipprevjeni li l-mili milli joħroġ.
Pakketti għall-kolonna kromatografika
Ippakkjar komuni tal-kolonna: kolonna tal-karbonju 18 [1] (ODS/C18), kolonna tal-karbonju 8 (MOS/C8), kolonna tal-karbonju 6 (Hexyl/C6), kolonna tal-karbonju 4 (Butyl/C4), kolonna tal-karbonju 1 (Methyl/C1) ), kolonna ta 'skambju anjoniku (SAX), kolonna ta' skambju ta 'katjoni (SCX), kolonna ta' fenil (Phenyl), kolonna amino (Amino/NH2), kolonni bbażati fuq iċ-ċjanur (Cyano/CN/Nitril).
Ippakkjar komuni tal-kolonna ta' assorbiment: kolonna tal-ġel tas-silika.
Tip ta' kolonna tal-kromatografija
Kolonna kromatografika jistgħu jinqasmu f'analitiċi u preparattivi, skont l-użi tagħhom u speċifikazzjonijiet ta 'daqs differenti kif ġej.
a. Conventional analytical column (constant column), inner diameter 2~5mm (commonly used 4.6mm, domestic 4mm and 5mm), column length 10~30cm.
b. Narrow diameter column (narrow bore, also known as fine tube diameter column, semi-microcolumn), inner diameter 1 ~ 2mm, column length 10 ~ 20cm.
c. Capillary column (also called microcolumn), inner diameter 0.2~0.5 mm.
d. Semi-preparative columns, inner diameter >5mm.
e. Laboratory preparation columns with inner diameter of 20~40mm and column length of 10~30cm.
f. The internal diameter of production preparation columns can reach several tens of centimeters. The column inner diameter is generally determined based on the column length, packing particle size and folded flow rate, with the aim of avoiding the tube wall effect.
Użu tal-kolonna tal-kromatografija
Kromatografija ta' skambju joniku
A. Installazzjoni
a. First, you should confirm that the connectors and piping of the column and instrument are matched. To reduce the dead volume, use a line with the smallest possible inner diameter for the connection between the injection valve, column, and detector, and control the length of the connection line between the injector, column, and detector. Before installing the column, confirm that the solvent in the flow path system is in order. For the analysis of more complex samples, it is recommended to install a protective column.
b. To make the best connection between the column and the instrument system, you should try to use the screw cap and tapered connector that matches the column interface. If the original connector has been matched with other types of columns for a long time, it is recommended that the matching should be checked before connecting the new column to avoid causing damage to the column or leakage caused by the column mismatch.
c. Use universal fittings, which only need to be tightened by hand without a specific wrench, using a pressure of 5000psi; the use of temperature must not exceed 100 ℃.
B. Mobile phase
a. Uża a fażi mobbli ta' mill-inqas 20 darba l-volum tal-kolonna biex tequilibra bis-sħiħ il-kolonna qabel ma twettaq l-iskoperta tal-kampjun. Dejjem uża solvent ta' grad kromatografiku għall-fażi mobbli. Jekk tuża l-buffer tal-fażi milwiema għandha tkun ippreparata kuljum biex iżżomm frisk biex tevita l-produzzjoni batterjali.
b. The mobile phase should be filtered through a microporous membrane before use to eliminate damage to the chromatographic system and column from particles in the mobile phase. The buffer should be re-filtered after mixing with other mobile phases to avoid new precipitation caused by changes in solubility. Pure water should not be used as the mobile phase to rinse the C18 column to avoid damage to the column performance (adding 5% organic solvent to rinse the column can achieve the effect of cleaning the buffer salt at the same time. (It can also make the column easier to balance).
c. The mobile phase needs to be degassed and used to avoid the improper operation of the pump and detector due to air bubbles. If the mobile phase used in the test is significantly different from the mobile phase used in the preservation of the column, it should be equilibrated using the form of overdistribution. Avoid damage to the column and instrument system due to sudden changes in the mobile phase that cause excessive increases in column pressure or crystallization of mobile phase buffer salts. Normal phase columns require a longer equilibration time than reversed phase columns.
C. Sample preparation
a. The sample should be dissolved in a solvent that is mutually soluble with the mobile phase whenever possible. Unless otherwise specified, the resolution of the column will likely be reduced if a strong solvent is used to dissolve the sample.
b. The sample solution should be pre-filtered using a needle filter before feeding the sample. Frequent changes in mobile phase composition will accelerate the reduction of column efficiency.
c. The chromatographic column is loaded by a high-pressure homogenization method and can withstand high pressure. In order to obtain the best separation effect, please do not exceed 200kgf when using, and avoid sudden pressure rise or change, otherwise, it will cause the destruction of silica packing and reduce the service life of the column. The maximum operating temperature should not exceed 60°C unless otherwise required.
D. Save operation
a. If the mobile phase contains acids or inorganic salts, it should first be rinsed off with deionized water (20 times the column volume). Then the column is preserved with 100% acetonitrile or methanol. Finally, seal the column with its joints and store it in a stable environment.
b. The column should be avoided direct mechanical impact or dropping to avoid the degradation of column performance.
E. Regeneration of chromatographic columns
Il-kolonni ġew laħlaħ b'solvent ekwivalenti għal 20 darba l-volum tal-kolonna fl-ordni li ġejja, u huwa rakkomandat li tlaħlaħ fid-direzzjoni tal-vleġġa tal-kolonna, mingħajr backflushing jekk possibbli. Is-sekwenza ta' referenza tas-solventi użati fit-tlaħliħ hija ilma, metanol, kloroform, u isopropanol.
How to buy chromatography column?
Jekk inti interessat tagħna Kolonna tal-Kromatografija jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.