Midja tal-Kultura Ċellulari

kontenut
1. X'inhu l-midja tal-kultura taċ-ċelluli?
    1.1 Kompożizzjoni u rwol tal-midja tal-kultura taċ-ċelluli
2. Tip ta' medja ta' kultura taċ-ċelluli
    2.1 Medju taċ-ċelluli
3. Kif tixtri midja tal-kultura taċ-ċelluli?

Mezz tal-kultura taċ-ċelluli huwa kemm il-materjal bażiku għall-forniment tan-nutrizzjoni taċ-ċelluli kif ukoll il-promozzjoni tar-riproduzzjoni u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli f'ċelloli kkultivati, kif ukoll l-ambjent tal-għajxien għat-tkabbir u r-riproduzzjoni ta 'ċelloli kkultivati.

Amino aċidi huma l-unitajiet bażiċi tal-proteina. Tipi differenti ta 'ċelluli għandhom rekwiżiti differenti għall-aċidi amminiċi, iżda hemm diversi aċidi amminiċi li ċ-ċelloli ma jistgħux jissintetizzaw waħedhom u għandhom jiddependu fuq il-mezz tal-kultura biex jipprovduhom, li jissejħu aċidi amminiċi essenzjali. Fost dawn, il-glutamina hija aċidu amminiku essenzjali għas-sintesi ta 'aċidi nuklejċi u proteini, u fin-nuqqas ta' glutamina, iċ-ċelloli jikbru ħażin u jmutu. L-aċidi amminiċi essenzjali jinkludu L-glutamina, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L-methionine, L-phenylalanine, L-threonine, L-tryptophan, u L-valine.

Sustanzi bijoloġikament attivi li jżommu t-tkabbir taċ-ċelluli u għandhom rwol regolatorju u ta 'kontroll fil-metaboliżmu taċ-ċelluli. Fil-kultura taċ-ċelluli, għalkemm is-serum huwa sors importanti ta 'vitamini, ħafna midja tal-kultura huma supplimentati b'varjetà ta' vitamini biex ikunu adattati għat-tkabbir ta 'firxa usa' ta 'linji taċ-ċelluli.
Vitamini li jinħallu fix-xaħam bħal A, D, E, u K.

Vitamini li jinħallu fl-ilma bħal B1, B2, B6, B12, aċidu pantoteniku, aċidu foliku, bijotina, C, niacinamide, eċċ.

Ħafna vitamini huma involuti fil-kompożizzjoni tal-gruppi attivi ta 'diversi enzimi, li mingħajrhom l-enzimi jkunu inattivi u l-attività metabolika ma sseħħx.

VA huwa trasportatur ta 'gruppi oligosakkaridi fis-sintesi ta' glikoproteini fiċ-ċelloli u għandu rwol importanti fiż-żamma taċ-ċelloli epiteljali. vD huwa involut fir-regolazzjoni tal-assorbiment tal-kalċju. ve huwa antiossidant li jipprevjeni l-ossidazzjoni ta 'aċidi grassi mhux saturati fil-fosfolipidi li jiffurmaw membrani bijoloġiċi. Id-defiċjenza ta' vK tikkawża prothrombin baxx u ħin fit-tul tat-tagħqid.
L-aċidu foliku huwa materja prima importanti għas-sintesi tat-tetrahydrofolate, li għandu rwol importanti fil-bijosintesi tal-aċidi nuklejċi u l-bijosintesi tal-proteini.

Il-bijotina hija komponent ta 'numru ta' carboxylases speċifiċi involuti fil-proċess tal-metaboliżmu taz-zokkor u s-sintesi tal-aċidu xaħmi.

Karboidrati huma s-sors ewlieni ta 'enerġija għat-tkabbir taċ-ċelluli, li wħud minnhom huma komponenti tas-sintesi ta' proteini u aċidi nuklejċi. Dawk ewlenin huma glukożju, ribożju, deoxyribose, sodium pyruvate, u aċetat.

Bażiku inorganiku joni bħal sodju, potassju, manjesju, kalċju u fosfru, huma meħtieġa għall-kompożizzjoni taċ-ċelluli u huma involuti fil-metaboliżmu taċ-ċelluli.

Il-funzjoni ewlenija tal-melħ inorganiku fil-mezz tal-kultura hija li tgħin liċ-ċelloli jżommu l-omeostasi tal-pressjoni osmotika. Barra minn hekk, billi tipprovdi joni tas-sodju, tal-potassju u tal-kalċju, tgħin liċ-ċelloli jirregolaw il-funzjoni tal-membrana taċ-ċelluli. L-osmolarità tal- mezz tal-kultura taċ-ċelluli huwa fattur importanti ħafna, u ċ-ċelloli normalment jistgħu jittolleraw 260 mOsm/kg - 320 mOsm/kg. L-osmolarità tal-medja tal-kultura standard tvarja f'din il-medda. Nota Speċjali: Iż-żieda ta' sustanzi oħra mal-medium tal-kultura tista' tbiddel b'mod sinifikanti l-osmolarità tal-mezz tal-kultura, speċjalment dawk maħlula f'aċidi jew bażijiet qawwija.

Na+ huwa l-aktar katjoni importanti fil-fluwidu extraċellulari u għandu rwol deċiżiv fiż-żamma ta 'pressjoni osmotika kostanti. k+ huwa prinċipalment imqassam fil-fluwidu intraċellulari, u k+ intraċellulari huwa meħtieġ għall-attivazzjoni ta 'ċerti enzimi, u huwa wkoll estremament importanti fir-regolazzjoni tal-bilanċ aċidu-bażi tal-ambjent intraċellulari. ca2+ jintuża fil-fluwidu extraċellulari biex jaderixxi ċelluli fit-tessuti ma 'xulxin, u huwa involut f'ħafna attivitajiet fiżjoloġiċi ċellulari importanti fiċ-ċellula. Mg2+ huwa komponent importanti tal-matriċi interċellulari u huwa importanti għall-irbit stabbli taċ-ċelloli ma 'xulxin. Il-funzjonijiet tal-komposti tal-fosfru għar-regolamentazzjoni tal-metaboliżmu tal-materjal ċellulari u l-funzjonijiet fiżjoloġiċi huma estensivi ħafna u indispensabbli.

Hemm ħafna tipi ta 'klassiku midja kulturali, fosthom DMEM, RPMI 1640, MEM, u DMEM/F12 huma l-aktar midja użata. Oħrajn bħal M199, IMDM, u L15 medium huma wkoll użati għall-kultura ta 'ċerti ċelloli. Il-karatteristiċi u l-applikazzjonijiet speċifiċi tagħhom huma kif ġej.

Bażiku Eagle medju, iddisinjat minn Eagle fl-1955, BSS + 12 amino acids + glutamina + 8 vitamini. Huwa sempliċi, faċli biex iżżid, u adattat għal diversi linji taċ-ċelluli li jgħaddu u għal riċerka speċjali. Il-varjetajiet ta 'mezzi ta' kultura taċ-ċelluli mtejba fuq din il-bażi huma MEM, DMEM, IMDM, eċċ.

Medju tal-kultura taċ-ċelluli MEM, Magħruf ukoll bħala mezz ta 'limitu baxx ta' Eagle (Medju Essenzjali Minimu), ġie modifikat mill-mezz bażiku ta 'Ajkla (BME) fl-1959. Ħassar il-lisina u l-bijotina, il-konċentrazzjoni miżjuda ta' aċidu amminiku hija adattata għat-tkabbir ta 'ħafna tipi ta' monosaffi taċ-ċelluli , u għandha varjetajiet awtoklavabbli, li hija waħda mill-aktar mezzi bażiċi u ppruvati ħafna. Madankollu, minħabba l-kompożizzjoni limitata tiegħu ta 'nutrijenti, mhuwiex neċessarjament l-aktar mezz effettiv jew ekonomiku li jintuża għall-produzzjoni ta' kultura u espressjoni taċ-ċelluli speċifiċi.

DMEM huwa mezz Eagle modifikat minn Dulbecco, inizjalment iddisinjat għal fibroblasti tal-ġrieden. DMEM għandu d-doppju tal-konċentrazzjoni ta 'aċidu amminiku u erba' darbiet il-konċentrazzjoni ta 'vitamina ta' MEM, bid-doppju tal-konċentrazzjoni ta 'HCO3- u CO2 għal buffering aħjar. Il-formulazzjoni oriġinali kien fiha 1000 mg / L ta 'glukożju, li aktar tard ġie aġġustat għal 4500 mg / L għat-tkabbir ta' ċerti ċelloli, li ħafna drabi jissejjaħ glukożju baxx u għoli.

Zokkor baxx huwa adattat għal kulturi ta 'ċelluli aderenti dipendenti, speċjalment għal kulturi ta' ċelluli tat-tumur b'rata ta 'tkabbir mgħaġġel u adeżjoni fqira. Zokkor għoli huwa aktar adattat għal kultura ta 'ċelluli ta' sospensjoni ta 'densità għolja, ukoll għal kultura klonali b'twaħħil fqir iżda ma tridx li tinqala' mill-punt ta 'tkabbir oriġinali tagħha, u wkoll għall-kultura ta' ċelluli tal-majeloma u ċelluli trasformati trasfettati bid-DNA f'ibridoma . Pereżempju, iċ-ċelloli CHO jesprimu l-produzzjoni tal-vaċċin tal-epatite B, u ċ-ċelloli CHO jesprimu EPO.

Guilber u Iscove adattaw il-Medju ta 'Dulbecco għall-Medju ta' Iscove għall-kultura ta 'eritroċiti u prekursuri tal-makrofaġi. IMDM jippromwovi wkoll it-tkabbir ta 'limfoċiti B tal-ġurdien, ċelluli B stimulati mill-LPS, ċelluli ematopojetiċi tal-mudullun, ċelluli T u ċelluli tal-limfoma. L-IMDM huwa mezz b'ħafna nutrijenti u għalhekk jista 'jintuża għall-proliferazzjoni rapida ta' ċelluli ta 'densità għolja.

Moore et al. żviluppa mezz ta 'kultura taċ-ċelluli RPMI-1640 f'Roswell Park Memorial Institute fl-1967. Hija ddisinjata għall-kultura tal-limfoċiti u fiha BSS + 21 aċidu amminiku + 11-il vitamini, eċċ Issa tintuża wkoll għal kulturi ta' ċelluli ta' sospensjoni, bħal mammiferi, speċjali Ċelloli ematopojetiċi, lewkoċiti normali jew malinni li proliferaw, ċelluli ibridoma, u limfoċiti adulti oħra bħal K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, ċelluli tal-limfoma taċ-ċelluli T, u ċelluli epiteljali HCT-15 jistgħu jintużaw bħala referenza. .

Iddisinjat minn Ham fl-1963, fih oligoelementi u jista 'jintuża meta l-livelli tas-serum huma baxxi, u huwa adattat għal kulturi klonoġeniċi. f10 huwa adattat għal ċelluli diploid tal-ħamster u umani u huwa partikolarment adattat għal kulturi ta 'ċelluli ta' fluwidu amniotiku.

L-F12 tal-perżut kien iddisinjat għall-klonazzjoni ta' ċelluli CHO f'konċentrazzjonijiet baxxi ta' serum u issa huwa wkoll użat ħafna għall-analiżi tar-rati tal-formazzjoni tal-kloni u l-kulturi primarji. DEME F12 jista 'wkoll jitħallat ma' DMEM f'volumi ugwali biex jinkiseb prodott li jgħaqqad konċentrazzjoni għolja u diversità ta 'kompożizzjoni, u dan il-mezz intuża għal ħafna kulturi primarji u huwa aktar diffiċli biex jikkultiva linji taċ-ċelluli. Huwa wkoll ta 'spiss użat bħala mezz bażi għal kulturi mingħajr serum minħabba l-kontenut għani ta' nutrijenti tiegħu u l-abbiltà li juża inqas serum.

A mezz tal-kultura taċ-ċelluli b'kompożizzjoni kimika definita, M-199, iddisinjata minn Morgan et al. fl-1950, fih 53 komponent minbarra BSS u huwa mezz komprensiv, prinċipalment użat għall-kultura tal-fibroblast tal-embriju tat-tiġieġ. Dan il-mezz tal-kultura għandu jiġi supplimentat bis-serum biex isostni kultura fit-tul. m-199 jista 'jintuża biex jikkultiva ċelloli ta' ħafna speċi ta 'oriġini u jista' jikkultiva ċelloli trasfettati. Issa huwa użat ħafna fil-viroloġija u l-produzzjoni tal-vaċċini.

Iddisinjat minn MeCoy għal ċelluli tas-sarkoma fl-1959, BSS + 40 komponent. Jista 'jappoġġa t-tkabbir ta' ħafna tipi (bħal mudullun, ġilda, pulmun, u milsa) ta 'tilqim primarju. Minbarra li huwa adattat għall-kultura taċ-ċelluli primarji ġenerali, huwa prinċipalment użat bħala kultura ta 'bijopsija tat-tessuti, xi kultura ta' limfoċiti, u appoġġ għat-tkabbir għal xi ċelloli diffiċli biex jiġu kkultivati. Pereżempju, fibroblasti tas-sarkoma tal-firien Jensen, limfoċiti umani, HT-29, BHL-100, u ċelluli epiteljali oħra.

L-15 medju tal-kultura huwa adattat għall-kultura ta 'ċelluli tat-tumur li qed jipproliferaw malajr u huwa użat biex jikkultiva linji taċ-ċelluli tat-tumur fin-nuqqas ta' CO2. Dan il-mezz ta' kultura juża sistema buffered bil-fosfat b'kompożizzjoni ta' aċidu amminiku mtejba aktar u s-sostituzzjoni tal-glukożju b'galattożju.

Jekk inti interessat tagħna midja tal-kultura taċ-ċelluli jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil [protett bl-email], aħna se nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.