Passaturi taċ-ċelluli
X'inhuma l-passaturi taċ-ċelluli?
Passaturi taċ-ċelluli ġeneralment jintużaw fil-kultura taċ-ċelloli tal-laboratorju, filtrazzjoni tal-impuritajiet, tixrid taċ-ċelloli, qsim tal-kampjuni, eċċ. Iċ-ċellula filtru ġeneralment ikun magħmul minn qafas tal-polipropilene, kombinazzjoni speċjali ta' skrin tan-najlon. L-ispeċifikazzjonijiet komuni huma passatur taċ-ċelluli 40μm, passatur taċ-ċelluli 70μm u, passatur taċ-ċelluli 100μm aperturi tal-iskrin.
Fir-riċerka tal-bijoloġija taċ-ċelluli, kemm jekk huwiex għal karatteristiċi fiżjoloġiċi taċ-ċelluli, invażjoni taċ-ċelluli, apoptożi, fagoċitożi, u funzjonijiet fiżjoloġiċi oħra, l-effett tal-fatturi ambjentali fuq l-espressjoni tal-markatur taċ-ċelluli, screening tad-droga, u applikazzjonijiet oħra, il-prerekwiżit huwa li tinkiseb l-ideali omoġenizzat fluwidu tal-kontea ta 'ċellula waħda, sabiex esperimenti sussegwenti bħall-issortjar taċ-ċelluli flow-through (FACS) jistgħu jitwettqu bla xkiel u jistgħu jinkisbu riżultati sperimentali aktar preċiżi. Passaturi taċ-ċelluli huma l-aktar tip komuni ta 'konsumabbli użati fl-esperimenti taċ-ċelluli. Huwa l-aktar tip komuni ta 'konsumabbli użat f'esperimenti ċellulari u jintuża biex jiffiltra l-impuritajiet f'esperimenti ċellulari.
Vantaġġ ta 'passaturi taċ-ċelluli
a. Tliet daqsijiet disponibbli biex jaqblu ma' tipi differenti ta' kampjuni taċ-ċelluli: 40 µm, 70 µm, u 100 µm.
b. Tliet kuluri biex jiddistingwu speċifikazzjonijiet differenti: blu, abjad, u isfar.
c. Distribuzzjoni uniformi tat-toqob tal-malja, li tipprovdi riżultati sperimentali konsistenti u affidabbli.
d. It-tarf estiż ta' fuq jippermetti manipulazzjoni asettika b'forceps kirurġiċi.
e. Qafas tal-polipropilene iffurmat jista' jiġi kkodifikat bil-kulur għal immaniġġjar u differenzjazzjoni faċli.
f. Għall-użu ma' flixkun koniku JET ta' 50ml ċentrifuga tubi.
g. Sterilizzazzjoni b'irradjazzjoni gamma.
h. L-ebda DNase/RNase, l-ebda sors ta' sħana, l-ebda endotossina.
Applikazzjoni ta 'passaturi taċ-ċelluli
L-għan tal- Passaturi taċ-ċelluli huwa li tkisser il-massa taċ-ċelluli matul il-kultura primarja biex tinkiseb sospensjoni ta 'ċellula waħda.
a. Sospensjoni ta' ċellula waħda miksuba permezz tal-filtrazzjoni taċ-ċelluli tad-demm iżolati mill-mudullun, il-frixa, it-timus, it-tonsilli, u l-limfonodi.
b. Tħejjija ta' kampjuni għal kultura primarja taċ-ċelluli u immunizzazzjoni.
c. Filtrazzjoni tal-gliadin minn serum inattivat.
d. Tħejjija ta' żrieragħ primarji ffriżati.
Perforazzjoni tal-passaturi taċ-ċelluli
It-toqob ta Passaturi taċ-ċelluli huma ippanċjati minn magna tal-ippanċjar bil-lejżer tal-filtru taċ-ċelluli tal-ipproċessar speċjali. Il-prinċipju tax-xogħol huwa li r-raġġ tal-lejżer fuq il-lejżer huwa kkonċentrat ħafna fl-ispazju u l-ħin, li jista 'jnaqqas id-dijametru tal-post għal livell ta' mikron u b'hekk jikseb densità ta 'qawwa għolja, u jista' jippanċja bil-lejżer kważi kull materjal.
Il-vantaġġ tal-perforazzjoni tal-lejżer tal-filtru taċ-ċelluli huwa l-ebda burr, l-ebda siġillar, l-ebda residwu, u qatgħa ċatta. Fil-perforazzjoni tal-lejżer tat-toqba tal-filtru taċ-ċelluli, id-daqs tal-perforazzjoni huwa konsistenti, jekk ikun hemm burr jew wiċċ irregolari, il-proċess li jmiss ikun idejqek ħafna, u l-ipproċessar tal-lejżer jagħmel l-ipproċessar aktar tard aktar mgħaġġel u ta 'kwalità aħjar.
Speċifikazzjoni tal-passaturi taċ-ċelluli
| prodott | deskrizzjoni | Speċifikazzjoni tal-pakkett |
|---|---|---|
| Passatur taċ-ċelluli 40 um | 300 malja, blu, sterilizzat | 1pc/pack, 50pcs/ctn |
| Passatur taċ-ċelluli 40 um | 200 malja, abjad, sterilizzat | 1pc/pack, 50pcs/ctn |
| Passatur taċ-ċelluli 40 um | 160 malja, isfar, sterilizzati | 1pc/pack, 50pcs/ctn |
Għażla ta 'passaturi taċ-ċelluli
Numru ta 'malji tal-għarbiel tal-filtru taċ-ċelluli × daqs tal-pori = 15000 (agħżel l-għarbiel taċ-ċelluli bid-daqs tal-malji korrispondenti skont id-daqs tad-daqs tal-pori tal-filtru meħtieġ tal-materjal sperimentali).
Tip ta 'passaturi taċ-ċelluli
Passaturi taċ-ċelluli huma ġeneralment maqsuma f'żewġ materjali ewlenin, wieħed huwa prodotti tal-plastik bħal najlon, u l-ieħor huwa magħmul minn azzar li ma jissaddadx.
Passaturi taċ-ċelluli tal-istainless steel
L-għarbiel tal-filtru taċ-ċelluli ta 'l-istainless steel huwa magħmul minn azzar li ma jissaddadx, b'wiċċ lixx, dehra sabiħa, u karatteristiċi durabbli. Passaturi taċ-ċelluli tal-istainless steel għandhom speċifikazzjonijiet varji minn 40 malja sa 800 malja, li ġeneralment jintużaw fil-kultura taċ-ċelluli tal-laboratorju, filtrazzjoni ta 'impurità, dispersjoni taċ-ċelluli, separazzjoni tal-kampjuni, eċċ Passaturi taċ-ċelluli ta' l-istainless steel jistgħu jerġgħu jintużaw, ġeneralment bl-użu ta 'tindif ultrasoniku u mbagħad sterilizzazzjoni. L-għarbiel taċ-ċelluli huwa maqsum f'żewġ tipi ta ' passatur taċ-ċelluli tal-istainless steel bil-manku u l-istainless steel passatur taċ-ċelluli mingħajr manku, li huwa sempliċi u konvenjenti biex topera għal esperimenti ta 'riċerka xjentifika.
Passaturi taċ-ċelluli tan-najlon
Eżemplari tat-test tal-fluss komuni jistgħu jintużaw b'malji 300-350 Passaturi taċ-ċelluli tan-najlon, mitwija f'forma ta 'lembut, u użata ma' forceps emostatiċi.
Użu ta 'passaturi taċ-ċelluli
a. Passaturi taċ-ċelluli ma jistgħux jiġu mxarrba fl-aċidu wara l-ħasil, jistgħu jiġu sterilizzati direttament imxarrba billi jgeżwruhom f'fojl tal-landa. M'għandekx nixxef itħan meta tuża. Meta tiffiltra tessuti akbar, għandek bżonn iżżid buffer waqt it-tħin.
b. Id-differenza bejn 200 malja u 300 malja Passaturi taċ-ċelluli huwa d-daqs tat-toqob. Din id-differenza mhix kbira ħafna meta tagħmel it-tip ta 'fluss, iżda meta tuża 300 malja, oqgħod attent li ma tħinx wisq biex tevita tessut konnettiv eċċessiv.
c. It-tessut tal-pulmun tal-firien jista' jinkiseb wara t-tħin tal-għarbiel taċ-ċelloli huwa taħlita ta' ċelloli, inklużi ċelloli parenkimali tal-pulmun, ċelloli stromali, eritroċiti, u numru żgħir ta' lewkoċiti, ċelloli NK, u makrofaġi.
Tindif tal-passaturi taċ-ċelluli
a. Passaturi taċ-ċelluli li jintremew mhumiex rakkomandati li jitnaddfu u jiġu diżinfettati, li jistgħu jikkawżaw irregolarità tal-filtru u jaffettwaw ir-riżultati tal-esperiment li jmiss.
b. Tindif bl-alkali dilwit biex tneħħi ċ-ċelloli u t-tessuti residwi.
c. Xarrab u naddaf b'soluzzjoni ta' aġent għat-tneħħija tal-ġebla.
d. Tlaħliħ bl-ilma tal-vit, ilma distillat dH2O 3 darbiet, ilma distillat mill-ġdid ddH2O 3 darbiet, sterilizzazzjoni tal-ippakkjar.
Passatur taċ-ċelluli għaċ-ċitometrija tal-fluss
Ċitometrija tal-fluss hija teknika għall-analiżi kwantitattiva u l-għażla ta 'ċelluli singoli jew partiċelli bijoloġiċi f'sospensjoni, li għandha l-vantaġġi ta' veloċità għolja, preċiżjoni għolja u preċiżjoni, u tintuża ħafna fl-għadd taċ-ċelluli, l-għażla taċ-ċelluli, l-analiżi tal-fenotip molekulari, l-inġinerija tal-proteini u oħrajn riċerka.
applikazzjoni
A. Iżolament tal-isplenoċiti
a. Neħħi l-milsa tal-ġurdien f'kontenitur ta' 15 ml tubu ċentrifugu (mingħajr likwidu) u poġġi t-tubu fuq is-silġ.
b. Żid 5 ml ta' buffer tal-liżi RBC ma' 15 ml tat-tubu taċ-ċentrifuga li fih il-milsa.
ċ. Ferra l-buffer tal-lisi RBC u l-milsa f'kontenitur ta' 10 ċm dixx tal-kultura taċ-ċelluli.
d. Poġġi l-milsa fuq in-naħa mhux maħduma ta' grinder b'żewġt itruf fuq slide (imxarrab b'buffer tal-liżi RBC), farrak il-milsa sewwa fil-grinder b'żewġt itruf fuq slide, u itħan bejn il-grinders b'żewġt itruf fuq slide sakemm il-milsa tkun dissoċjata.
e. Ittrasferixxi l-lisat tal-RBC li fih l-isplenoċiti għal tubu taċ-ċentrifuga ta' 15 ml.
f. Żid 10 ml ta' mezz mat-tubu taċ-ċentrifuga u aqleb darbtejn jew tliet darbiet.
g. Iċċentrifuga b'1300 rpm f'4 °C għal 00:05:00
h. Armi s-supernatant u erġa' ssospendi l-preċipitat fi 3 ml ta' mezz.
i. Iffiltra l- Passatur taċ-ċelluli 70 μM minn tubu ċentrifugu ta’ 50 ml.
j. Iddilwixxi ċ-ċelloli b'1:100 u għoddhom.
k. Iddilwixxi s-sospensjoni ta' ċellula waħda għal 1 x 107 ċellula/ml f'mezz RPMI (għal assays tal-fluss, l-ebda ċellula m'għandha bżonn tingħadd u tiġi magħduda).
l. Poġġi l-isplenoċiti fuq is-silġ sakemm jidħlu fil-pjanċa ta' 96-bir.
B. Stimulazzjoni tal-splenoċiti
a. Ipprepara mezz RPMI wieħed li fih Brefeldin A b'konċentrazzjoni ta' 10 μg/ml.
b. Ħawwad bil-vortex u dawwar is-soluzzjonijiet kollha tal-LPS, imbagħad sonika kull waħda 00:10:00. Wara s-sonikazzjoni, ħawwad bil-vortex u dawwar mill-ġdid.
ċ. Ipprepara kull stimulu (EC LPS, PA, YP, Lipid IVa) għad-doppju tal-konċentrazzjoni finali mixtieqa tiegħu (2x) billi tuża mezz li fih Brefeldin A.
d. 100 μl ta' kull stimulant jiżdiedu mal-bjar xierqa ta' pjanċa ta' 96 bjar ta' 2.2 mL, inklużi l-bjar mhux stimulati bħala kontrolli.
e. Poġġi 100 μl ta' splenoċiti fil-bjar xierqa (poġġi sett ieħor ta' splenoċiti biex jintuża bħala kontroll wieħed tat-tebgħa).
f. Imbagħad inkuba f'temperatura ta' 37 °C għal 04:00:00.
Ċ. Tbajja' immunoċitokimika
a. Wara l-04:00:00, ittratta l-pjanċa tal-bir b'20 μl ta' 20 mM EDTA.
b. Ħallat u inkuba f'temperatura ta' 37 °C għal 00:10:00.
ċ. Ħallat mill-ġdid wara l-inkubazzjoni, imbagħad iċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00.
d. Aspira jew aqleb il-midja.
e. Agħlaq il-bjar kollha b'10 μl ta' FcBlock dilwit (1:100 FcBloc f'PBSA/az).
f. Inkuba fuq is-silġ fis-00:15:00.
g. Żid 100 μl PBSA/az u ċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00.
h. Aspira jew aqleb il-midja.
i. Erġa' sospendi/żebgħa b'10 μl ta' taħlita ta' antikorpi: CD11b PerCP-Cy5.5, CD11c PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 u CD3 APC (1:100Ab f'PBSA/az) mal-kampjun ta' splenoċita stimulata.
j. Żid 100 μl PBSA/az mal-kontroll ta' tebgħa waħda, segwit minn 1 μl ta' dawn l-Ab ta' tebgħa waħda: CD8 FITC, CD8 PE, CD4 PerCP-Cy5.5, CD8 PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 u CD8 APC.
k. Inkuba fuq is-silġ protett mid-dawl (jew imgeżwer fil-fojl) fis-00:20:00.
l. Żid 100 μl PBSA/az, imbagħad iċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00.
m. Aspira jew agħfas il-mezz.
n. Erġa' ssospendi fil-bjar kollha b'100 μl ta' soluzzjoni BDcytofix/cytoperm.
o. Inkuba fuq is-silġ protett mid-dawl 00:20:00.
p. Żid 100 μl ta' 1x BD Perm Wash mal-bjar kollha.
q. Iċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00, imbagħad aspira jew iġbed il-mezz b'daqqa ħafifa.
r. Erġa' sospendi/aħsel darba b'200 μl 1x BD Perm Wash billi tippetta 'l fuq u 'l isfel diversi drabi fil-bjar kollha.
s. Iċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00, imbagħad aspira jew aqleb il-mezz.
t. Erġa' sospendi/żebgħa l-kampjuni tal-isplenoċiti b'50 μl ta' taħlita ta' antikorpi: TNF FITC u IL-12/IL-23p40 PE mal-isplenoċiti stimulati.
u. Inkuba fuq is-silġ fis-00:30:00 protett mid-dawl.
v. Żid 150 μl ta' 1xBD Perm wash fil-bjar kollha u ċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00.
w. Aspira jew aqleb il-midja.
x. Erġa' ssospendi/aħsel darba b'200 μl 1x BD Perm Wash billi tippetta 'l fuq u 'l isfel diversi drabi fil-bjar kollha.
y. Iċċentrifuga b'1300 rpm għal 00:05:00, imbagħad aspira jew aqleb il-mezz.
z. Erġa' ssospendi f'volum finali ta' 200 μl ta' soluzzjoni ta' 1% paraformaldehyde (iddilwixxi 10% paraformaldehyde ma' 1xPBS).
aa. Aħżen f'4 °C 'il bogħod mid-dawl (jew imgeżwer fil-fojl) sakemm ikun lest għall-fluss ċitometrija analiżi – ittrasferixxi kampjuni minn pjanċa ta' 96 bir għal buretta immedjatament qabel il-FACS.
Kif tixtri passaturi taċ-ċelloli?
Jekk inti interessat tagħna Passaturi taċ-ċelluli jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.