Pjanċa PCR
X'inhi l-pjanċa tal-PCR?
Pjanċa PCR huwa tip ta 'trasportatur għal Reazzjoni tal-Katina tal-Polimerażi (PCR) li jġorru primers simili Taq DNA polimerażi, dNTP, aċidu nuklejku template, Mg, buffer, eċċ., Li huma prinċipalment involuti f'reazzjonijiet ta 'amplifikazzjoni fil-PCR.
Pjanċi PCR jintużaw ħafna fl-oqsma tal-ġenetika, il-bijokimika, l-immunoloġija, il-mediċina, eċċ. Huma mhux biss applikati għal riċerka bażika bħall-iżolament tal-ġeni, il-klonazzjoni u l-analiżi tas-sekwenza tal-aċidu nuklejku, iżda jintużaw ukoll għad-dijanjosi tal-mard jew kwalunkwe post. fejn hemm DNA jew RNA, u huma oġġetti konsumabbli li jintremew fil-laboratorji.
X'inhu PCR?
Bħala teknika tal-bijoloġija molekulari, reazzjoni katina tal-polimerażi (PCR) jintuża biex jamplifika frammenti speċifiċi tad-DNA. Jista' jitqies bħala replikazzjoni speċjali tad-DNA barra l-ġisem ta' organiżmu ħaj. L-aktar karatteristika importanti tal-PCR hija l-abbiltà li tamplifika ammonti żgħar ta' DNA b'mod drammatiku. Għalhekk, irrispettivament mill-paleontoloġija fossilizzata, il-fdalijiet ta' figura storika, jew ix-xagħar, il-ġilda, jew id-demm li ħalla warajh qattiel ħafna snin ilu, sakemm biċċa żgħira ta' DNA tista' tiġi iżolata, il-PCR jista' jintuża biex jamplifika d-DNA u jqabblu. Hawnhekk tinsab il-qawwa tal-"evidenza tat-traċċa".
L-ewwel ġie maħsub minn Mullis fl-1983 u ivvintat fl-1985 bħala r-reazzjoni tal-katina tal-polimerażi, li fisser it-twelid reali tat-teknoloġija PCR. Fl-1976, ix-xjenzat Ċiniż Qian Jiayun, li skopra l-polimerażi tad-DNA Taq stabbli, ta kontribut fundamentali għall-iżvilupp tat-teknoloġija PCR. Kienu kważi 40 sena mill-invenzjoni tat-teknoloġija PCR, u t-teknoloġija PCR żviluppat għat-tielet ġenerazzjoni. Fl-aħħar kważi 40 sena, it-teknoloġija PCR tat kontribut li ma jitħassarx għall-iżvilupp tax-xjenzi tal-ħajja.
PCR tal-ewwel ġenerazzjoni
Wara li vvinta Teknoloġija PCR, Mullis iddeskrivieha kif ġej: “B’molekula waħda ta’ DNA, il-PCR tista’ tipproduċi 100 miljun molekula simili f’wara nofsinhar. Kulma kien meħtieġ kien tubu, xi reaġenti sempliċi, u apparat għat-tisħin.”
It-teknika inizjali tal-PCR użat komuni Amplifikatur tal-PCR biex tkabbar il-ġene fil-mira, u mbagħad il-prodotti ġew analizzati bl-elettroforesi tal-ġel tal-agarose, li tista 'ssir biss b'mod kwalitattiv.
Applikazzjonijiet tat-Teknoloġija
Huwa possibbli li jiżdiedu traċċi ta ' DNA b'mod sinifikanti. Għall-iskoperta ta 'fdalijiet paleontoloġiċi f'fossili, xagħar, frammenti tal-ġilda, jew demm minn xeni tal-kriminalità, sakemm ftit żgħira ta' DNA tista 'tiġi iżolata, tista' tiġi amplifikata u mqabbla bl-użu tal-PCR.
Vantaġġi tal-PCR tal-ewwel ġenerazzjoni
Il-PCR hija teknika ta’ bijoloġija molekulari użata biex tkabbar framment speċifiku tad-DNA, li jista’ jitqies bħala replikazzjoni speċjali tad-DNA barra l-organiżmu.
Żvantaġġi tal-PCR tal-ewwel ġenerazzjoni
a. Iż-żebgħa tal-aċidu nuklejku użata fit-teknika oriġinali tal-PCR se tikkawża ħsara u kontaminazzjoni lill-persunal tal-laboratorju u lill-ambjent.
b. Il-PCR jeħtieġ li jinfetaħ u jiġi ttestjat wara t-tlestija, li hija suxxettibbli għall-kontaminazzjoni u riżultati foloz-pożittivi.
c. L-assaġġ jieħu ħafna ħin, ikun ta’ nkwiet, u jkun suxxettibbli għall-iżbalji.
d. Jista' jsir biss ittestjar kwalitattiv
PCR tat-tieni ġenerazzjoni
It-tieni ġenerazzjoni ta’ PCR tissejjaħ teknika ta’ PCR kwantitattiva fluworexxenti (PCR f'Ħin Real), kif ukoll qPCR. Il-PCR tal-fluworexxenza tissorvelja l-akkumulazzjoni ta 'prodotti ta' amplifikazzjoni billi żżid sondi fluworexxenti mas-sistema ta 'reazzjoni li jistgħu jindikaw il-proċess li jirrifletti u bl-akkumulazzjoni ta' sinjali fluworexxenti. Ir-riżultati huma ġġudikati minn kurvi fluworexxenti u jistgħu jiġu kkwantifikati bl-għajnuna ta 'valuri Cq u kurvi standard.
Applikazzjonijiet tat-Teknoloġija
Għas-sejbien ta 'patoġeni ta' mard infettiv, riċerka tal-ġeni tar-reżistenza tad-droga tal-mard, valutazzjoni tal-effikaċja tad-droga, dijanjosi ta 'mard ġenetiku, eċċ.
Vantaġġi tal-PCR tat-tieni ġenerazzjoni
a. Riskju baxx ta' kontaminazzjoni.
b. Il-proċess ta' operazzjoni huwa aktar sempliċi, aktar ekonomiku, u aktar effiċjenti minn qabel.
c. Jeħtieġ inqas kampjuni ta' DNA u RNA biex jiżdiedu.
Żvantaġġi tal-PCR tat-tieni ġenerazzjoni
a. Il-valuri tas-Cq minn reaġenti u tagħmir ta' manifatturi differenti mhumiex komparabbli.
b. L-effett tal-valuri tal-isfond jagħmel ir-riżultati faċilment preġudikati.
c. Huwa diffiċli li tiskopri DNA b'kopji baxxi.
d. Is-sistemi konvenzjonali tal-PCR spiss jiġu affettwati meta l-inibituri tal-PCR ikunu preżenti fis-sistema ta' reazzjoni.
PCR ta' tliet ġenerazzjonijiet
It-tielet ġenerazzjoni tat-teknoloġija PCR tissejjaħ Digital PCR, dPCR, jew Dig-PCR. Dan huwa test PCR ġdid li jiskopri u jikkwantifika l-aċidi nuklejċi. Juża għadd dirett ta 'molekuli fil-mira mingħajr ma jiddependi fuq xi kalibratur jew dehra, li jippermetti d-determinazzjoni tan-numru assolut ta' molekuli fil-mira li jiġu skoperti sa kopja waħda.
Applikazzjonijiet Tekniċi
Għall-iskoperta ta 'numru żgħir ta' ċelluli li fihom mutazzjoni f'popolazzjoni kbira ta 'ċelluli normali. Billi tħallat DNA tal-kampjun fil-bjar tal-assaġġ korrispondenti, wara l-amplifikazzjoni tal-PCR, tiġi miżjuda sonda fluworexxenti speċifika ma 'kull bir biex ibridizza mal-prodott, u mbagħad in-numru ta' alleli mutanti u tat-tip selvaġġ fil-kampjun jingħadd direttament. L-applikazzjonijiet ewlenin huma analiżi tal-mutazzjoni, tħassir alleliku, skoperta tal-kanċer ta 'DNA mħallta, eċċ.
Vantaġġi tal-PCR ta 'tliet ġenerazzjonijiet
a. Sensittività ogħla
Il-PCR diġitali jaqsam ir-reazzjoni tal-PCR tradizzjonali f'għexieren ta 'eluf ta' sistemi. Dawn is-sistemi huma amplifikati b'mod indipendenti u skoperti b'mod indipendenti, u jiżguraw li numru ta 'mudelli b'ċifra waħda jista' jiġi skopert.
b. Kwantifikazzjoni aktar preċiża
PCR diġitali tgħodd direttament in-numru inizjali ta 'mudelli f'reazzjoni billi tgħodd il-fluworexxenza tal-mikrosistemi. Anke jekk ikun hemm aktar minn mudell wieħed f'xi microdroplets, jista 'jiġi kkalkulat bid-distribuzzjoni ta' Poisson.
c. Abbiltà aħjar kontra l-interferenza
Matul id-distribuzzjoni tas-sistema ta 'reazzjoni fl-ewwel pass tal-PCR diġitali, il-mudell u l-inibitur huma assenjati għal sistemi differenti biex inaqqsu l-interferenza tal-inibituri. B'differenza mill-qPCR, dPCR jiskopri l-fluworexxenza tal-endpoint, u anke jekk il-mikrosistema tkun kemmxejn affettwata, mhux se taffettwa l-interpretazzjoni tar-riżultat finali.
Żvantaġġi ta 'PCR ta' tliet ġenerazzjonijiet
a. Rekwiżit ta' kwalità għolja tat-template
Peress li l-PCR diġitali jaqsam ir-reazzjonijiet f'għexieren ta 'eluf ta' sistemi indipendenti, għandu rekwiżiti relattivament għoljin għall-ammont ta 'mudell. L-ammont ta 'mudell li jaqbeż l-ammont ta' mikrosistema se jwassal għal nuqqas ta 'kwantifikazzjoni, u bi ftit ammonti se jwassal għal sinjal baxx u jnaqqas l-eżattezza tal-kwantifikazzjoni.
b. Ġudizzju ta' prodotti mhux speċifiċi
Il-PCR diġitali josserva l-fluworexxenza ta' l-aħħar f'kull sistema. Jekk il-prodott tal-PCR huwiex speċifiku jew le, sakemm is-sinjal tal-fluworexxenza jkun b'saħħtu biżżejjed, huwa wkoll interpretat bħala riżultat pożittiv. Għalhekk, l-ispeċifiċità tal-primer tad-dPCR hija estremament impenjattiva.
Tipi ta 'pjanċa PCR
Pjanċi PCR huma prinċipalment magħmula minn polypropylene (PP), li jagħmilhom adattati aħjar għal settings ripetuti ta 'temperatura għolja u baxxa waqt reazzjonijiet PCR, u jistgħu jintużaw b'operazzjonijiet awtoklavi. Biex tinkiseb operazzjoni ta' throughput għoli b'kanuni tal-fillieri u strumenti PCR, 96 ukoll pjanċa PCR u, 384 ukoll pjanċa PCR huma aktar komunement użati. Hemm tipi differenti ta ' pjanċi bil-falda. Il-falda tipprovdi stabbiltà tajba għall-pipettar waqt il-kostruzzjoni tas-sistema ta 'reazzjoni u saħħa mekkanika tajba meta twettaq immaniġġjar mekkaniku awtomatizzat. Skont id-disinn tal-falda, il-pjanċa tal-PCR tista 'tinqasam fi pjanċa PCR mhux skirted, pjanċa PCR semi-skirted, pjanċa PCR full-skirted, u pjanċa semi-skirted veloċi jew ta' profil baxx.
96 ukoll pjanċa PCR
(96 pjanċa tal-PCR / pjanċa 96 bir-falda / pjanċa tal-bijosistemi applikati 96 tajjeb)
384 ukoll pjanċa PCR
(384 pjanċa PCR / pjanċa PCR 384 / bijosistemi applikati 384 ukoll pjanċa PCR)
Pjanċa PCR mhux skirted
M'hemm l-ebda panel ta 'madwar pjanċa PCR mhux skirtedDin il-pjanċa hija adattabbli għall-biċċa l-kbira tal-istrumenti tal-PCR u l-moduli tal-istrumenti tal-PCR f'ħin reali iżda mhijiex adattata għal awtomazzjoni applikazzjonijiet.
(pjanċa pcr fil-ħin reali / pjanċa rt pcr / qpcr 96 pjanċa sew / qpcr 384 pjanċa tajjeb)
Pjanċa tal-PCR semi-skirted
il pjanċa semi-falda, magħruf ukoll bħala nofs skirted PCR pjanċa, għandha tarf qasir madwar it-tarf tal-pjanċa. Dan jipprovdi appoġġ adegwat waqt il-pipettar u saħħa mekkanika għall-immaniġġjar tal-magni.
(96 sew pcr / qpcr plate / skirted pcr plate)
Pjanċa PCR full-falda
Il-pjanċa tal-PCR full-skirted għandha pannell tat-tarf li jkopri l-għoli tal-pjanċa. Dan il-format tal-pjanċa huwa adattat għal strumenti PCR b'moduli li jisporġu 'l barra u jippermetti li jitwaħħal u sikur. Il-falda sħiħa ttejjeb ukoll is-saħħa mekkanika, u tagħmilha adattata għall-użu fi stazzjonijiet tax-xogħol awtomatizzati.
(full-skirted 96 well plate / taqman array plates / bojod PCR plates)
Kif tagħżel il-pjanċa tal-PCR?
Kif aħna kollha magħrufa li PCR huwa metodu sperimentali bażiku fil-laboratorji bijokimiċi. Ir-riżultati sperimentali, madankollu, huma dejjem mhux sodisfaċenti, possibbilment minħabba kontaminazzjoni ta 'traċċi ta' konsumabbli tal-plastik PCR, jew interferenza sperimentali kkawżata mill-introduzzjoni ta 'inibituri. Ħafna raġunijiet jaffettwaw ir-riżultati ta ' Esperimenti PCR:
a. Primers — huma ċ-ċavetta għall-ispeċifiċità tal-PCR. L-ispeċifiċità tal-prodotti tal-PCR hija bbażata fuq il-grad ta' komplementarjetà bejn il-primers u d-DNA template.
b. Enżimi u l-konċentrazzjonijiet tagħhom.
c. Kwalità u konċentrazzjoni ta' dNTP.
d. Aċidu nuklejku ta' mudell (ġene fil-mira).
e. Konċentrazzjoni ta' Mg2+.
f. Issettjar tat-temperatura u l-ħin.
g. Numru ta' drabi taċ-ċikli.
h. Tagħmir, konsumabbli, eċċ.
Fosthom, konsumabbli huma fattur importanti ħafna u faċilment injorati.
Għaliex il-konsumabbli tal-PCR huma ġeneralment magħmula minn PP?
PCR/qPCR konsumabbli huma ġeneralment magħmula minn polypropylene (PP) minħabba li huwa materjal bijoloġikament inert. Il-wiċċ ta 'dan il-materjal ma jaderixxix faċilment mal-bijomolekuli u għandu reżistenza kimika tajba u tolleranza għat-temperatura. Dawn il-materjali ħafna drabi jkunu f'kuntatt dirett ma 'reaġenti jew kampjuni u għalhekk jeħtieġu materjali ta' kwalità għolja u proċessar tajjeb matul il-proċess ta 'produzzjoni u preparazzjoni.
Kif tagħżel bejn volumi differenti ta 'pjanċa tat-tubu PCR?
pont Tubi PCR huma disponibbli f'volumi li jissodisfaw ir-rekwiżiti tar-reazzjonijiet tal-PCR. Madankollu, tubi ta 'volum baxx huma preferuti biex jissodisfaw ir-rekwiżiti sperimentali. Dan huwa minħabba li tubi/pjanċi ta 'volum baxx għandhom inqas spazju hawn fuq, li jtejjeb ir-rata tat-trasferiment tas-sħana u jnaqqas l-evaporazzjoni. Barra minn hekk, meta żżid kampjuni, huwa meħtieġ li tevita li żżid wisq jew ftit wisq kampjuni. Doża eċċessiva tista 'twassal għal konduttività termali mnaqqsa, tixrid, u kontaminazzjoni inkroċjata. Ftit wisq kampjun jista' jirriżulta f'telf ta' evaporazzjoni tal-kampjun.
Daqsijiet u volumi komuni tat-tubi tar-reazzjoni
* Tubu wieħed / tubu akkoppjat: 0.5mL, 0.2mL, 0.15mL
* Pjanċa PCR: 0.1 ml pcr plate / 0.2 ml pcr plate / 24 well pcr plate / 96 well qpcr / 384 well pcr / … …
Għaliex xi pjanċi tal-PCR huma koperti b'mod ċatt iżda xi wħud f'konvessi?
Qoxra tal-pjanċa tal-PCR fil-ċatt jipprovdi trażmissjoni preċiża tas-sinjal tal-fluworexxenza għal q9PCR u huwa faċli biex tikteb markaturi.
Kopertura konvessa kuntatti mal-kopertura sħuna tal-istrument PCR biex titnaqqas id-deformazzjoni kkaġunata mill-pressjoni tat-tubu tar-reazzjoni. Madankollu, se taffettwa t-trażmissjoni tas-sinjal tal-fluworexxenza u ma tistax tintuża f'esperimenti qPCR.
Kif tagħżel il-kuluri tal-pjanċi PCR?
Għal reazzjonijiet PCR komuni, jistgħu jintużaw tubi PCR ċari jew ikkuluriti. Tubi PCR ikkuluriti huma aktar utli għall-għażla u l-ġestjoni tal-kampjuni.
Peress li qPCR jeħtieġ skoperta kwantitattiva f'ħin reali tal-intensità tas-sinjal tal-fluworexxenza, it-trasmissjoni tas-sinjal tal-fluworexxenza sensittiva u preċiża hija meħtieġa ħafna. Il- pjanċi bojod tal-PCR timmassimizza r-riflessjoni ta 'sinjali fluworexxenti u tnaqqas il-kontaminazzjoni inkroċjata ta' sinjali bejn il-bjar, li jistgħu jottimizzaw ir-riżultati ta 'PCR kwantitattiv fluworexxenti f'ħin reali.
Kif tixtri pjanċa PCR?
Jekk inti interessat tagħna Pjanċa PCR jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.