Sistema HPLC

kontenut
1. X'inhi s-sistema HPLC?
    1.1 Prinċipju HPLC
    1.2 Dijagramma HPLC
    1.3 Kompożizzjoni tas-sistema HPLC
2. HPLC vs FPLC
    2.1 X'inhi l-kromatografija FPLC?
    2.2 Xebh u differenzi bejn is-sistemi HPLC u s-sistemi FPLC
3. Kif tixtri sistema HPLC?

Sistema ta' kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (sistema HPLC) huwa strument tal-laboratorju li japplika l-prinċipju ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja. Huwa prinċipalment applikat biex janalizza komposti organiċi b'punt għoli ta 'togħlija li mhumiex volatili, instabbli bis-sħana, u piż molekulari kbir.

Kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC) hija fergħa importanti tal-kromatografija. Għandha firxa wiesgħa ta 'applikazzjonijiet u mhix limitata mill-volatilità u l-istabbiltà termali ta' l-analiti. Kważi l-komposti kollha, inklużi l-punt għoli tat-togħlija, il-komposti polari, joniċi, u l-makromolekuli, jistgħu jiġu analizzati u determinati mill-HPLC, u b'hekk jagħmlu tajjeb għan-nuqqasijiet tal-kromatografija tal-gass. Madwar 20% tal-komposti organiċi magħrufa jistgħu jiġu analizzati bil-kromatografija tal-gass, filwaqt li 80% jeħtieġ li jiġu analizzati permezz ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja. L-HPLC huwa kkaratterizzat minn effiċjenza għolja ta 'separazzjoni, veloċità ta' analiżi mgħaġġla, sensittività tajba ta 'skoperta, u l-abbiltà li tanalizza u tissepara sustanzi termalment instabbli fiżjoloġikament attivi b'punti ta' togħlija għoljin li ma jistgħux jiġu vaporizzati. HPLC tintuża ħafna fix-xjenza tal-ħajja, riċerka ambjentali, riċerka farmaċewtika, xjenza tal-ikel, u riċerka farmaċewtika.

Il-prinċipju tas-separazzjoni tal-kromatografija huwa li meta l-komponenti maħlula fil-fażi mobbli jgħaddu mill-fażi stazzjonarja, minħabba d-daqs u s-saħħa differenti tal-azzjoni mal-fażi tal-istazzjon, li jistgħu jkunu adsorbiment, distribuzzjoni, esklużjoni, affinità, u żamma differenti ħin fil-fażi wieqfa, u b'hekk suċċessivament joħroġ mill-fażi wieqfa.

Kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja huwa metodu bbażat fuq kromatografija likwida klassika li fiha l-likwidu jintuża bħala l-fażi mobbli u tintuża sistema ta’ infużjoni bi pressjoni għolja biex tippompja fażijiet mobbli bħal solventi singoli b’polaritajiet differenti jew solventi mħallta u buffers ta’ proporzjonijiet differenti f’kolonna mgħammra b’ fażi stazzjonarja effiċjenti ħafna ta 'partiċelli fini ħafna. Bl-użu ta 'dan il-metodu, il-komponenti fil-kolonna huma separati u mbagħad skoperti mid-ditekter, u b'hekk tippermetti l-analiżi tal-kampjun.

il Sistema HPLC ġeneralment tikkonsisti minn pompa kromatografika, kampjunar, kolonna, detector, u sistema ta 'proċessar tad-dejta. Fosthom, il-pompa kromatografika, il-kolonna u d-ditekter huma l-komponenti ewlenin. Barra minn hekk, l-apparat ta 'elużjoni tal-gradjent, degasser onlajn, autosampler, kolonna ta' qabel jew protezzjoni, kontrollur tat-temperatura tal-kolonna, eċċ, jista 'jiġi kkonfigurat skond il-ħtiġijiet ta' strumenti HPLC moderni u sistemi ta 'kontroll tal-mikrokompjuter għal kontroll awtomatizzat ta' strumenti u ipproċessar tad-dejta . Preparatorju Strumenti HPLC huma mgħammra wkoll b'apparat awtomatiku għall-ġbir tal-frazzjonijiet.

Il-pompa kromatografika hija waħda mill-aktar komponenti importanti Sistema HPLC. Il-pompi tal-kromatografija huma maqsuma f'pompi ta 'pressjoni kostanti u pompi ta' fluss kostanti skont il-fattur tal-likwidu tal-ħruġ kostanti. Il-prestazzjoni tal-pompi taffettwa direttament il-kwalità tas-sistema kollha u l-affidabbiltà tar-riżultati tal-analiżi. Il-pompi tal-kromatografija huma maqsuma f'pompi pnewmatiċi u pompi mekkaniċi skond il-mod ta 'tħaddim. Fost il-pompi mekkaniċi, jistgħu jiġu suddiviżi f'pompi tas-siringi tas-sewqan bil-kamin, pompi reċiprokanti tal-pistun wieħed, pompi reċiprokanti tal-pistun doppju, u pompi tad-dijaframma reċiprokanti.

Il-bżieżaq fis-soluzzjoni tal-fażi mobbli huma dovuti għall-preżenza ta 'ossiġnu maħlul jew arja mħallta. Ladarba l-bżieżaq ta 'l-arja jidħlu fid-ditekter, dawn se jidhru bħala qċaċet ta' storbju qawwi fuq il-kromatogramma. Bżieżaq żgħar jakkumulaw bil-mod u jsiru bżieżaq kbar, li jidħlu fil-mogħdija tal-fluss jew fil-kolonna u jnaqqsu r-rata tal-fluss tal-fażi mobbli jew jikkawżaw li r-rata tal-fluss issir instabbli, li tirriżulta f'linja bażi li tvarja. Biex tgħaxxaq, ladarba l-bżieżaq tal-arja jidħlu fil-kolonna, tieħu ħafna ħin biex tkeċċihom. Fl-iskoperta tal-fluworexxenza, l-ossiġnu maħlul jista 'wkoll jaqta' l-fluworexxenza. Gassijiet maħlula jistgħu wkoll jikkawżaw ossidazzjoni ta 'xi kampjuni jew jibdlu l-pH tas-soluzzjoni. Fil-preżent, id-degassing tal-oxxillazzjoni ultrasoniku off-line, it-tneħħija tal-gass tal-bużżieqa tal-gass inerti onlajn, u d-degassing tal-vakwu onlajn huma ġeneralment użati biex jiddegassaw il-fażi mobbli tal-kromatografija likwida.

L-HPLC huwa disponibbli kemm f'eluzzjoni isokratika kif ukoll f'gradjent. L-elużjoni iżokratika hija li żżomm il-kompożizzjoni tal-fażi mobbli kostanti matul l-istess ċiklu ta 'analiżi u hija adattata għal kampjuni b'numru żgħir ta' komponenti u ftit differenza fil-proprjetajiet. L-elużjoni tal-gradjent hija biex tikkontrolla l-kompożizzjoni tal-fażi mobbli, bħall-polarità, is-saħħa jonika u l-pH tas-solvent, f'ċiklu wieħed ta 'analiżi u tintuża għal kampjuni kumplessi b'numru kbir ta' komponenti u proprjetajiet differenti. Il-vantaġġi tal-użu ta 'eluzzjoni tal-gradjent huma ħin ta' analiżi iqsar, separazzjoni aħjar, forma tal-quċċata mtejba, u sensittività ogħla ta 'skoperta, filwaqt li l-iżvantaġġ huwa li ħafna drabi tikkawża drift tal-linja bażi u tnaqqas ir-riproduċibilità. L-elużjoni tal-gradjent li tikkonsisti f'żewġ solventi tista 'titħallat fi kwalunkwe grad, li tirriżulta f'varjetà ta' profili ta 'elużjoni, jiġifieri gradjent lineari, gradjent konkavi, gradjent konvessi u gradjent tal-pass.

Sistemi HPLC huma ġeneralment mgħammra b'valv ta 'injezzjoni b'sitt direzzjonijiet. Il-metodu ta 'injezzjoni tal-valv b'sitt direzzjonijiet għandu żewġ tipi: metodu ta' tagħbija ta 'likwidu parzjali u metodu ta' tagħbija ta 'likwidu komplut.

Il-volum tal-injezzjoni m'għandux ikun aktar minn 50% (sa 75%) tal-volum taċ-ċirku ta 'kwantifikazzjoni u jeħtieġ li kull volum tal-injezzjoni jkun preċiż u identiku. L-eżattezza u r-ripetibbiltà ta 'dan il-metodu ta' injezzjoni hija determinata mill-profiċjenza tal-kampjunar tas-siringa, u faċli biex tipproduċi l-ogħla tixrid ikkawżat mill-injezzjoni.

Il-volum tal-injezzjoni għandu jkun mhux inqas minn 5 ~ 10 darbiet il-volum taċ-ċirku ta 'kwantifikazzjoni (mill-inqas 3 darbiet), sabiex jissostitwixxi kompletament il-fażi mobbli fiċ-ċirku, jelimina l-effett tal-ħajt u jiżgura l-eżattezza u r-ripetibbiltà tal-injezzjoni. .

Is-sistema ta 'separazzjoni tinkludi l-kolonna, il-kolonna tal-gwardja, u l-kamra tat-temperatura tal-kolonna.

Il-kromatografija hija mezz ta’ separazzjoni u analiżi. Is-separazzjoni hija l-qalba tat-teknika, għalhekk il-kolonna, li hija responsabbli għas-separazzjoni, hija l-qalba tas-sistema kromatografika. Kolonna kromatografika tikkonsisti minn tubu tal-kolonna, għatu tal-pressjoni, ferrule (ċirku tas-siġillar), pjanċa tal-għarbiel (pjanċa tal-filtru), ġonta, kamin, eċċ. L-ippakkjar kromatografiku huwa l-partiċelli tal-materjal, normalment partiċelli sferiċi ta 'daqs ta' partiċelli 5-10, li jintużaw biex jimlew il-kolonna wara l-proċess ta’ preparazzjoni. Kolonni kromatografiċi jistgħu jinqasmu f'tipi analitiċi u preparattivi skond l-użi tagħhom, u l-ispeċifikazzjonijiet tad-daqs huma wkoll differenti.

Il-funzjoni tal-kolonna protettiva hija li tipprevjeni l-kontaminazzjoni tal-kolonna mill-impuritajiet adsorbiti b'mod qawwi, u b'hekk ittawwal il-ħajja tal-kolonna. Għal tipi differenti ta 'kolonni, għandhom jintgħażlu l-kolonni protettivi bl-ippakkjar korrispondenti. Oqgħod attent għad-data ta 'skadenza tal-qalba tal-kolonna, li għandha tiġi sostitwita regolarment.

L-iskop tal-kamra tat-temperatura tal-kolonna huwa li żżomm temperatura kostanti tal-kolonna biex tevita bidliet fil-ħin ta 'żamma u biex tiżgura l-istabbiltà tas-separazzjoni.

Id-ditekter huwa mezz użat biex jimmonitorja kontinwament il-kompożizzjoni u l-bidliet fil-kontenut tal-effluwent wara separazzjoni mill-kolonna u huwa wieħed mit-tliet komponenti ewlenin tal- Strument HPLC. Id-ditekter tal-HPLC jeħtieġ sensittività għolja, ħsejjes baxxi, firxa lineari wiesgħa, ripetibbiltà tajba, u firxa wiesgħa ta 'applikazzjonijiet.

L-operazzjonijiet tal-ġbir, il-ħażna, il-wiri, l-istampar u l-ipproċessar tad-dejta tat-test sabiex is-separazzjoni, il-preparazzjoni jew l-identifikazzjoni tal-kampjuni jkunu jistgħu jitwettqu b'mod korrett huma l-funzjonijiet tas-sistema tal-ipproċessar tad-dejta.

FPLC hija magħrufa wkoll bħala kromatografija likwida tal-proteina mgħaġġla. Il-prinċipju tal-FPLC huwa simili għal dak tal-kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja. Hija kromatografija likwida moderna żviluppata bl-introduzzjoni tat-teorija tal-kromatografija tal-gass minn kromatografija tal-kolonna likwida klassika, u r-riforma tal-korp tal-fażi b'pompa ta 'infużjoni bi pressjoni għolja, detector sensittiv għoli, apparat ta' elużjoni tal-gradjent, apparat ta 'ġbir awtomatiku u mikrokompjuter.

Sistema FPLC hija ddisinjata apposta għas-separazzjoni ta 'proteini, peptidi, u polinukleotidi, li hija innovazzjoni importanti ta' FPLC f'dawn l-aħħar snin. Mhux biss iżomm il-karatteristiċi ta 'HPLC bħal riżoluzzjoni rapida u għolja iżda għandu wkoll il-karatteristiċi ta' kapaċità ta 'kolonna kbira, effiċjenza għolja ta' rkupru, u inqas diżattivazzjoni ta 'makromolekuli bijoloġiċi. Għalhekk, intuża ħafna fis-separazzjoni ta 'proteini, peptidi, u oligonukleotidi f'dawn l-aħħar snin.

Jekk inti interessat tagħna Sistema HPLC jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil [protett bl-email], aħna se nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.