Spin Kolonna
Katalgu: Spin Kolonni
X'inhi spin column?
Kolonni spin jistgħu jintużaw għall-estrazzjoni tad-DNA/RNA u r-raffinar ta 'diversi materjali. Il- spin kolonna fih reżina ta' skambju ta' anjoni u katjoni. Fir-reazzjoni tal-iskambju tal-joni, katjoni (bħal Na+) fl-ilma jiġu trasferiti għar-reżina, filwaqt li H+ skambjabbli fuq ir-reżina tal-iskambju tal-joni jiġi trasferit għall-ilma. Il-proċess tat-trasferiment ta 'Na + mill-ilma għar-reżina huwa l-proċess ta' sostituzzjoni tal-jone. U l-proċess ta 'bdil ta' H + fuq ir-reżina għall-ilma jissejjaħ il-proċess ta 'ħelsien. Għalhekk, bħala riżultat tal-proċess ta 'sostituzzjoni u ħelsien, postijiet ta' skambju ta 'Na + u H +, u din il-bidla tissejjaħ skambju joniku. Bl-istess mod, ir-reżina negattiva tisposta OH- biex tipproduċi H2O. L-iskambju tar-reżina huwa kkaratterizzat minn kapaċità ta 'skambju għolja, reżistenza baxxa għall-fluss tal-ilma, saħħa mekkanika għolja, u stabbiltà kimika tajba. Fl-istess ħin, l-iskambju tar-reżina għandu reazzjoni ta 'skambju riversibbli, li tiffaċilita r-riġenerazzjoni u l-għażla ta' diversi adsorbiment ta 'jone biex jinkiseb l-iskop tat-tneħħija u l-purifikazzjoni tal-melħ.
Spin-kolonna għandu l-karatteristiċi ta 'tħaddim sempliċi, rata għolja ta' rkupru, u prestazzjoni stabbli. Bhalissa, spin kolonni huma popolari mal-biċċa l-kbira tal-laboratorji u l-kumpaniji fid-dar u barra. Huma jużaw membrani tas-silika bħala materjali assorbenti speċifiċi għall-aċidi nuklejċi filwaqt li jibqgħu fil-biċċa l-kbira mhux assorbenti għal materjali bijoloġiċi oħra. Dan jiggarantixxi l-irkupru massimu tad-DNA\RNA mill-kampjun filwaqt li jitneħħew impuritajiet oħra.
Spin kolonni linja assemblaġġ
Komponenti tal-prodott
a. Tubu tal-ġbir tal-likwidu
It-tubi tal-ġbir huma magħmula minn polypropylene ta 'grad mediku f'volumi ta' 2ml u 50ml.
b. Kolonna
Il-kolonna hija magħmula minn polypropylene ta 'grad mediku b'qiegħ tal-malja jew b'konnettur u għandha kapaċità ta' madwar 1ml jew 25ml.
ċ. Siegla
Is-siegla hija materjal tal-fibra speċjali li huwa reżistenti għall-aċidi u l-bażijiet u l-biċċa l-kbira tas-solventi organiċi u ma jassorbix għall-biċċa l-kbira tal-bijomolekuli.
d. Membrana tal-filtru
Silikon ottimizzati apposta jew membrani tal-fibra tal-ħġieġ magħmula minn materja prima importata jistgħu jassorbu molekuli ta 'aċidu nuklejku sal-limitu massimu.
Karatteristiċi tal-kolonna spin
A. Spin kolonni għall-purifikazzjoni tad-DNA.
B. Spin kolonni għall-purifikazzjoni RNA.
Ċ. Kapaċità ta' rbit ta' 45-50µg.
D. Id-daqs tal-framment huwa minn 65bp sa 10kbp.
E. Il-formulazzjonijiet ta' buffer huma adattati għall-preparazzjoni tal-plażmidi fi kwantitajiet żgħar, l-estrazzjoni tal-ġel, u t-tneħħija tal-PCR.
F. Il spin kolonna hija mimlija b'numru kbir ta 'membrani tal-fibra tal-ħġieġ, li hija teknika bbażata fuq il-metodu ta' estrazzjoni tal-fibra tal-ħġieġ għal estrazzjoni rapida ta 'aċidi nuklejċi.
Applikazzjonijiet tal-kolonna spin
Spin kolonna u tubu tal-ġbir għandhom ħafna użi fil-laboratorju, pereżempju:
a. RNA purifikazzjoni,
b. Estrazzjoni tad-DNA tal-plażmidi,
ċ. Estrazzjoni tad-DNA ġenomika,
d. Purifikazzjoni rapida tal-prodotti tal-amplifikazzjoni tal-PCR,
e. Irkupru ta' linji ta' DNA minn ġellijiet tal-agarose,
f. Iżolament ta' DNA speċifiku minn taħlitiet ta' reazzjoni,
g. Purifikazzjoni tal-prodotti tal-PCR,
h. Purifikazzjoni ta' DNA jew RNA b'fergħa waħda jew doppja f'impuritajiet bħal melħ, solvent, enzima, jew proteina,
i. Oħrajn.
Spin kolonni għall-purifikazzjoni tad-DNA
A. Prinċipji sperimentali tal-purifikazzjoni tad-DNA tal-plażmidi
L-ethidium bromide jingħaqad mad-DNA billi jidħol bejn il-bażijiet, li min-naħa tiegħu jikkawża li l-elika doppja tinħall, u b'hekk iżżid it-tul tad-DNA lineari. Biex jikkumpensaw, unitajiet supereliċi jiġu introdotti fid-DNA tal-plażmid b'ċirkwit magħluq. L-unitajiet supereliċi jiżdiedu konsiderevolment, u b'hekk jipprevjenu aktar inkorporazzjoni tal-molekula tal-ethidium bromide. Il-molekula lineari, madankollu, mhijiex limitata u tista' tkompli torbot aktar ethidium bromide sakemm tintlaħaq is-saturazzjoni (madwar molekula waħda ta' ethidium bromide għal kull żewġ pari ta' bażijiet). Id-densità fluwenti tal-molekuli tad-DNA lineari u b'ċirkwit magħluq fi gradi ta' cesium chloride li fihom ammonti saturanti ta' ethidium bromide tvarja minħabba d-differenzi fl-ammont ta' żebgħa marbuta. Għal ħafna snin, iċ-ċentrifugazzjoni tal-ekwilibrazzjoni tal-gradjent taċ-cesium chloride-ethidium bromide kienet il-metodu preferut għall-preparazzjoni ta' ammonti kbar ta' DNA tal-plażmid. Madankollu, dan il-proċess huwa għali u jieħu ħafna ħin, u ġew żviluppati ħafna metodi alternattivi għal dan il-għan. Metodi li inkludew is-separazzjoni tad-DNA tal-plażmid u d-DNA ospitanti bl-użu tal-kromatografija tal-iskambju joniku, kromatografija tal-filtrazzjoni bil-ġel, preċipitazzjoni gradata, eċċ. Fost dawn, il-metodu ta' preċipitazzjoni gradata tal-polietilen glikol huwa l-aktar wieħed użat komunement.
B. Kolonna ta' purifikazzjoni tal-PCR
a. Purifikazzjoni diretta tal-prodott
Wara li titlesta l-amplifikazzjoni tal-PCR, il-prodott jeħtieġ li jiġi skopert permezz ta' elettroforesi bil-ġell tal-agarose. Fil-każ ta' strixxa waħda mingħajr strixxi foloz oħra, il-prodott jista' jiġi ppurifikat direttament. Metodi komuni ta' purifikazzjoni huma l-ġell tas-silika kolonna tal-kromatografija metodu, metodu ta' żibeġ manjetiċi, u metodi oħra ta' purifikazzjoni.
b. Kolonna tas-silika għal Estrazzjoni tad-DNA
Prinċipju tal-kolonna spin tal-membrana tas-silika
Dak li jassorbi d-DNA fil-biċċa l-kbira tal-kolonni ċentrifugali spin kolonna ċentrifuga hija membrana tas-silika, li hija saff ta 'fibri tal-ħġieġ. Il-wiċċ tiegħu għandu numru kbir ta 'gruppi idrossili tas-silikon modifikati (Si-OH). Il-grupp ta 'hydroxyl tas-silika huwa ċċarġjat b'mod negattiv wara dissoċjazzjoni f'soluzzjoni, u mbagħad jifforma pont elettriku b'jonji tal-melħ iċċarġjati b'mod pożittiv u DNA iċċarġjat b'mod negattiv, li jassorbi DNA, li jagħmel DNA double-stranded f'single stranded u mhux eluż minn solventi bijomolekulari. Madankollu, jista 'jiġi idratat minn buffer li jinħall fl-ilma u mbagħad jiġi rkuprat b'mod kwantitattiv, u b'hekk tinkiseb purifikazzjoni u separazzjoni.
Wara li titlesta l-amplifikazzjoni tal-PCR, ħlief għal frammenti tad-DNA, hemm ukoll joni, dNTP, primers, u polimerażi preżenti fis-sistema ta 'reazzjoni, li se jaffettwaw esperimenti sussegwenti ta' klonazzjoni u sekwenzar, għalhekk il-purifikazzjoni tal-prodotti hija pass indispensabbli.
Purifikazzjoni tal-proteina tal-kolonna spin
L-iżolament u l-purifikazzjoni tal-proteini jintużaw ħafna f'applikazzjonijiet ta 'riċerka bijokimika. Ċellula ewkarjotika tipika jista 'jkun fiha eluf ta' proteini differenti, xi wħud abbundanti ħafna u oħrajn fihom biss ftit kopji. Biex tistudja proteina partikolari, dik il-proteina trid l-ewwel tiġi purifikata minn proteini oħra u molekuli mhux proteini. L-iskop ta purifikazzjoni tal-proteini huwa li tissepara l-proteina fil-mira mill-komponenti kollha tal-lisat taċ-ċelluli, filwaqt li xorta żżomm l-attività bijoloġika u l-integrità kimika tal-proteina. Is-separazzjoni u l-purifikazzjoni tal-proteini hija kompitu diffiċli u impenjattiv, u għandek bżonn tagħżel il-metodu ta 'purifikazzjoni xieraq biex ittejjeb il-purità tal-prodotti tal-proteini miksuba skont il-karatteristiċi tal-proteina.
Is-sekwenzi differenti ta 'aċidi amminiċi u l-istrutturi spazjali ta' proteini differenti jwasslu għal differenzi fil-proprjetajiet fiżiċi, kimiċi u bijoloġiċi tagħhom. Bl-użu tad-differenzi fil-proprjetajiet bejn il-proteina li għandha tiġi iżolata u proteini oħra, tista 'tiġi ddisinjata skema raġonevoli ta' purifikazzjoni tal-proteini.
Il-proċedura ġenerali għall-iżolament u l-purifikazzjoni ta 'proteina partikolari tista' tinqasam fi tliet passi: trattament minn qabel, gradazzjoni oħxon, u suddiviżjoni.
Trattament minn qabel
Biex tiġi iżolata u ppurifikata proteina, il-proteina għandha l-ewwel tiġi rilaxxata mit-tessut jew miċ-ċellula oriġinali fi stat solubbli u tibqa' fl-istat naturali oriġinali tagħha mingħajr telf ta' attività bijoloġika. Għal din ir-raġuni, il-materjali tal-annimali għandhom l-ewwel jitneħħew mit-tessuti konnettivi u xaħmin, il-materjali taż-żerriegħa għandhom l-ewwel jitqaxxru jew saħansitra jitneħħew mill-qoxra taż-żerriegħa biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni minn tannini u sustanzi oħra, u ż-żerriegħa taż-żejt preferibbilment għandha titneħħa l-grass l-ewwel b'solvent organiku b'punt ta' togħlija baxx bħall-etere. It-tessuti u ċ-ċelloli mbagħad jiġu mgħaffġa skont il-metodu xieraq magħżul għal kull każ. It-tessuti u ċ-ċelloli tal-annimali jistgħu jiġu mgħaffġa b'magni tat-tgħaffiġ elettriċi jew omoġenizzaturi jew mgħaffġin bi trattament ultrasoniku. It-tessuti u ċ-ċelloli tal-pjanti, minħabba li għandhom ħitan taċ-ċelloli magħmula minn ċelluloża, emiċelluloża, u pektin, ġeneralment jeħtieġu metodu ta’ tħin bir-ramel tal-kwarz jew trab tal-ħġieġ, u estratti xierqa flimkien jew trattament biċ-ċellulosa jistgħu wkoll iservu għal dan l-iskop. Il-frammentazzjoni taċ-ċelloli batteriċi hija aktar problematika għaliex l-iskeletru kollu tal-ħajt taċ-ċellula batterika huwa makromolekula simili għal borża peptidoglikana konnessa b’rabtiet kovalenti, li hija iebsa ħafna. Metodi komuni biex jitkissru l-ħitan taċ-ċelloli batteriċi jinkludu tgħaffiġ ultrasoniku, tħin bir-ramel, estrużjoni bi pressjoni għolja, jew trattament bil-liżożima. Wara l-frammentazzjoni tat-tessut u ċ-ċelloli, il-proteina mixtieqa tiġi estratta billi tintgħażel il-buffer xieraq. Materjal insolubbli bħal debris taċ-ċelloli jitneħħa permezz ta’ ċentrifugazzjoni jew filtrazzjoni.
Jekk il-proteina mixtieqa hija kkonċentrata f'frazzjoni ċellulari waħda, bħall-nukleu, il-kromożomi, ir-ribosomi, jew ċitoplasma solubbli, jistgħu jiġu sseparati b'ċentrifugazzjoni differenzjali u l-frazzjoni ċellulari tinġabar bħala materjal għall-pass ta 'purifikazzjoni li jmiss. Jekk il-proteina mixtieqa hija marbuta mal-membrana taċ-ċellula jew l-organelli tal-membrana, l-istruttura tal-membrana għandha tiġi depolimerizzata bl-użu ta 'ultrasound jew dekontaminanti u mbagħad estratta b'midja xierqa.
Separazzjoni oħxon
Ladarba l-estratti tal-proteini (xi kultant imħallta ma 'aċidi nuklejċi, polisakkaridi, eċċ.) huma miksuba, sett ta' metodi xierqa għandhom jintgħażlu biex tissepara l-proteina mixtieqa minn proteini mixxellanji oħra. Ġeneralment, dan il-pass ta 'separazzjoni jitwettaq permezz ta' salinizzazzjoni, preċipitazzjoni tal-punt iżoelettrika, u separazzjoni gradata b'solventi organiċi. Dawn il-metodi huma kkaratterizzati minn sempliċità u volum kbir ta 'proċessar, li jistgħu jneħħu numru kbir ta' impuritajiet u jikkonċentraw ukoll is-soluzzjoni tal-proteina. Xi estratti tal-proteini huma kbar u mhux adattati għall-konċentrazzjoni permezz ta 'preċipitazzjoni jew tmelliħ, jistgħu jiġu kkonċentrati b'aktar minn filtrazzjoni, filtrazzjoni tal-ġel, tnixxif bil-friża-vakwu, jew metodi oħra.
Separazzjoni fina
Wara li l-kampjun jiġi sseparat permezz ta 'klassifikazzjoni oħxon, il-volum huwa ġeneralment żgħir u ħafna mill-eteroproteini tneħħew. Għal aktar purifikazzjoni, metodi kromatografiċi inklużi filtrazzjoni tal-ġel, kromatografija ta 'skambju ta' joni, kromatografija ta 'adsorbiment, u kromatografija ta' affinità huma ġeneralment użati. L-elettroforeżi, inkluż l-elettroforeżi tal-medda taż-żona u l-iffukar fuq il-post iżoelettriku, tista 'wkoll tintgħażel bħala l-pass finali ta' purifikazzjoni jekk meħtieġ. Il-metodi użati għal separazzjonijiet iggradati fin huma ġeneralment żgħar fl-iskala iżda għolja fir-riżoluzzjoni.
Il-kristallizzazzjoni hija l-aħħar pass fis-separazzjoni u l-purifikazzjoni tal-proteini. Għalkemm il-proċess ta 'kristallizzazzjoni ma jiggarantixxix li l-proteina hija neċessarjament omoġenja, il-kristallizzazzjoni tista' sseħħ biss jekk proteina hija kwantitattivament dominanti fis-soluzzjoni. Il-proċess ta 'kristallizzazzjoni innifsu huwa akkumpanjat minn grad ta' purifikazzjoni, u r-rikristallizzazzjoni tneħħi ammonti żgħar ta 'proteini maqbuda. Peress li qatt ma jinstabu proteini żnaturati waqt il-kristallizzazzjoni, il-kristallizzazzjoni tal-proteini mhix biss sinjal ta 'purità iżda wkoll indikatur qawwi li l-prodott huwa fl-istat naturali tiegħu.
Kolonna spin tal-konċentratur tal-proteini
Il - metodu ta ' kolonni spin tal-proteini jirreferi għal metodu kromatografiku li fih buffer jew solvent organiku jintuża bħala l-fażi mobbli u adsorbent solidu jintuża bħala l-fażi stazzjonarja biex tagħmel il-kompożizzjoni tal-kolonna.
Magna tal-assemblaġġ tal-kolonna spin b'daħħal filtru
Kif tixtri spin column?
Jekk inti interessat tagħna Spin Kolonna jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.