Strument ta 'Electrophoresis Kapillari
X'inhu l-istrument ta 'elettroforeżi kapillari?
Strument ta 'elettroforeżi kapillari huwa strument tal-laboratorju li jifred il-komponenti billi juża kapillari tal-kwarz flessibbli bħala l-kanal tas-separazzjoni u kamp elettriku DC ta 'vultaġġ għoli bħala l-forza li tmexxi u mbagħad jifred il-komponenti skont id-differenzi fir-rata tal-fluss (rata ta' migrazzjoni għal kull unità ta 'qawwa tal-kamp elettriku) u l-imġieba tad-distribuzzjoni ta' kull komponent fil-kampjun.
Prinċipju ta 'ħidma ta' strument ta 'elettroforeżi kapillari
Meta l-elettrolit jitgħabba u jitħaddem f'kolonna ta 'elettroforeżi kapillari, il-fluss elettroosmotiku jiġi ġġenerat minħabba l-preżenza ta' gruppi ta 'hydroxyl tas-silikonju fil-ħajt tat-tubu, u s-soluzzjoni ġewwa l-kolonna kapillari kollha timxi b'mod direzzjonali mmexxi mill-fluss elettroosmotiku. . Il-prinċipju tas-separazzjoni huwa bbażat fuq id-differenza fil-veloċità tal-migrazzjoni tal-jone taħt l-azzjoni tal-kamp elettriku, li hija d-differenza ewlenija mit-teknika kromatografika ġenerali, aktar milli fuq il-koeffiċjent tal-qsim tal-komponenti fil-fażijiet mobbli u stazzjonarji.
Storja ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
| Skeda tal-ħin (Sena) | żvilupp |
|---|---|
| 1967 | L-ewwel biex twettaq elettroforeżi żonali ta 'soluzzjonijiet ħielsa f'kapillari ta' dijametru ta '3mm. |
| 1974 | Separazzjoni permezz ta 'elettroforeżi f'kapillari ta' dijametru ta 'ġewwa ta' 200 ~ 500μm. |
| 1981 | L-elettroforeżi nkisbet bl-użu ta 'kolonna kapillari tal-ħġieġ b'dijametru ta' ġewwa ta '75μm b'vultaġġ ta' 30kV. |
| 1984 | Introdotta kromatografija elettrokinetika kapillari micellari. |
| 1987 | Iffukar iżoelettriku kapillari realizzat u elettroforesi tal-ġel kapillari. |
| 1988 | Introduċa CE bħala l-ewwel estrazzjoni ta 'mikro-likwidu, u introduċa l-lejżer f'diteter CE, li tejbet ħafna s-sensittività ta' skoperta. |
Kostruzzjoni bażika ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
Il-komponenti ewlenin tal-istrument tal-elettroforesi kapillari huma provvista ta' enerġija ta' vultaġġ għoli DC, tubu kapillari, elettrodu, u banju tal-elettrodu, sistema ta' tlaħliħ, sistema ta' skoperta, u sistema ta' pproċessar tad-dejta. L-istess buffer bħal ġewwa t-tubu kapillari huwa ppakkjat f'żewġ fliexken buffer. Iż-żewġt itruf tat-tubu kapillari jitqiegħdu fiż-żewġ fliexken buffer, u l-platinu elettrodi jiddaħħlu f'kull wieħed miż-żewġ fliexken tal-buffer. Matul l-esperiment, il- soluzzjoni tal-elettroliti fiż-żewġ fliexken buffer għandhom jinżammu fl-istess livell tal-likwidu u t-truf tat-tubi kapillari għandhom jiddaħħlu fl-istess fond taħt il-livell tal-likwidu għaliex l-effett ta' sifun ikkawżat mid-differenza fil-pressjoni bejn it-truf tat-tubi kapillari jirriżulta fil-fluss tas-soluzzjoni, li jaffettwa r-riżultati tal-analiżi.
A. Kolonna kapillari
Il-kolonna kapillari mgħammra hija ġeneralment tat-tip ta 'tubu tond, li għandha tkun inerti kimikament u elettrikament, trażmissjoni tad-dawl, flessibbli u faċli biex titgħawweġ. Id-dijametru ta 'ġewwa tal-kolonna kapillari għandu jkun inqas minn 140 mikron, li jagħmilha dissipazzjoni aħjar tas-sħana. Bħalissa, kolonni kapillari b'dijametru ta 'ġewwa bejn 25 u 75 mikron huma l-aktar mgħammra b'mod komuni.
Materjal tal-kolonna kapillari
a. Kwarz
Il-kwarz huwa l-aktar materjal komuni użat biex isiru kolonni kapillari. Il-komponent bażiku tal-kwarz huwa d-dijossidu tas-silikon, li huwa maqsum fi kwarz naturali u kwarz artifiċjali.
b. Ħġieġ
Mill-materjali kollha, il-ħġieġ għandu l-iktar elettro-permeabilità b'saħħitha. Madankollu, materjal tal-ħġieġ fih impuritajiet.
ċ. Politetrafluworoetilen
Polytetrafluoroethylene għandu proprjetajiet bħal permeabilità UV u elettro-osmosis dgħajfa. L-iżvantaġġi tal-użu ta 'PTFE huma li t-tubi m'għandhomx dijametru ta' ġewwa uniformi, assorbiment għall-kampjun, trasferiment ta 'sħana fqir, eċċ.
B. Detector
L-intraċċar huma normalment UV jew ditekters fluworexxenti indotti bil-lejżer.
Ċ. Provvista ta' enerġija b'vultaġġ għoli
Mgħammar b'provvista ta 'enerġija ta' vultaġġ għoli 0-30 kV, 200-300 mA.
D. Teknoloġija tal-kampjunar
a. Injezzjoni motorizzata, magħrufa wkoll bħala injezzjoni ta' elettromigrazzjoni.
b. L-injezzjoni pnewmatika, magħrufa wkoll bħala injezzjoni bi pressjoni differenzjali, tirreferi għall-azzjoni ta' sifun billi tiġi ppreżżurizzata n-naħa tad-dħul u titnaqqas il-pressjoni min-naħa tal-ħruġ.
E. Sistema ta' buffering CE
| Sistema ta 'buffering CE | Medda |
|---|---|
| Sistema tal-fosfat tas-sodju | Firxa wiesgħa ta 'buffer |
| Sistema tal-borat tas-sodju | Firxa ta 'pH għolja |
| Sistema Tris-HCI | Firxa baxxa tal-pH |
| Aċidu aċetiku-ammonju aċetat sistema | Sistemi komuni CE/MS |
Proċess ta 'ħidma ta' strument ta 'elettroforeżi kapillari
a. Imla l-kolonna kapillari bil-bafer.
b. It-tarf tal-injezzjoni jiġi sostitwit b' cuvette injezzjoni.
ċ. Ibdel lura għall-buffer pool.
d. Vultaġġ għoli applikat.
e. Separazzjoni tal-komponenti minħabba differenzi fil-fluss u fid-distribuzzjoni.
f. Ditekter tal-fluworexxenza indotta mill-UV jew bil-lejżer.
g. Sistema ta' reġistrazzjoni u pproċessar tad-dejta.
h. Kromatogramma.
Applikazzjoni ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
Sistema ta 'elettroforeżi kapillari
A. Ittestjar mediku u kliniku
Applikazzjonijiet ta ' elettroforeżi kapillari fl-ittestjar mediku u kliniku jinkludu ttestjar patoloġiku tal-pazjenti, dijanjosi tal-mard, analiżi tal-mekkaniżmi tal-mard, u analiżi tal-metaboliti in vivo. L-oġġetti tal-analiżi huma mediċini, markaturi relatati mal-mard, joni fil-fluwidi jew tessuti tal-ġisem, eċċ.
B. Drogi u prodotti naturali
L-analiżi CE u l-iskoperta ta 'drogi jew prodotti naturali jinkludu prinċipalment drogi sintetiċi, drogi tal-proteini, u ingredjenti attivi tal-pjanti.
Ċ. Prodotti tal-ikel u agrikoli
Minħabba l-attenzjoni dejjem tikber għall-kwistjonijiet tas-sikurezza tal-ikel, in-numru ta 'metodi CE użati għas-sikurezza tal-ikel u l-ittestjar tal-prodotti agrikoli żdied minn sena għal sena. L-ittestjar tas-sikurezza tal-ikel jinkludi prinċipalment is-sejbien ta 'addittivi tal-ikel, ċerti komponenti, jew ingredjenti ta' ħsara fl-ikel. L-ittestjar tal-prodotti agrikoli jinkludi residwi tal-pestiċidi u l-ittestjar tal-ingredjenti attivi tal-prodotti agrikoli.
D. Bijomolekuli
CE għandu l-vantaġġ li jiskopri makromolekuli bijoloġiċi bħal proteini, aċidi nuklejċi, u zokkor. Huwa wkoll użat ħafna għall-iskoperta ta 'molekuli żgħar bijoloġiċi jew intermedji metaboliċi.
E. Analiżi kirali
CE jista 'jintuża għall-qsim chiral, bħal separazzjoni enantiomeric ta' aċidi amminiċi jew molekuli żgħar, molekuli tad-droga, u paragun u evalwazzjoni ta 'aġenti ta' qsim chiral.
F. Monitoraġġ ambjentali
Elettroforeżi kapillari jista 'jintuża biex jieħu kampjun ta' ilma kkontaminat direttament mingħajr trattament minn qabel, u b'hekk jindividwa malajr antibijotiċi, ormoni, jew drogi, u joni tal-metall tqil fl-ilma.
Użu ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
Magna tal-elettroforeżi kapillari
Analiżi elettroforesi kapillari teħtieġ livell għoli ta 'teknika ta' injezzjoni, u l-operazzjoni ta 'injezzjoni hija kif ġej.
a. Iktar ma tkun żgħira l-medda taż-żona tad-dħul tal-kampjun, aħjar ikun. Irrispettivament mill-metodu ta' injezzjoni, il-fond tat-tubu kapillari mdaħħal fis-soluzzjoni tal-kampjun ġeneralment għandu jkun inqas minn 1% sa 2% tat-tul totali tat-tubu kapillari. Dan jimminimizza l-prestazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun permezz tal-assorbiment kapillari fit-tubu kapillari u jaffettwa l-volum tal-injezzjoni. Jekk is-soluzzjoni fit-tubu tal-kampjun hija ta' 5 μL, il-volum tal-injezzjoni għandu jkun ta' 1 sa 50 nL.
b. Il-ħin tal-injezzjoni għandu jkun qasir. Normalment, il-ħin tal-injezzjoni huwa ta' 0.5 sa 1s, f'liema ħin l-ammont ta' kampjun imwaħħal mal-kapillari huwa negliġibbli relattiv għall-volum tal-inalazzjoni. Għalkemm il-ħin tal-injezzjoni tal-elettroforesi kapillari jista' jkun sa ±0.1s, xi soluzzjoni inevitabbilment teħel mal-kapillari meta tiddaħħal fit-tubu tal-kampjun, għalhekk ħin qasir ta' injezzjoni jaffettwa r-riproduċibbiltà tal-analiżi.
c. Pre-konċentrazzjoni tal-kampjun. Ristretta mill-volum totali fil-kapillari, għal kampjuni b'konċentrazzjoni dilwita ħafna, l-elettroforesi kapillari ma tistax iżżid il-volum tal-kampjun biex ittejjeb is-sensittività tad-detezzjoni kif tista' tagħmel l-HPLC, iżda jistgħu jittieħdu xi miżuri biex tittejjeb.
a) Meta l-konduttività tal-buffer tal-kampjun tkun sinifikament aktar baxxa minn dik tal-buffer tal-elettroforesi b'aktar minn 100 darba, iż-żieda ta' vultaġġ fiż-żewġt itruf tal-kapillari tista' tifforma kamp elettriku akbar quddiem u wara ż-żona tal-kampjun, li jagħmel il-molekuli fis-soluzzjoni tal-kampjun jemigraw aktar malajr. Meta dawn il-molekuli jilħqu l-konfini tal-buffer tal-elettroforesi, il-veloċità tal-migrazzjoni tonqos minħabba li l-kamp elettriku jiddgħajjef, sabiex iż-żona tal-kampjun issir aktar dejqa u l-konċentrazzjoni tiżdied, u l-iskop tal-konċentrazzjoni jintlaħaq.
b) Meta l-buffer tal-kampjun u l-buffer tal-elettrodu jkollhom l-istess konduttanza, u l-konċentrazzjoni tal-kampjun tkun dilwita u mhux adattata għal aktar dilwizzjoni, ftit ilma jista' jiġi inalat qabel ma jiġi injettat il-kampjun, li jista' wkoll jikseb l-iskop tal-konċentrazzjoni.
c) Irrispettivament minn liema tip ta' metodu ta' injezzjoni jiġi adottat, il-metodu ta' hawn fuq jista' jwassal biex il-kampjun jinġabar u jikkonċentra. Madankollu, minħabba t-tnaqqis qawwi fil-potenzjal fiż-żona tal-istivar, dan iwassal għal żieda fit-temperatura f'din iż-żona.
d. L-operazzjoni tal-għoti tal-kampjuni għandha tinbeda immedjatament wara li l-kapillari jiddaħħal fis-soluzzjoni tal-kampjun. Wara t-tlestija, il-kapillari għandu jiġi mċaqlaq malajr lejn il-buffer biex tibda l-elettroforesi. Inkella, iseħħu azzjoni kapillari u sifun, li jikkawżaw żbalji u twessigħ tal-medda spettrali.
e. L-elettrodu m'għandux ikun f'kuntatt mat-tubu kapillari. Il-livell tar-riżervwar tal-kampjun u r-riżervwar tal-bafer għandhom ikunu bbilanċjati.
f. Żomm is-sistema kostanti kemm jista' jkun. Għax it-temperatura taffettwa direttament il-viskożità u taffettwa l-ammont kostanti tal-kampjun li jingħata.
g. Is-solvent fis-soluzzjoni tal-kampjun irid ikun solubbli b'mod reċiproku mal-buffer, u s-saħħa jonika tal-ewwel għandha tkun inqas minn dik tat-tieni.
h. Prevenzjoni tal-evaporazzjoni u t-telf tas-soluzzjonijiet u l-buffers tal-kampjuni.
Kif tixtri strument ta 'elettroforeżi kapillari?
Jekk inti interessat tagħna Strument ta 'Electrophoresis Kapillari jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil info@antiteck.com, aħna nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.