Strument ta 'Electrophoresis Kapillari

kontenut
1. X'inhu l-istrument ta 'elettroforeżi kapillari?
    1.1 Prinċipju ta 'ħidma ta' strument ta 'elettroforeżi kapillari
    1.2 Storja ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
    1.3 Kostruzzjoni bażika ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
    1.4 Proċess ta 'ħidma ta' strument ta 'elettroforeżi kapillari
    1.5 Karatteristika ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
2. Applikazzjoni ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
3. Użu ta 'strument ta' elettroforeżi kapillari
4. Kif tixtri strument ta 'elettroforeżi kapillari?

Strument ta 'elettroforeżi kapillari huwa strument tal-laboratorju li jifred il-komponenti billi juża kapillari tal-kwarz flessibbli bħala l-kanal tas-separazzjoni u kamp elettriku DC ta 'vultaġġ għoli bħala l-forza li tmexxi u mbagħad jifred il-komponenti skont id-differenzi fir-rata tal-fluss (rata ta' migrazzjoni għal kull unità ta 'qawwa tal-kamp elettriku) u l-imġieba tad-distribuzzjoni ta' kull komponent fil-kampjun.

Meta l-elettrolit jitgħabba u jitħaddem f'kolonna ta 'elettroforeżi kapillari, il-fluss elettroosmotiku jiġi ġġenerat minħabba l-preżenza ta' gruppi ta 'hydroxyl tas-silikonju fil-ħajt tat-tubu, u s-soluzzjoni ġewwa l-kolonna kapillari kollha timxi b'mod direzzjonali mmexxi mill-fluss elettroosmotiku. . Il-prinċipju tas-separazzjoni huwa bbażat fuq id-differenza fil-veloċità tal-migrazzjoni tal-jone taħt l-azzjoni tal-kamp elettriku, li hija d-differenza ewlenija mit-teknika kromatografika ġenerali, aktar milli fuq il-koeffiċjent tal-qsim tal-komponenti fil-fażijiet mobbli u stazzjonarji.

Il-komponenti ewlenin ta 'l-istrument ta' l-elettroforeżi kapillari huma provvista ta 'enerġija ta' vultaġġ għoli DC, tubu kapillari, elettrodu, u banju ta 'elettrodu, sistema ta' għalf laħlaħ, sistema ta 'skoperta u sistema ta' pproċessar tad-dejta. L-istess buffer bħal ġewwa t-tubu kapillari huwa ppakkjat f'żewġ fliexken buffer. Iż-żewġt itruf tat-tubu kapillari jitqiegħdu fiż-żewġ fliexken buffer, u elettrodi tal-platinu jiddaħħlu f'kull wieħed miż-żewġ fliexken buffer. Matul l-esperiment, is-soluzzjoni tal-elettrolit fiż-żewġ fliexken buffer għandha tinżamm fl-istess livell likwidu u t-truf tat-tubi kapillari għandhom jiddaħħlu fl-istess fond taħt il-livell tal-likwidu minħabba li l-effett tas-sifon ikkawżat mid-differenza tal-pressjoni bejn it-truf tat-tubi kapillari jirriżulta fil-fluss tas-soluzzjoni, li taffettwa r-riżultati tal-analiżi.

Il-kolonna kapillari mgħammra hija ġeneralment tat-tip ta 'tubu tond, li għandha tkun inerti kimikament u elettrikament, trażmissjoni tad-dawl, flessibbli u faċli biex titgħawweġ. Id-dijametru ta 'ġewwa tal-kolonna kapillari għandu jkun inqas minn 140 mikron, li jagħmilha dissipazzjoni aħjar tas-sħana. Bħalissa, kolonni kapillari b'dijametru ta 'ġewwa bejn 25 u 75 mikron huma l-aktar mgħammra b'mod komuni.

Il-kwarz huwa l-aktar materjal komuni użat biex isiru kolonni kapillari. Il-komponent bażiku tal-kwarz huwa d-dijossidu tas-silikon, li huwa maqsum fi kwarz naturali u kwarz artifiċjali.

Mill-materjali kollha, il-ħġieġ għandu l-iktar elettro-permeabilità b'saħħitha. Madankollu, materjal tal-ħġieġ fih impuritajiet.

Polytetrafluoroethylene għandu proprjetajiet bħal permeabilità UV u elettro-osmosis dgħajfa. L-iżvantaġġi tal-użu ta 'PTFE huma li t-tubi m'għandhomx dijametru ta' ġewwa uniformi, assorbiment għall-kampjun, trasferiment ta 'sħana fqir, eċċ.

L-intraċċar huma normalment UV jew ditekters fluworexxenti indotti bil-lejżer.

Mgħammar b'provvista ta 'enerġija ta' vultaġġ għoli 0-30 kV, 200-300 mA.

a. Injezzjoni motorizzata, magħrufa wkoll bħala injezzjoni ta 'elettromigrazzjoni.
b. Injezzjoni pnewmatika, magħrufa wkoll bħala injezzjoni ta 'pressjoni differenzjali, tirreferi għall-azzjoni tas-sifon billi tagħfas in-naħa tad-daħla u tnaqqas il-pressjoni tan-naħa tal-ħruġ.

a. Imla l-buffer fil-kolonna kapillari.

b. It-tarf ta' l-injezzjoni jinbidel b'injezzjoni ta' cuvette.

c. Aqleb lura għall-buffer pool.

d. Vultaġġ għoli applikat.

e. Separazzjoni tal-komponenti minħabba differenzi fil-fluss u d-distribuzzjoni.

f. Ditekter tal-fluworexxenza UV jew indott bil-lejżer.

g. Sistema ta' reġistrazzjoni u pproċessar tad-dejta.

h. Kromatogramma.

Applikazzjonijiet ta ' elettroforeżi kapillari fl-ittestjar mediku u kliniku jinkludu ttestjar patoloġiku tal-pazjenti, dijanjosi tal-mard, analiżi tal-mekkaniżmi tal-mard, u analiżi tal-metaboliti in vivo. L-oġġetti tal-analiżi huma mediċini, markaturi relatati mal-mard, joni fil-fluwidi jew tessuti tal-ġisem, eċċ.

L-analiżi CE u l-iskoperta ta 'drogi jew prodotti naturali jinkludu prinċipalment drogi sintetiċi, drogi tal-proteini, u ingredjenti attivi tal-pjanti.

Minħabba l-attenzjoni dejjem tikber għall-kwistjonijiet tas-sikurezza tal-ikel, in-numru ta 'metodi CE użati għas-sikurezza tal-ikel u l-ittestjar tal-prodotti agrikoli żdied minn sena għal sena. L-ittestjar tas-sikurezza tal-ikel jinkludi prinċipalment is-sejbien ta 'addittivi tal-ikel, ċerti komponenti, jew ingredjenti ta' ħsara fl-ikel. L-ittestjar tal-prodotti agrikoli jinkludi residwi tal-pestiċidi u l-ittestjar tal-ingredjenti attivi tal-prodotti agrikoli.

CE għandu l-vantaġġ li jiskopri makromolekuli bijoloġiċi bħal proteini, aċidi nuklejċi, u zokkor. Huwa wkoll użat ħafna għall-iskoperta ta 'molekuli żgħar bijoloġiċi jew intermedji metaboliċi.

CE jista 'jintuża għall-qsim chiral, bħal separazzjoni enantiomeric ta' aċidi amminiċi jew molekuli żgħar, molekuli tad-droga, u paragun u evalwazzjoni ta 'aġenti ta' qsim chiral.

Elettroforeżi kapillari jista 'jintuża biex jieħu kampjun ta' ilma kkontaminat direttament mingħajr trattament minn qabel, u b'hekk jindividwa malajr antibijotiċi, ormoni, jew drogi, u joni tal-metall tqil fl-ilma.

Analiżi elettroforesi kapillari teħtieġ livell għoli ta 'teknika ta' injezzjoni, u l-operazzjoni ta 'injezzjoni hija kif ġej.

a. Iktar ma tkun iżgħar il-medda taż-żona tad-dħul tal-kampjun aħjar. Irrispettivament mill-metodu ta 'injezzjoni, il-fond tat-tubu kapillari mdaħħal fis-soluzzjoni tal-kampjun ġeneralment għandu jkun inqas minn 1% sa 2% tat-tul totali tat-tubu kapillari. Dan jimminimizza l-prestazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun permezz tal-adsorbiment kapillari fit-tubu kapillari u jaffettwa l-volum tal-injezzjoni. Jekk is-soluzzjoni fit-tubu tal-kampjun hija 5μL, il-volum tal-injezzjoni għandu jkun 1 sa 50nL.

b. Il-ħin tal-injezzjoni għandu jkun qasir. Normalment, il-ħin tal-injezzjoni huwa 0.5 sa 1s, f'liema ħin l-ammont ta 'kampjun mwaħħal mal-kapillari huwa negliġibbli relattiv għall-volum ta' inalazzjoni. Għalkemm il-ħin tal-injezzjoni tal-elettroforeżi kapillari jista 'jkun sa ± 0.1s, xi soluzzjoni inevitabbilment se taderixxi mal-kapillari meta tiddaħħal fit-tubu tal-kampjun, għalhekk ħin qasir ta' injezzjoni jaffettwa r-riproduċibbiltà tal-analiżi.

c. Pre-konċentrazzjoni tal-kampjun. Kostrett mill-volum totali fil-kapillari, għal kampjuni b'konċentrazzjoni dilwita ħafna, l-elettroforeżi kapillari ma tistax iżżid il-volum tal-kampjun biex ittejjeb is-sensittività ta 'skoperta kif jista' HPLC, iżda jistgħu jittieħdu xi miżuri biex ittejjebha.
a) Meta l-konduttività tal-buffer tal-kampjun hija sinifikament aktar baxxa minn dik tal-buffer tal-elettroforeżi b'aktar minn 100 darba, iż-żieda ta 'vultaġġ fiż-żewġt itruf tal-kapillari tista' tifforma kamp elettriku akbar quddiem u wara ż-żona tal-kampjun, li jagħmel il-molekuli fis-soluzzjoni tal-kampjun jemigraw aktar malajr. Meta dawn il-molekuli jilħqu l-konfini tal-buffer tal-elettroforeżi, il-veloċità tal-migrazzjoni tonqos minħabba li l-kamp elettriku jiddgħajjef, sabiex iż-żona tal-kampjun issir idjaq u l-konċentrazzjoni tiżdied, u jintlaħaq l-iskop tal-konċentrazzjoni.
b) Meta l-buffer tal-kampjun u l-buffer tal-elettrodu jkollhom l-istess konduttanza, u l-konċentrazzjoni tal-kampjun hija dilwita u mhux adattata għal aktar dilwizzjoni, xi ilma jista 'jinġibed man-nifs qabel ma l-kampjun jiġi injettat, li jista' wkoll jikseb l-iskop ta 'konċentrazzjoni.
c) Irrispettivament minn liema tip ta 'metodu ta' injezzjoni jiġi adottat, il-metodu ta 'hawn fuq jista' jagħmel il-kampjun jinġabar u jikkonċentra. Madankollu, minħabba t-tnaqqis qawwi fil-potenzjal fiż-żona tal-istivar, se jwassal għal żieda fit-temperatura f'din iż-żona.

d. L-operazzjoni tat-tmigħ tal-kampjun għandha tinbeda immedjatament wara li l-kapillari jiddaħħal fis-soluzzjoni tal-kampjun. Wara t-tlestija, il-kapillari għandu jiġi mċaqlaq malajr lejn il-buffer biex tibda l-elettroforesi. Inkella, se jseħħu azzjoni kapillari u sifonu, li jikkawżaw żbalji u twessigħ tal-medda spettrali.

e. L-elettrodu m'għandux ikun f'kuntatt mat-tubu kapillari. Il-livell tal-ġibjun tal-kampjun u l-ġibjun tal-buffer għandhom ikunu bilanċjati.

f. Żomm is-sistema kostanti kemm jista 'jkun. Minħabba li t-temperatura taffettwa direttament il-viskożità u taffettwa l-ammont kostanti tal-għalf tal-kampjun.

g. Is-solvent fis-soluzzjoni tal-kampjun għandu jkun reċiprokament solubbli mal-buffer, u s-saħħa jonika ta 'l-ewwel għandha tkun aktar baxxa minn dik ta' l-aħħar.

h. Evita l-evaporazzjoni u t-telf tas-soluzzjonijiet tal-kampjuni u l-buffers.

Jekk inti interessat tagħna strument ta 'elettroforeżi kapillari jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil [protett bl-email], aħna se nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.