Tubi Krijo

kontenut
1. X'inhuma t-tubi krijo?
    1.1 Daqsijiet tat-tubi krijo
2. Karatteristiċi tat-tubi krijo
    2.1 Sigurtà tat-tubi krijo
    2.2 Għotjien tat-tubi krijo
    2.3 Vantaġġi tat-tubi krijo
3. Użu ta 'tubi krijo
4. Kif tixtri tubi krijo?

Biex tiġi żgurata r-riproduċibilità u l-kontinwità tar-riżultati fir-riċerka u l-proċessi bijomediċi, ix-xjenzati tal-lum qed iħabbtu wiċċhom bil-kompitu li jippreservaw ċelloli u organiżmi ħajjin bl-aħjar vijabbiltà u jiżguraw li l-komponenti subċellulari bħall-aċidi nuklejċi u l-proteini ma jinbidlux. Tubi krijo, magħruf ukoll bħala kunjetti tal-ħażna krijoġeniċi, huma tip speċjali ta 'test tube. Jistgħu jintużaw għall-ħażna krijoġenika ta 'kampjuni, jippreservaw kampjuni bħal demm sħiħ, serum, ċelloli, eċċ. Ġeneralment huma applikati fl-industrija bijoloġika, l-industrija farmaċewtika u l-industrija tal-ikel bħala trasportatur għat-trasport b'temperatura baxxa u l-ħażna ta 'materjali bijoloġiċi.

Mhux it-tubi krijo kollha jistgħu jintużaw għan-nitroġenu likwidu, krijoġeniku kunjetti għan-nitroġenu likwidu huma ddisinjati biex jissodisfaw it-talbiet tat-temperaturi tan-nitroġenu likwidu. Huma krijotubi speċjali b'siġillar għoli u reżistenza għat-temperatura baxxa.

M'hemm l-ebda klassifikazzjoni speċifika ta ' tubu krijo, huwa ġeneralment maqsum skond il-kapaċità kif ġej:

Tubi krijo huma tubi tal-laboratorju użati biex jaħżnu kampjuni f'temperaturi baxxi. Użu mhux xieraq ta' krijotubu jista 'jikkawża splużjonijiet, li jirriżulta fi tnixxija ta' materjali perikolużi u, f'każijiet severi, anke korrimenti. Biex jitnaqqas ir-riskju ta tubu krijo splużjoni, jekk jogħġbok oqgħod attent għal-linji gwida li ġejjin meta tużaha.

a. Tubu krijo huwa ġeneralment magħmul minn polyethylene ta 'densità għolja jew polypropylene. Jista 'jinqasam f'żewġ kategoriji skont xenarji ta' użu differenti. Wieħed huwa krijotubi għall-kultura taċ-ċelluli u l-ieħor huwa krijotubi għan-nitroġenu likwidu. Dawn iż-żewġ tipi ta krijotubi jeħtieġ li jiġu distinti bir-reqqa qabel ix-xiri u l-użu, peress li t-temperaturi applikabbli tagħhom huma partikolarment differenti.

b. Kollha kunjetti tal-krijotubi għandu jkollu siegla tas-silikonju, siegla tal-gomma, jew siegla O-ring biex tiżgura siġill issikkat. Jekk jogħġbok innota li l-issikkar żżejjed tal-għatu jista 'jidforma s-siġill.

c. Tubi krijo għandha tinħażen fil-fażi tal-gass 'il fuq min-nitroġenu likwidu u mhux mgħaddsa fil-likwidu biex tiġi evitata l-penetrazzjoni tan-nitroġenu likwidu fit-tubi. L-iffullar ta' kontenituri tal-ħażna għandu jiġi evitat. Jekk il-kampjuni jridu jinħażnu fil-fażi likwida, huwa rakkomandat li tuża kmiem protettiv professjonali minn fornitur affidabbli li jipprovdi siġill estern addizzjonali.

d. Waqt l-iffriżar u l-ħażna taċ-ċelloli, it-temperatura tal-iffriżar tat-tubi għandha tkun uniformi. L-iffriżar irregolari se jirriżulta fl-iżvilupp ta 'tappijiet tas-silġ fit-tubu. Il-plakek tas-silġ jistgħu jinibixxu t-trasferiment tat-temperatura tal-fluwidu fuq iż-żewġ naħat, u joħolqu pressjonijiet perikolużi għoljin u jikkawżaw ħsara lit-tubu.

e. Tiffriżax aktar kampjuni mill-volum massimu tax-xogħol tal- tubu krijo limitu.

f. Kollha krijo tubi għandhom il-possibbiltà ta’ splużjoni. Speċjalment, krijotubi użat biex ikun fih kampjuni maħżuna taħt nitroġenu likwidu jista’ jisplodi mingħajr twissija. L-isplużjoni tat-tubu huwa maħsub li kienet ikkawżata minn nitroġenu likwidu li daħal fit-tubu minn xquq ċkejkna u mbagħad jespandi malajr hekk kif it-tubu jinħall. Għalhekk, tagħmir ta 'sikurezza għandu jintuża matul l-operazzjoni ta' kunjett krijo silġ barra. Għandek tilbes ilqugħ tal-wiċċ, nuċċalijiet, ingwanti tqal, u kowt tal-laboratorju bil-buttuni fuq qliezet jew dublett twil meta tagħmel din l-operazzjoni. Meta tħoll it-tubi krijo, għandek tpoġġihom f'banju ta' l-ilma ta' 37 °C immedjatament wara li toħroġhom. Imbagħad, għandek tħawwad it-tubu bil-mod biex tinħall fi żmien minuta. Oqgħod attent li l-ilma ma jaqbiżx it-tarf tal-għatu tat-tubu tal-friża, inkella, tista 'sseħħ kontaminazzjoni. Minħabba t-temperatura għolja ta 'ġewwa fis-sajf, għandha tingħata attenzjoni żejda meta jiġu aċċessati pajpijiet refriġerati.

L-għatu tal- tubu krijo huwa maqsum f'żewġ tipi - għatu tal-kamin intern u għatu tal-kamin estern.

Tubi krijo b'tappijiet bil-kamin interni jintużaw biex jiffriżaw kampjuni bijoloġiċi fin-nitroġenu likwidu. Is-siegla tas-silikonju fil-bokka tat-tubu ttejjeb is-siġillar tat-tubu, li jista 'effettivament iwaqqaf l-infiltrazzjoni tan-nitroġenu likwidu.

Tubi krijo b'tappijiet bil-kamin esterni jintużaw biex jiffriżaw kampjuni fil-friġġ. L-għatu bil-kamin b'għatu bil-kamin estern inaqqas il-probabbiltà ta 'kontaminazzjoni meta timmaniġġja l-kampjuni.

a. L-għatu huwa ddisinjat biex ikun faċli biex iddawwar u jinfetaħ.

b. Kemm l-għatu tat-tubu kif ukoll il-korp tat-tubu huma prodotti mill-istess lott u materjal tal-polypropylene (PP). PP huwa reżistenti u kimikament reżistenti. L-istess koeffiċjent ta 'espansjoni jiżgura siġill tat-tubu krijo fi kwalunkwe temperatura.

c. Żona kbira tal-immarkar għal kitba faċli.

d. It-tubu huwa trasparenti, li jagħmilha faċli biex tara l-kampjun.

e. Jgħollija u awtoklavabbli, RNase/DNase ħielsa, l-ebda sors tas-sħana.

f. Id-disinn tal-qiegħ tond tal-krijotubu jiffaċilita t-tferrigħ tal-likwidi u jnaqqas ir-residwu.

Il-funzjoni ta ' krijotubi huwa li tippreserva l-kampjuni f'temperaturi baxxi. Għandu reżistenza aħjar għat-temperatura baxxa minn tubi EP. Ġeneralment, il-materjal isir fraġli hekk kif it-temperatura tonqos, u t-temperatura tal-fraġilità tat-tubu iffriżat hija aktar baxxa.

Il-metodu attwali tal-preservazzjoni taċ-ċelloli għal żmien twil huwa li jiġu ffriżati f'nitroġenu likwidu (-196 °C) sa sena jew saħansitra diversi snin. Il-biċċa l-kbira taċ-ċelloli xorta jistgħu jikbru u jimmultiplikaw meta jinħallu fil-ħin tal-użu. Għal ħażna xierqa, iċ-ċelloli għandhom jiġu risuxxitati u kkultivati ​​wara sena ta 'iffriżar u mbagħad iffriżati mill-ġdid. Aġenti protettivi għandhom jiġu miżjuda meta jiffriżaw iċ-ċelloli, inkella, l-ilma ġewwa u barra ċ-ċelloli jifforma kristalli tas-silġ u jikkawża ħsara mekkanika liċ-ċelloli. Il-punt tal-iffriżar jista 'jitbaxxa billi żżid aġent protettiv. Taħt il-kundizzjoni ta 'iffriżar bil-mod, l-ilma ġewwa ċ-ċellula joħroġ qabel l-iffriżar biex tiġi evitata ħsara lill-kristall tas-silġ. Barra minn hekk, il-fluwidu tal-kultura huwa miżjud mas-soluzzjoni tal-liofilizzazzjoni biex jipprovdi nutrizzjoni, pressjoni osmotika u pH. L-irkupru taċ-ċelluli jirreferi għat-tidwib taċ-ċelloli ffriżati. Iċ-ċelloli tat-tidwib għandhom ikunu veloċi sabiex jgħaddu malajr mill-aktar vulnerabbli -5℃ sa 0 ℃.

L-użu ta ' tubu krijo mhuwiex proċess sempliċi bħall-ewwel, il-ftuħ tat-tank tan-nitroġenu likwidu; it-tieni, it-tqegħid fit-tubi; it-tielet, l-għeluq tat-tank. Hemm ċerti riskji għas-sigurtà meta tuża krijo tubi, sabiex l-użu xjentifiku u korrett tagħhom jista 'jevita t-telf ta' kampjuni u jipproteġi s-sigurtà tal-persunal tat-test.

a. Aħsel iċ-ċelloli b'soluzzjoni PBS imsaħħan minn qabel. Għatti ċ-ċelloli b'soluzzjoni li jkun fiha trypsin u EDTA fil-ħin tal-aspirazzjoni, saff irqiq ta' likwidu huwa biżżejjed. Il-konċentrazzjoni ta 'trypsin u EDTA jeħtieġ li tiġi determinata skond il-linja taċ-ċelluli.

b. Inkuba ċelluli f'37 ° C għal 3-5 minuti.

c. Wara li ċ-ċelloli jinqalgħu mill-qiegħ, ittemm l-inkubazzjoni. Żid il-medium li fih is-serum u ssospendi bil-mod iċ-ċelloli b'pipetta.

d. Iċċentrifuga s-suspensjoni taċ-ċelluli (500 xg, 5 min) u erġa' ssospendiha b'mezz li jkun fih is-serum.

e. Għadd taċ-Ċelloli.

f. Iċċentrifuga s-sospensjoni taċ-ċelluli (500 xg, 5 min). Neħħi s-supernatant u erġa' ssospendi ċ-ċelloli b'volum xieraq ta' medium li jkun fih is-serum.

g. Iċ-ċelluli u s-soluzzjoni ta 'lijofilizzazzjoni (60% medju, 20% serum tal-fetu bovin, 20% DMSO) huma mħallta fi proporzjon ta' volum 1:1 u trasferiti għal tubi krijoġeniċi. Id-densità taċ-ċelluli ffriżati hija 1-5 × 106 ċelluli/ml.

h. It-tubi krijo li fihom iċ-ċelloli huma rakkomandati li jitkessħu b'rata ta '-1 K/min u jistgħu jitqiegħdu f'kontenitur li jkun fih l-isopropanol f'-70°C. Jekk it-tubi jintużaw biex jaħżnu kampjuni oħra, jistgħu jitqiegħdu direttament f'-20 ° C, -70 ° C, jew fil-fażi tal-gass ta 'nitroġenu likwidu. Biex jiġi żgurat iffriżar uniformi tal-kampjuni, 4 mL u 5 mL tubi krijo jeħtieġ li jitqiegħdu fi friġġ -20 ° C matul il-lejl qabel ma jiġu trasferiti għal -70 ° C jew nitroġenu likwidu fil-fażi tal-gass.

i. Imbagħad ittrasferixxi t-tubi għal tank tan-nitroġenu likwidu. Biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni u għal raġunijiet ta 'sikurezza, huwa aħjar li tpoġġi t-tubi krijo fil-fażi tal-gass tan-nitroġenu likwidu, tpoġġihomx direttament fil-fażi likwida. (Attenzjoni: jekk tuża metodi ta 'ħażna mhux korretti, in-nitroġenu likwidu li jibqa' fit-tubu krijo se jwassal għal splużjoni jew tnixxija ta' sustanzi bijoperikolużi minħabba l-vaporizzazzjoni.)

a. Oħroġ it-tubu krijo min-nitroġenu likwidu bi forceps kbar u poġġih fl-ilma f'temperatura ta '37 ℃ sa 42 ℃. Ħawwad minn żmien għal żmien biex tgħaddi minn -5 sa 0 ℃ malajr. Kontinwament tħawwad biex tagħmilha malajr minn -5 sa 0 ℃.

b. Fit-tabella ultra-nadifa, l-għonq tal-krijotubu għandu jingħorok b'rota li joborxu u sterilizzat bi blalen tal-qoton tal-alkoħol. Imbagħad, iftaħ it-tubu krijo, aspira s-sospensjoni taċ-ċelluli fi flixkun tal-kultura, iddilwaha f'10x, u inkubaha f'inkubatur tas-CO2. L-għada, il-mezz ta 'l-iffriżar għandu jiġi sostitwit b'mezz ta' kultura frisk.

Jekk inti interessat tagħna krijo tubi jew għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikteb e-mail lil [protett bl-email], aħna se nwieġbuk kemm jista 'jkun malajr.