ANTITECK - Ipprovdi Tagħmir tal-Lab, Awtomazzjoni Industrijali, Moulding Mediku u Soluzzjoni Turnkey.
tagħmir-bijoloġija-laboratorju

X'inhuma l-4 Tipi ta' ELISA?

Posted fuq Ottubru 23, 2022 by Zeng YingELISA

Katalgu: Tagħmir-Għal-Elisa-Kit-Manifattura

Definizzjoni ta' ELISA

ELISA, l- assaġġ immunosorbenti marbut ma' enzimi, hija klassi komunement użata ta 'tekniki immunoenzimatiċi. Il-metodu ewlieni huwa li jassorbi antiġen jew antikorp magħruf fuq il-wiċċ ta 'trasportatur ta' fażi solida, imbagħad inkuba l-antikorp jew antiġen immarkat b'enżimi (akkoppjati) miegħu, żid żviluppatur tal-kulur biex tiżviluppa l-kulur, tiddetermina d-differenza bejn il-kulur tal-analite li jrid jitkejjel u l-kulur tal-istandard permezz ta 'markatur tal-enżima, u plottja l-kurva tal-attività tal-enżima biex tikseb il-konċentrazzjoni tal-analite li trid titkejjel.

Reaġenti għall-ELISA

Indiretta-ELISA
Indiretta-ELISA
Magni tal-Kisi tat-Tagħmir tal-Manifattura ELISA Għall-Produzzjoni fuq Skala Kbira tal-Kit ELISA

Hemm seba' passi involuti fit-twettiq ta' ELISA:

  • Il-kampjun jinġabar b'suċċess.
  • Ħażna xierqa tal-kampjun.
  • Il-kampjun jissaħħan mill-ġdid b'suċċess biex jiżgura l-ebda degradazzjoni.
  • Il-kwalità tal-kit tar-reaġent hija intatta.
  • Il-kurva standard tinħoloq b'suċċess.
  • M'hemm l-ebda żball fl-operazzjoni u l-ebda konfużjoni fin-numerazzjoni.
  • Il-kulur huwa ċar u fi ħdan il-firxa ta 'skoperta wara l-iżvilupp tal-kulur.

X'inhuma l-4 tipi ta' ELISA?

Sandwich-ELISA
Sandwich-ELISA

ELISA dirett

ELISA dirett huwa li jimmobilizza l-antiġen fuq il- ELISA pjanċa u mbagħad uża l-antikorp tikkettat bl-enżimi biex tiskopri l-antiġen direttament.
Meta mqabbla ma 'tipi oħra ta' esperimenti ELISA, esperimenti ELISA diretti għandhom inqas passi, skoperta aktar mgħaġġla, u l-ebda ħtieġa li jintużaw antikorpi sekondarji, biex tiġi evitata reattività inkroċjata, ir-riżultati tal-kejl mhumiex suxxettibbli għal żball. Madankollu, minħabba li l-antiġen ta 'ELISA dirett mhuwiex iffissat speċifikament, il-proteina fil-mira u impuritajiet oħra fil-kampjun se jkunu marbuta mal-pjanċa ELISA, u l-isfond sperimentali se jkun ogħla. U kull proteina fil-mira ta 'ELISA diretta teħtieġ li tipprepara antikorp primarju li jista' jorbot speċifikament magħha, l-esperiment huwa inqas flessibbli. Barra minn hekk, minħabba li ma jintuża l-ebda antikorp sekondarju, is-sinjal ma jiġix amplifikat, u jnaqqas is-sensittività tal-assaġġ.

ELISA indiretta

ELISA indiretta huwa proċess f’żewġ stadji li fih antiġen huwa marbut ma’ pjanċa ELISA, segwit minn proċess f’żewġ stadji li fih jiżdied antikorp ta’ skoperta biex jeħel speċifikament mal-antiġen, segwit biż-żieda ta’ antikorp sekondarju ttikkettjat b’enżima għal skoperta u żvilupp tal-kulur bl-użu tas-sottostrat.
Meta mqabbel ma 'ELISA dirett, ELISA indiretta tuża antikorpi sekondarji ttikkettjati b'enżimi, li huma aktar sensittivi u jeħtieġu inqas antikorpi ttikkettjati, li jagħmilha aktar ekonomika. ELISA indiretta toffri wkoll flessibilità akbar peress li antikorpi primarji differenti jistgħu jintużaw b'antikorp sekondarju wieħed ittikkettat. L-iżvantaġġi ta 'esperimenti ELISA indiretti huma l-possibbiltà ta' reattività inkroċjata (irbit dirett ta 'l-antikorp sekondarju tikkettat bl-enżimi għall-antiġen), li jista' jżid l-isfond, u l-pass addizzjonali ta 'inkubazzjoni ta' l-antikorp sekondarju meta mqabbel ma 'ELISA dirett, li jtawwal iċ-ċiklu sperimentali.

Sandwich ELISA

Ġo sandwich ELISA, l-antikorp tal-qbid huwa l-ewwel immobilizzat fil-bjar tal-pjanċa ELISA, u mbagħad jiżdied il-kampjun, segwit mill-antikorp ta 'skoperta. Jekk l-antikorp ta 'skoperta huwa ttikkettjat b'enżima, jista' jissejjaħ ELISA sandwich dirett; jekk l-antikorp ta 'skoperta ma jkunx ittikkettat, huwa wkoll meħtieġ li jintuża antikorp sekondarju tikkettat b'enżima biex jorbot ma' l-antikorp ta 'skoperta, u dan jissejjaħ ELISA sandwich indirett.
Is-sensittività tas-sandwich ELISA hija għolja, hija 2-5 darbiet aktar sensittiva minn ELISA diretta jew indiretta; fl-istess ħin, sandwich ELISA juża żewġ antikorpi speċifiċi biex jeħel mal-antiġen u għandu speċifiċità għolja. Barra minn hekk, is-sandwich ELISA jista 'jiskopri b'mezzi diretti jew indiretti, li huwa aktar flessibbli. L-iżvantaġġ ta 'sandwich ELISA huwa r-rekwiżit għoli għall-antikorpi paired. Jekk ma jkunu disponibbli l-ebda kits standardizzati jew antikorpi paired ittestjati, huma meħtieġa l-adattament u l-ottimizzazzjoni tal-antikorpi paired, peress li huwa importanti li titnaqqas ir-reattività inkroċjata bejn l-antikorpi tal-qbid u l-iskoperta.

Kompetizzjoni ELISA

il kompetizzjoni ELISA huwa antiġenu pre-inkapsulat fuq trasportatur ta' fażi solida b'antikorp ta' speċifiċità mmarkat b'enżimi. Matul l-esperiment, jiżdied l-antiġen (jew l-antikorp) li jrid jiġi ttestjat. Jekk it-test huwa antiġen, l-antiġen li jrid jiġi ttestjat jikkompeti mal-antiġen pre-inkapsulat fuq it-trasportatur tal-fażi solida biex jorbot l-antikorp ittikkettat bl-enżima; jekk it-test huwa antikorp, l-antikorp li jrid jiġi ttestjat jikkompeti mal-antikorp ittikkettat bl-enżimi oriġinarjament preżenti fis-sistema biex jorbot l-antiġen inkapsulat fuq it-trasportatur tal-fażi solida. L-antikorp marbut b'mod kompetittiv jinħasel bil-ħasil u finalment, is-sottostrat jiġi miżjud għall-iżvilupp tal-kulur. Huwa importanti li wieħed jinnota li r-riżultat tal-iżvilupp tal-kulur huwa inversament proporzjonali għall-ammont ta 'antiġen (jew antikorp) li għandu jiġi skopert.

L-ELISA tal-kompetizzjoni hija ftit aktar kumplessa mit-tliet metodi deskritti hawn fuq, iżda t-tliet tipi ELISA ta 'hawn fuq huma applikabbli fil-forma ta' ELISA tal-kompetizzjoni. Il-vantaġġ ewlieni tiegħu huwa li jista 'jsib kampjuni impuri u għandu riproduċibbiltà għolja tad-dejta, iżda għandu l-problema ta' sensittività u speċifiċità ġenerali fqira.

Problemi u soluzzjonijiet komuni ELISA

4-passi-tal-ELISA
4-passi-tal-ELISA

Riżultati pożittivi għal kontrolli negattivi

a. Kampjun, ir-reaġent huwa kkontaminat, jew operazzjoni ħażina meta żżid kampjuni twassal għal kontaminazzjoni inkroċjata billi tferrex soluzzjoni bejn bjar maġenb - ibdel ir-reaġenti u ħaddem bir-reqqa.

b. Il-pjanċa tal-enzima ma tinħaselx sewwa - ferra s-soluzzjoni tal-antikorp nadifa qabel taħsel il-pjanċa, u mbagħad ferra s-soluzzjoni tal-ħasil fuq il-bjar tal-pjanċa kollha biex tiżgura li tista 'tinħasel kompletament.

c. Ammont eċċessiv ta 'antikorp iwassal għal twaħħil mhux speċifiku - uża l-antikorp skond l-ammont rakkomandat fl-istruzzjonijiet u ħallat l-antikorp għall-konċentrazzjoni xierqa.

L-isfond ġenerali tal-pjanċa tal-enżima għolja
a. Twaħħil mhux speċifiku ta 'antikorpi - jiżgura li l-bjar huma magħluqa u li tintuża s-soluzzjoni ta' għeluq xierqa biex tipprevjeni t-twaħħil mhux speċifiku.

b. Konċentrazzjoni għolja ta 'rbit tas-sottostrat - iddilwa s-sottostrat b'mod xieraq.

c. Il-ħin ta 'reazzjoni huwa twil wisq - ittemm ir-reazzjoni b'soluzzjoni ta' terminazzjoni hekk kif il-pjanċa tkun żviluppat biżżejjed kulur għall-qari ta 'l-assorbiment u tqassar il-ħin ta' żvilupp b'mod xieraq.

d. Kontaminazzjoni tas-soluzzjoni tas-sottostrat - Is-soluzzjoni normali tas-sottostrat għandha tkun ċara u trasparenti, jekk jidhru kuluri isfar jew oħra, tindika kontaminazzjoni u għandha tiġi sostitwita b'soluzzjoni ta 'sottostrat ġdida.

e .L-inkubazzjoni tas-sottostrat mhix protetta mid-dawl - L-inkubazzjoni tas-sottostrat għandha titwettaq taħt kundizzjonijiet li ma fihomx dawl.

Ripetibbiltà fqira bejn il-bjar replikati
a. Il-kwantità tal-kampjun ELISA mhix pulita, u l-ħin ta 'spiking huwa twil jew qasir - ipprova żomm il-ħin ta' spiking qrib l-ewwel darba meta żżid bjar duplikati.

b. Volum bi spiked inkonsistenti - il-kampjuni għandhom jitħalltu sew qabel id-dilwizzjoni u għandha tintuża l-istess pipetta.

c. Kondizzjonijiet inkonsistenti tal-ħasil, operaturi - Meta tirrepeti l-kampjuni, il-kundizzjonijiet operattivi u l-persunal għandhom ikunu konsistenti kemm jista 'jkun mal-aħħar darba.

d. L-inkubazzjoni tas-sottostrat mhix protetta mid-dawl - L-inkubazzjoni tas-sottostrat għandha titwettaq taħt kundizzjonijiet li ma fihomx dawl.

Aħna nużaw cookies sabiex jagħtuk l-aħjar esperjenza possibbli fuq il-websajt tagħna. Billi tkompli tuża dan is-sit, taqbel mal-użu tagħna tal-cookies.
Aċċetta
Regoli tal-privatezza