Kryo rør
Hva er kryorør?
For å sikre reproduserbarhet og kontinuitet i resultater i forskning og biomedisinske prosesser, står dagens forskere overfor oppgaven med å bevare levende celler og organismer med optimal levedyktighet og sørge for at subcellulære komponenter som nukleinsyrer og proteiner forblir uendret. Kryorør, også kjent som kryogene lagringsglass, er en spesiell type prøverørDe kan brukes til kryogen lagring av prøver, og konservering av prøver som fullblod, serum, celler og så videre. De brukes vanligvis i biologisk industri, farmasøytisk industri og næringsmiddelindustrien som bærer for lavtemperaturtransport og lagring av biologisk materiale.
Ikke alle kryorør kan brukes til flytende nitrogen, kryogene hetteglass for flytende nitrogen er designet for å møte kravene til flytende nitrogentemperaturer. De er spesielle kryorør med høy forsegling og motstand mot lav temperatur.
Kryorør størrelser
Det er ingen spesifikk klassifisering av kryorør, er det generelt delt inn etter kapasitet som følger:
| Størrelser på kryorør |
|---|
| 0.5 ml kryogene hetteglass |
| 1 ml kryogene rør / 1 ml kryorør |
| 1.5 ml kryogene rør / kryogene hetteglass 1.5 ml / kryorør 1.5 ml |
| 1.8 ml kryorør / kryorør 1.8 ml |
| 2 ml kryogene rør / kryogene 2 ml / kryorør 2 ml / 2 ml kryogene hetteglass / kryogene hetteglass 2 ml / kryorør 2 ml |
| 4 ml kryogene rør |
| 5 ml kryorør / 5 ml kryogene rør / 5 ml kryorør / kryorør 5 ml / kryorør 5 ml |
| 7 ml kryogene rør |
| 10 ml kryogene rør |
Funksjoner av kryorør
Sikkerhet for kryorør
Kryorør er laboratorierør som brukes til å lagre prøver ved lave temperaturer. Feil bruk av kryotube kan forårsake eksplosjoner, noe som resulterer i lekkasje av farlige materialer og, i alvorlige tilfeller, til og med skader. For å redusere risikoen for kryorør eksplosjon, vær oppmerksom på følgende retningslinjer når du bruker den.
a. Kryorør er vanligvis laget av polyetylen med høy tetthet eller polypropylen. Den kan deles inn i to kategorier i henhold til ulike bruksscenarier. En er kryorør for cellekultur og den andre er kryorør for flytende nitrogen. Disse to typene kryorør må skilles nøye før kjøp og bruk, da deres gjeldende temperaturer er spesielt forskjellige.
| Størrelser på kryorør |
|---|
| 0.5 ml kryogene hetteglass |
| 1 ml kryogene rør / 1 ml kryorør |
| 1.5 ml kryogene rør / kryogene hetteglass 1.5 ml / kryorør 1.5 ml |
| 1.8 ml kryorør / kryorør 1.8 ml |
| 2 ml kryogene rør / kryogene 2 ml / kryorør 2 ml / 2 ml kryogene hetteglass / kryogene hetteglass 2 ml / kryorør 2 ml |
| 4 ml kryogene rør |
| 5 ml kryorør / 5 ml kryogene rør / 5 ml kryorør / kryorør 5 ml / kryorør 5 ml |
| 7 ml kryogene rør |
| 10 ml kryogene rør |
b. Alle kryotube hetteglass bør ha en silikonpakning, gummipakning eller O-ringpakning for å sikre en tett forsegling. Vær oppmerksom på at overstramming av hetten kan deformere tetningen.
c. Kryorør bør lagres i gassfasen over flytende nitrogen og ikke nedsenkes i væsken for å unngå penetrering av flytende nitrogen inn i rørene. Overbefolkning av lagerbeholdere bør unngås. Hvis prøver må oppbevares i flytende fase, anbefales det å bruke en profesjonell beskyttelseshylse fra en pålitelig leverandør som gir en ekstra ekstern forsegling.
d. Under frysing og lagring av celler må frysetemperaturen på rørene være jevn. Ujevn frysing vil føre til utvikling av ispropper i røret. Ispropper kan hemme overføring av væsketemperatur på begge sider, noe som skaper farlig høyt trykk og forårsaker skade på røret.
e. Ikke frys flere prøver enn det maksimale arbeidsvolumet til kryorør grense.
f. Alle cryo rør har mulighet for eksplosjon. Særlig, kryorør brukes til å inneholde prøver lagret under flytende nitrogen kan eksplodere uten forvarsel. Rørets eksplosjon antas å ha vært forårsaket av flytende nitrogen som har kommet inn i røret gjennom bittesmå sprekker og deretter utvidet seg raskt etter hvert som røret tint. Derfor bør sikkerhetsutstyr brukes under hele driften av kryo hetteglass isen ut. Du bør bruke en ansiktsskjold, vernebriller, tykke hansker og en knapp labfrakk over bukser eller et langt skjørt når du utfører denne operasjonen. Når du tiner kryorørene, bør du plassere dem i et vannbad på 37 °C umiddelbart etter at du har tatt dem ut. Deretter bør du riste røret forsiktig for å tine det innen 1 minutt. Vær forsiktig så vannet ikke overstiger kanten av fryserørets deksel, ellers kan det oppstå forurensning. På grunn av den høye innetemperaturen om sommeren, bør du være ekstra forsiktig når du får tilgang til kjølerør.
Lokk av kryorør
Lokket til kryorør er delt inn i to typer – innvendig skrukork og utvendig skrukork.
Innvendig skrukork på kryorør
Kryorør med innvendige skrukorker brukes til å fryse biologiske prøver i flytende nitrogen. Silikonpakningen ved munningen av røret forbedrer forseglingen av røret, noe som effektivt kan stoppe infiltrasjonen av flytende nitrogen.
Ekstern skrukork på kryorør
Kryorør med utvendig skrukork brukes til å fryse prøver i kjøleskapet. Den gjengede hetten med utvendig skrukork reduserer sannsynligheten for kontaminering ved håndtering av prøver.
Fordeler med kryorør
a. Hetten er utformet slik at den er enkel å rotere og åpne.
b. Både rørkorken og rørkroppen er produsert av samme parti og polypropylen (PP)-materiale. PP er slitesterkt og kjemisk motstandsdyktig. Den samme utvidelseskoeffisienten sikrer en tett kryorør ved alle temperaturer.
c. Stort merkeområde for enkel skriving.
d. Røret er gjennomsiktig, noe som gjør det enkelt å se prøven.
e. Kokbar og autoklaverbar, RNase/DNase-fri, ingen varmekilde.
f. Kryorørets runde bunndesign forenkler helling av væsker og reduserer rester.
Bruk av kryorør
Funksjonen til kryorør er å oppbevare prøver ved lave temperaturer. Den har bedre lavtemperaturmotstand enn EP-rør. Generelt blir materialet sprø når temperaturen synker, og sprøhetstemperaturen til det frosne røret er lavere.
Den nåværende metoden for å bevare celler over lengre tid er å fryse dem i flytende nitrogen (-196 °C) i opptil ett år eller til og med flere år. De fleste celler kan fortsatt vokse og formere seg når de tines ved bruk. For riktig oppbevaring bør cellene gjenopplives og dyrkes etter ett års frysing, og deretter fryses igjen. Beskyttelsesmidler bør tilsettes når celler fryses, ellers vil vannet inni og utenfor cellene danne iskrystaller og forårsake mekanisk skade på cellene. Frysepunktet kan senkes ved å tilsette et beskyttelsesmiddel. Ved langsom frysing lekker vannet inni cellen ut før frysing for å unngå skade på iskrystaller. I tillegg tilsettes kulturvæske til frysetørking løsning for å gi næring, osmotisk trykk og pH. Cellegjenoppretting refererer til tining av frosne celler. Tining av celler bør skje raskt slik at de raskt passerer gjennom de mest sårbare temperaturene -5 ℃ til 0 ℃.
Bruken av kryorør er ikke en enkel prosess som først, å åpne tank for flytende nitrogen; for det andre, å sette inn rørene; for det tredje, å lukke tanken. Det er visse sikkerhetsrisikoer ved bruk cryo rør, slik at vitenskapelig og korrekt bruk av dem kan unngå tap av prøver og beskytte sikkerheten til testpersonell.
Cellefrysetrinn
a. Vask cellene med en forvarmet PBS-løsning. Dekk cellene med en løsning som inneholder trypsin og EDTA ved aspirasjon. Et tynt lag med væske er tilstrekkelig. Konsentrasjonen av trypsin og EDTA må bestemmes i henhold til cellelinjen.
b. Inkuber cellene ved 37 °C i 3–5 minutter.
c. Etter at cellene er løsnet fra bunnen, avbryt inkubasjonen. Tilsett mediet som inneholder serum og suspender cellene forsiktig med en pipette.
d. sentrifuger cellesuspensjonen (500 xg, 5 min) og resuspender den med et medium som inneholder serum.
e. Celletelling.
f. Sentrifuger cellesuspensjonen (500 xg, 5 min). Fjern supernatanten og resuspender cellene med et passende volum medium som inneholder serum.
g. Celler og frysetørkingsløsning (60 % medium, 20 % føtalt bovint serum, 20 % DMSO) blandes i et volumforhold på 1:1 og overføres til kryogenrør. Tettheten av frosne celler er 1–5 × 106⁶ celler/ml.
h. Kryorør som inneholder celler anbefales å kjøles ned med en hastighet på -1 K/min og kan plasseres i en beholder som inneholder isopropanol ved -70 °C. Hvis rørene brukes til å oppbevare andre prøver, kan de plasseres direkte ved -20 °C, -70 °C eller i gassfasen av flytende nitrogen. For å sikre jevn frysing av prøvene må kryorør på 4 ml og 5 ml plasseres i et kjøleskap ved -20 °C over natten før de overføres til -70 °C eller flytende nitrogen i gassfasen.
i. Overfør deretter rørene til en tank med flytende nitrogen. For å unngå kontaminering og av sikkerhetsmessige årsaker er det bedre å plassere kryorørene i gassfasen av flytende nitrogen, ikke plasser dem direkte i væskefasen. (Forsiktig: Hvis du bruker feil oppbevaringsmetoder, vil flytende nitrogen som blir igjen i kryorøret føre til eksplosjon eller lekkasje av biologisk farlige stoffer på grunn av fordampning.)
Trinn for cellegjenoppretting
a. Ta kryorøret ut av flytende nitrogen med en stor tang og legg det i vann med en temperatur på 37℃ til 42℃. Rist det fra tid til annen for å få det til å gå raskt gjennom -5 til 0℃. Rist konstant for å få det raskt gjennom -5 til 0℃.
b. I det ultrarene bordet skal kryorørets hals gnides med en slipeskive og steriliseres med bomullsdotter med alkohol. Åpne deretter kryorøret og aspirer cellesuspensjonen inn i en kultur. kolbe, fortynn den til 10 ganger, og inkuber den i en CO2-beholder inkubatorNeste dag bør frysemediet erstattes med et nytt kulturmedium.
Hvordan kjøpe kryorør?
Hvis du er interessert i vår Kryo rør eller har spørsmål, vennligst skriv en e-post til info@antiteck.com, vi vil svare deg så snart som mulig.