ВЭЖХ-МС
Что такое ВЭЖХ-МС?
Полное имя ВЭЖХ-МС is высокоэффективная жидкостная хроматография-масс-спектрометрия, который использует жидкостную хроматографию в качестве системы разделения и масс-спектрометрию в качестве системы обнаружения. Проба отделяется от подвижной фазы в масс-спектрометрической части, ионизируется, затем масс-анализатор масс-спектрометрии разделяет фрагменты ионов по массовым числам, а масс-спектры получают детектором. Жидкостно-жидкостная масс-спектрометрия отражает взаимодополняющие преимущества хроматографии и масс-спектрометрии, сочетая высокую разделительную способность хроматографии для сложных образцов с преимуществами МС с высокой селективностью, высокой чувствительностью и способностью предоставлять информацию об относительной молекулярной массе и структуре. широко используется во многих областях, таких как анализ лекарств, анализ пищевых продуктов и анализ окружающей среды.
Применение ВЭЖХ-МС
Приложения жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) в различных областях заключаются в следующем.
В биохимии
Соединения в живых организмах сильно полярны, трудно испаряются и обладают значительной термической нестабильностью, и в то же время эти соединения часто появляются в смеси белков, пептидов и нуклеиновых кислот, в то время как ВЭЖХ-МС обладает высокой способностью разделять нелетучие , сильнополярные, термически неустойчивые и высокомолекулярные соединения; масс-спектрометрия может точно охарактеризовать соединения в сложных смесях, поэтому жидкостная масс-спектрометрия как биохимический анализ. Поэтому жидкостная хроматография привлекает все большее внимание как мощный инструмент биохимического анализа.
В фармацевтическом анализе
В области исследования лекарственного анализа большинство фармацевтических препаратов являются более полярными соединениями, а широкий спектр анализа жидкостной хроматографии и высокая специфичность масс-спектрометрии могут улучшить более качественную структурную информацию и высокую чувствительность обнаружения. Жидкостная масс-спектрометрия позволяет проводить многостадийное расщепление эксимерных ионов, что позволяет определить относительную молекулярную массу соединений, а также получить обширную информацию о фрагментации. На этапах изучения примесей и фармакокинетики при разработке лекарств, когда концентрация примесей в крови и фармакокинетических образцах обычно низка, а анализ затруднен и мешает, жидкостная масс-спектрометрия может быстро и точно определять следовые количества веществ при анализе лекарств благодаря своей высокой селективности. и чувствительность.
В экологическом мониторинге
В связи с быстрым развитием промышленности и сельского хозяйства часто возникают различные проблемы загрязнения окружающей среды, такие как остатки антибиотиков в питьевой воде, полициклические ароматические углеводороды, полихлорированные бифенилы, остатки пестицидов и т. д. Поэтому разработка высокочувствительных и надежных методов анализа множества остатков стала важной стратегической задачей экологической аналитической химии. В конце 1980-х годов исследователи успешно применили масс-спектрометрию с ионизацией при атмосферном давлении в сочетании с жидкостной хроматографией, и с тех пор... ЖХ-МС постепенно стал самым мощным инструментом экологического мониторинга.
Принцип работы ВЭЖХ-МС
Команда принцип прибор ЖХ-МС Аналогично газовой хроматографии, в которой в качестве системы разделения используется жидкостная хроматография, а в качестве системы детектирования — масс-спектрометрия. Образец отделяется от подвижной фазы в секции масс-спектрометрии, ионизируется, а затем ионные фрагменты разделяются масс-анализатором. спектрометр в соответствии с отношением заряда к массе, а масс-спектр получается с помощью детектора.
Преимущества использования ВЭЖХ-МС
В дополнение к возможности анализировать сильно полярные, трудно испаряющиеся и термически нестабильные соединения, высокоэффективная жидкостная хроматография-масс-спектрометрия имеет следующие преимущества:
1. Обладая широким аналитическим диапазоном, ВЭЖХ-МС может обнаруживать практически все соединения, что позволяет легко решить проблему анализа термически нестабильных соединений.
2. Даже если анализируемые смеси не полностью разделены на хроматограмме, характерная особенность сохраняется. ионная масса Хроматограмма ВЭЖХ-МС может быть использована для получения соответствующих хроматограмм как для качественного, так и для количественного анализа.
3. Надежные результаты качественного анализа, ЖХ-МС могут дать молекулярную массу и богатую структурную информацию о каждом компоненте одновременно.
4. Предел обнаружения низок, а чувствительность ВЭЖХ-МС высока, а способность обнаружения может быть увеличена более чем на порядок путем выбора метода обнаружения ионов.
5. Время анализа мало, а жидкостная хроматографическая колонка, используемая в ЖХ-МС, представляет собой колонку с узким диаметром, что сокращает время анализа и улучшает эффект разделения.
6. Высокоавтоматизированный метод LC-MS обладает высокой степенью точности. автоматизация.
Типы ВЭЖХ-МС
Наряду с развитием ВЭЖХ-МС интерфейса, сам прибор жидкостного масс-спектрометра также развивается с появлением нескольких типов масс-спектрометрических детекторов. Наиболее часто используемые жидкостные масс-спектрометры:
Квадрупольный масс-спектрометр
Квадрупольная масс-спектрометрия по-прежнему наиболее широко используется, а режим селективного мониторинга реакций (SRM) трехступенчатого квадрупольного масс-спектрометра подходит для рутинного и высокопроизводительного биоанализа. Улучшения в процессе квадрупольного масс-спектрометра и высокая стабильность RF значительно улучшили разрешение масс-спектров, разрешив ширину массовых чисел до 0.1 Да и улучшив селективность анализируемых соединений. Среди всех масс-спектрометрических анализаторов квадрупольный масс-спектрометр обеспечивает наилучшую точность и прецизионность результатов количественного анализа.
Времяпролетный масс-спектрометр (TOF)
С появлением матричной лазерной десорбционной ионизации и развитием компьютеров в 1990-х годах ТОП получила быстрое развитие. В настоящее время лучшие времяпролетные масс-спектрометры имеют разрешение до 20,000 XNUMX Да и измеряют массовые числа молекул с очень высокой точностью. Времяпролетные масс-спектрометры в значительной степени заменили двухфокусные магнитные веерные анализаторы с высоким разрешением, но они не могут эффективно использовать выбранные режимы мониторинга ионов для анализа.
Масс-спектрометрия ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье (FT-ICR-MS)
ФТ-ИКР-МС стал эффективным инструментом в фундаментальном изучении газофазных ионно-молекулярных реакций. Эта масс-спектрометрия широко используется при изучении биологических макромолекул в сочетании с источником ионов ESI и позволяет в полной мере использовать ее высокое разрешение и точность.
Характеристики и особенности ВЭЖХ-МС
Настольная ВЭЖХ-МС
Тип: Квадрупольный масс-спектрометр
Технические характеристики:
1. Квадрупольный масс-спектрометр обеспечивает чувствительность, производительность и общую стабильность системы, необходимые для количественного анализа.
2. Квадрупольные масс-спектрометры подходят для количественного анализа в исследованиях, проверке биомаркеров, исследованиях, тестировании пищевых продуктов и анализе окружающей среды.
3. Квадрупольные масс-спектрометры обеспечивают эффективность, производительность и ценность в соответствии с вашими аналитическими потребностями.
Влияние загрязнителей на ВЭЖХ-МС
Чувствительность, селективность, воспроизводимость и разделение ЖХ-МС на анализы влияют загрязнители, такие как ионы металлов, фталаты, полиэтиленгликоль (ПЭГ), усилители скольжения, вода и частицы, поступающие в систему из различных источников, включая:
* Реагенты и растворители
* Вода, используемая для приготовления буферов
* Химические вещества, выщелачиваемые из стеклянной посуды
* Микроцентрифуга трубы
* Входные фильтры
* Линии растворителя
* Компоненты прибора, такие как уплотнения насоса
* Газы для десольвентизации элюата в источнике и камере столкновений
*Сам образец
Таким образом, загрязнители могут мешать анализу:
а. Ингибирование или усиление ионизации аналита в источнике
б. Образование аддуктов с аналитом
в. Маскировка пиков аналита и/или появление ложных пиков на хроматограмме
д. Зашумление базовой линии
е. Масштабирующие системы и колонны, требующие частого обслуживания и замены деталей
Чтобы свести к минимуму загрязнение
а. Подвижную фазу следует готовить с использованием растворителей высокой чистоты, воды и реагентов.
б. Необходимо использовать свежеприготовленные подвижные фазы, чтобы свести к минимуму возможность микробного загрязнения водных подвижных фаз и полимеризации ацетонитрила (ACN).
в. Следует избегать мытья стеклянной посуды с мылом или моющими средствами, поскольку их может быть трудно удалить, и они могут мешать анализу.
д. Должны использоваться газы высокой чистоты (например, широко используемый азот чистотой >95%).
е. В Генератор азота должно содержаться в хорошем состоянии, и газовый баллон Его необходимо заменить, когда давление падает ниже допустимого уровня.
ф. Аналиты должны быть извлечены из матрицы образца, а хроматографические параметры должны быть оптимизированы, чтобы улучшить отделение пиков аналита от мешающих пиков.
Как использовать ВЭЖХ-МС?
Проверьте начальное состояние ВЭЖХ-МС
1. Убедитесь, что трубка между выходом колонки из жидкостного хроматографа и популяцией, входящей в ионный источник масс-спектрометра, подсоединена и отсоединена, если это так.
2. Совпадают ли главный выключатель питания жидкостного хроматографа и выключатель питания... автодозатор Они выключены, а если нет, выключите их.
3. Выключены ли главный выключатель питания масс-спектрометра и выключатель питания основной платы, и если нет, выключите их.
4. Проверьте цвет масла в насосе и уровень масла в системе низкого давления. вакуумный насос масс-спектрометра
5. Откройте главный вентиль резервуар с жидким азотом Проверьте давление источника азота, оно должно быть выше 1 МПа, и откройте повышающий клапан, если оно не соответствует требованиям. Проверьте, достигает ли показание манометра требуемого рабочего давления. Если вы используете азотный баллон, включите его в соответствии с инструкцией по эксплуатации и проверьте, является ли давление в баллоне с азотом нормальным.
ВЭЖХ-МС холодный старт
1. Включите главный выключатель питания самопроверки прибора ЖХ-МС; однако основной метод аналогичен. То есть первый запуск.
2. Процедура запуска вакуумной системы будет отличаться для разных приборов ЖХ-МС, но основной метод аналогичен. То есть сначала запустите механический насос, а после достижения низкого вакуума или автоматически запустите молекулярный турбинный насос, или сначала включите главный переключатель масс-спектрометра и позвольте молекулярному насосу начать откачку высокого вакуума.
3. Включите питание компьютера и щелкните соответствующий логотип программного обеспечения на экране, чтобы перейти на домашнюю страницу жидкостного масс-спектрометра. Только когда высокий вакуум достигает заданных требований, самопроверка масс-спектрометра может быть завершена, и тогда можно будет работать с функциональными частями масс-спектрометра. Некоторым приборам требуется включить питание основной платы масс-спектрометра для выполнения описанной выше операции.
4. Когда самопроверка жидкостного хроматографа и масс-спектрометра пройдена, фаза включения прибора завершена.
5. Активируйте программное обеспечение, чтобы убедиться, что система обеспечивает связь жидкостного хроматографа с масс-спектрометром.
Горячий старт ВЭЖХ-МС
Когда вы будете готовы оставить прибор на ночь после ежедневной работы, вы должны войти в следующее состояние:
1. Сначала отсоедините соединительную линию между LC и MS, переключите проточный клапан IC так, чтобы сток 1C подавался в резервуар для отходов.
2. Выключить напряжение умножителя на экране компьютера и дать остыть нагревательным элементам масс-спектрометра (при их наличии) до температуры ниже заданной, после чего выйти из соответствующего рабочего интерфейса.
3. Отключите все линии рабочего газа, за исключением некоторых линий рабочего газа, которым требуется Н. для поддержания необходимого расхода газа во время ночного дежурства, и перекройте бустерный клапан бака с жидким азотом.
4. Оставить вакуумную систему масс-спектрометра включенной.
5. Если подвижная фаза содержит кислоты, основания или соли перед выключением насоса ВЭЖХ, плунжерный насос и колонка очищаются предварительно приготовленной подвижной фазой без этих добавок (если насос ВЭЖХ используется на малых скоростях в течение ночи, насос LC не нужно выключать и подвижную фазу с кислотами, основаниями или солями не нужно заменять). Очистите автосэмплер указанным чистящим раствором.
Запустите прибор ЖХ-МС на следующий день после вышеупомянутого ночного режима, который называется горячим стартом.
Как поддерживать ВЭЖХ-МС?
1. При использовании ВЭЖХ-МС используйте ИБП с регулируемым источником питания, чтобы обеспечить стабильное и непрерывное напряжение питания прибора. Особенно влияние отключения питания на жидкостную хроматографию-масс-спектрометр.
2. Ежедневно промывайте систему ЖХ-МС и очищайте камеру распылителя раствором изопропилового спирта, а также регулярно открывайте ударный клапан для подачи воздуха. Для источников ESI делайте это не реже одного раза в неделю. Для источника APCI делайте это один раз в день, чтобы обеспечить чистоту капилляра.
3. Скорость потока подвижной фазы не должна быть слишком высокой, не более 0.5 мл/мин для источника ионов ESI и не более 1.0 мл/мин для APCI.
4. Заменять масло вакуумного насоса жидкостного хроматографа-масс-спектрометра один раз в год или полгода.
5. Контролируйте рабочую среду образца, включая температуру и влажность.
6. Очистите инъекционную иглу и инжекционный клапан жидкостного хроматографа-масс-спектрометра после завершения эксперимента. После использования подвижной фазы, содержащей кислоту, колонку и источник ионов следует промыть метанолом или водой.
7. Периодически очищайте конусное отверстие образца жидкостной хроматографии-масс-спектрометра, закройте запорный клапан и снимите отверстие конуса образца, во-первых, используйте раствор метанола: вода: муравьиная кислота (45:45:10) для ультразвуковой очистки для 10 минут, а затем очистите каждый раствор ультразвуком сверхчистой водой и метанолом в течение 10 минут соответственно, а затем установите его на инструмент после высыхания.
8. Подвижная фаза должна быть готова к использованию, желательно не в течение ночи, и должна быть свежей.
9. Регулярно заменяйте электронный умножитель жидкостного хроматографа-масс-спектрометра.
10. При соединении лучше разделить поток: а) использовать обычную колонку, б сократить время анализа и в) продлить срок службы масс-анализатора.
11. Выключите капиллярную температуру перед изменением жидкостного хроматографа-масс-спектрометра вниз и стабилизируйте в течение некоторого времени перед отключением питания, чтобы вентилятор не остановил вращение капиллярной периферии диффузии тепла внутрь, легко вызвать ускоряется старение внутренней схемы и электронных компонентов.
Как заказать ВЭЖХ-МС?
Если вы заинтересованы в нашем ВЭЖХ-МС или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.