Планшет для ПЦР
Что такое ПЦР-планшет?
ПЦР-планшет является своеобразным носителем Полимеразной цепной реакции (ПЦР) носить с собой праймеры, такие как Так ДНК полимераза, dNTP, матричная нуклеиновая кислота, Mg, буфер и др., которые в основном участвуют в реакциях амплификации в ПЦР.
Планшеты для ПЦР широко используются в области генетики, биохимии, иммунологии, медицины и т. д. Они применяются не только в фундаментальных исследованиях, таких как выделение генов, клонирование и анализ последовательности нуклеиновых кислот, но также используются для диагностики заболеваний или в любом другом месте. где есть ДНК или РНК, и являются одноразовыми расходными материалами в лабораториях.
Что такое ПЦР?
Как метод молекулярной биологии, полимеразная цепная реакция (ПЦР) ПЦР используется для амплификации специфических фрагментов ДНК. Ее можно рассматривать как особую репликацию ДНК вне тела живого организма. Наиболее важной особенностью ПЦР является способность значительно увеличивать количество мельчайших фрагментов ДНК. Таким образом, в палеонтологии, в окаменелостях, в останках исторической личности или в волосах, коже или крови, оставленных убийцей много лет назад, если можно выделить крошечный фрагмент ДНК, ПЦР можно использовать для амплификации ДНК и ее сравнения. В этом и заключается сила «следовых доказательств».
Впервые он был придуман Маллисом в 1983 году и изобретен в 1985 году как полимеразная цепная реакция, что означало настоящее рождение технологии ПЦР. В 1976 году китайский ученый Цянь Цзяюнь, открывший стабильную ДНК-полимеразу Taq, внес фундаментальный вклад в развитие технологии ПЦР. Прошло почти 40 лет с момента изобретения технологии ПЦР, и технология ПЦР развилась до третьего поколения. За последние почти 40 лет технология ПЦР внесла неизгладимый вклад в развитие наук о жизни.
ПЦР первого поколения
После изобретения Технология ПЦРМаллис описал это следующим образом: «С помощью одной молекулы ДНК ПЦР позволяет получить 100 миллионов подобных молекул за один день. Все, что было нужно, — это пробирка, несколько простых реагентов и устройство для нагревания».
Первоначальный метод ПЦР использовал общий усилитель ПЦР для амплификации гена-мишени, а затем продукты анализировали с помощью электрофореза в агарозном геле, что можно сделать только качественно.
Технологические приложения
Возможно увеличение следовых количеств ДНК существенно. Для обнаружения палеонтологических останков в окаменелостях, волосах, фрагментах кожи или крови с места преступления, если можно выделить крошечный фрагмент ДНК, его можно амплифицировать и сравнить с помощью ПЦР.
Преимущества ПЦР первого поколения
ПЦР — это метод молекулярной биологии, используемый для амплификации определенного фрагмента ДНК, который можно рассматривать как особую репликацию ДНК вне организма.
Недостатки ПЦР первого поколения
а. Красители для нуклеиновых кислот, используемые в исходной методике ПЦР, могут нанести вред и загрязнить персонал лаборатории и окружающую среду.
б. После завершения ПЦР-тест необходимо вскрыть и протестировать, что чревато загрязнением и ложноположительными результатами.
c. Этот анализ трудоемкий, сложный и чреватый ошибками.
d. Возможно проведение только качественного тестирования.
ПЦР второго поколения
Метод ПЦР второго поколения называется методом флуоресцентной количественной ПЦР.ПЦР в реальном времени), так же как кПЦР. Флуоресцентная ПЦР отслеживает накопление продуктов амплификации путем добавления в реакционную систему флуоресцентных зондов, которые могут указывать на рефлекторный процесс, и путем накопления флуоресцентных сигналов. О результатах судят по кривым флуоресценции, и их можно количественно оценить с помощью значений Cq и стандартных кривых.
Технологические приложения
Для обнаружения возбудителей инфекционных заболеваний, исследования генов устойчивости к лекарствам, оценки эффективности лекарств, диагностики генетических заболеваний и т. д.
Преимущества ПЦР второго поколения
а. Низкий риск загрязнения.
б. Процесс эксплуатации стал проще, экономичнее и эффективнее, чем раньше.
c. Требует меньшего количества образцов ДНК и РНК для добавления.
Недостатки ПЦР второго поколения
а. Значения Cq, полученные с использованием реагентов и оборудования разных производителей, несопоставимы.
б. Влияние фоновых значений легко может привести к искажению результатов.
c. Обнаружить ДНК с низкой копийностью сложно.
d. В обычных системах ПЦР часто возникают проблемы, если в реакционной системе присутствуют ингибиторы ПЦР.
ПЦР трех поколений
Третье поколение технологии ПЦР называется цифровой ПЦР, dPCR или Dig-PCR. Это новый метод ПЦР, который обнаруживает и количественно определяет нуклеиновые кислоты. Он использует прямой подсчет молекул-мишеней, не полагаясь на какой-либо калибратор или внешний вид, что позволяет определять абсолютное количество молекул-мишеней, подлежащих обнаружению вплоть до одной копии.
Технические приложения
Для обнаружения небольшого количества клеток, содержащих мутации, в большой популяции нормальных клеток. Путем разбавления образца ДНК в соответствующих лунках для анализа после ПЦР-амплификации в каждую лунку добавляют специфический флуоресцентный зонд для гибридизации с продуктом, а затем непосредственно подсчитывают количество мутантных аллелей и аллелей дикого типа в образце. Основными приложениями являются анализ мутаций, удаление аллелей, обнаружение рака смешанной ДНК и т. Д.
Преимущества ПЦР третьего поколения
а. Более высокая чувствительность
Цифровая ПЦР разделяет традиционную реакцию ПЦР на десятки тысяч систем. Эти системы независимо усиливаются и независимо обнаруживаются, что гарантирует возможность обнаружения однозначного числа шаблонов.
б. Более точная количественная оценка
Цифровая ПЦР напрямую подсчитывает начальное количество шаблонов в реакции путем подсчета флуоресценции микросистем. Даже если в некоторых микрокаплях имеется более одного шаблона, его можно рассчитать по распределению Пуассона.
c. Лучшая помехоустойчивость
Во время распределения реакционной системы на первом этапе цифровой ПЦР матрица и ингибитор назначаются разным системам для уменьшения интерференции ингибиторов. В отличие от qPCR, dPCR обнаруживает флуоресценцию конечной точки, и даже если микросистема слегка затронута, это не повлияет на интерпретацию конечного результата.
Недостатки ПЦР трех поколений
а. Высокие требования к качеству шаблона.
Поскольку цифровая ПЦР разбивает реакции на десятки тысяч независимых систем, она предъявляет относительно высокие требования к количеству матрицы. Количество шаблона, превышающее количество микросистемы, приведет к невозможности количественного определения, а при небольшом количестве приведет к низкому сигналу и снижению точности количественного определения.
б. Оценка неспецифических продуктов
Цифровая ПЦР наблюдает флуоресценцию конечной точки в каждой системе. Независимо от того, специфичен продукт ПЦР или нет, если сигнал флуоресценции достаточно силен, он также интерпретируется как положительный результат. Таким образом, специфичность праймера dPCR чрезвычайно требовательна.
Типы планшетов для ПЦР
Планшеты для ПЦР в основном изготавливаются из полипропилена (ПП), что делает их более приспособленными к повторным настройкам высоких и низких температур во время реакций ПЦР, и их можно использовать в автоклавных операциях. Для достижения высокой производительности при работе с рядными пистолетами и приборами для ПЦР, 96-луночный планшет для ПЦР и 384-луночный планшет для ПЦР используются чаще. Существуют различные виды тарелки с юбкой. Юбка обеспечивает хорошую устойчивость при пипетировании при изготовлении реакционной системы и хорошую механическую прочность при автоматизированном механическом манипулировании. В зависимости от конструкции юбки планшеты для ПЦР можно разделить на планшеты для ПЦР без юбки, планшеты для ПЦР с полуюбкой, планшеты для ПЦР с полной юбкой и быстрые или низкопрофильные планшеты для ПЦР с полуюбкой.
96-луночный планшет для ПЦР
(96-луночный планшет для ПЦР / 96-луночный планшет с юбкой / 96-луночный планшет с прикладными биосистемами)
384-луночный планшет для ПЦР
(384-луночный ПЦР-планшет / ПЦР-планшет 384 / прикладные биосистемы, 384-луночный ПЦР-планшет)
Планшет для ПЦР без юбки
Окружающей панели нет планшет для ПЦР без юбкиЭта планшетка подходит для большинства ПЦР-приборов и модулей для ПЦР в реальном времени, но не предназначена для автоматизация приложений.
(планшет для ПЦР в реальном времени / планшет для ректального ПЦР / 96-луночный планшет для ПЦР / 384-луночный планшет для ПЦР)
Планшет для ПЦР с полуюбкой
Команда тарелка с полуюбкой, также известный как ПЦР-планшет с половинной юбкой, имеет короткий край по краю пластины. Это обеспечивает достаточную поддержку во время пипетирования и механическую прочность при работе с машиной.
(96-луночный планшет для ПЦР/КПЦР/планшет для ПЦР с юбкой)
Планшет для ПЦР с полной юбкой
ПЦР-планшет с полной юбкой имеет краевую панель, закрывающую высоту планшета. Этот формат планшета подходит для ПЦР-инструментов с выступающими модулями и обеспечивает безопасную и надежную фиксацию. Полная юбка также повышает механическую прочность, что делает ее пригодной для использования на автоматизированных рабочих станциях.
(96-луночные планшеты с полной юбкой / планшеты с матрицей Taqman / белые планшеты для ПЦР)
Как выбрать планшет для ПЦР?
Как известно, ПЦР является основным экспериментальным методом в биохимических лабораториях. Однако экспериментальные результаты всегда неудовлетворительны, возможно, из-за загрязнения следовых количеств пластиковых расходных материалов для ПЦР или экспериментальных помех, вызванных введением ингибиторов. Многие причины влияют на результаты ПЦР-эксперименты:
а. Праймеры — они являются ключом к специфичности ПЦР. Специфичность продуктов ПЦР основана на степени комплементарности между праймерами и матричной ДНК.
б. Ферменты и их концентрации.
c. Качество и концентрация dNTP.
d. Нуклеиновая кислота матрицы (целевого гена).
т. е. Концентрация Mg2+.
f. Настройки температуры и времени.
g. Количество циклов.
h. Оборудование, расходные материалы и т. д.
Среди них расходные материалы являются очень важным и легко упускаемым из виду фактором.
Почему расходные материалы для ПЦР обычно изготавливаются из полипропилена?
ПЦР/кПЦР расходные материалы обычно изготавливаются из полипропилена (ПП), поскольку это биологически инертный материал. Поверхность этого материала плохо прилипает к биомолекулам и обладает хорошей химической стойкостью и устойчивостью к температуре. Эти материалы часто находятся в непосредственном контакте с реагентами или образцами и поэтому требуют высококачественных материалов и хорошей обработки в процессе производства и подготовки.
Как выбрать между разными объемами пробирочных планшетов для ПЦР?
Лучшее пробирки для ПЦР доступны в объемах, соответствующих требованиям ПЦР-реакций. Однако для удовлетворения экспериментальных требований предпочтительны пробирки малого объема. Это связано с тем, что трубы/пластины малого объема имеют меньше места сверху, что улучшает скорость теплопередачи и уменьшает испарение. Более того, при добавлении сэмплов необходимо избегать добавления слишком большого или слишком малого количества сэмплов. Передозировка может привести к снижению теплопроводности, утечке и перекрестному загрязнению. Слишком малое количество образца может привести к потере испарения образца.
Общие размеры и объемы реакционных трубок
* Одинарная трубка / спаренная трубка: 0.5 мл, 0.2 мл, 0.15 мл
* ПЦР-планшет: ПЦР-планшет 0.1 мл / ПЦР-планшет 0.2 мл / 24-луночный ПЦР-планшет / 96-луночный ПЦР-планшет / 384-луночный ПЦР-планшет / … …
Почему некоторые планшеты для ПЦР имеют плоское покрытие, а некоторые — выпуклое?
Крышка планшета для ПЦР в плоском виде обеспечивает точную передачу флуоресцентного сигнала для q9PCR и позволяет легко записывать маркеры.
Выпуклая крышка контактирует с горячей крышкой прибора для ПЦР, чтобы уменьшить деформацию реакционной пробирки под давлением. Однако это повлияет на передачу сигнала флуоресценции и не может быть использовано в экспериментах с количественной ПЦР.
Как выбрать цвета планшетов для ПЦР?
Для обычных реакций ПЦР можно использовать как прозрачные, так и окрашенные пробирки для ПЦР. Цветные пробирки для ПЦР более удобны для сортировки образцов и управления ими.
Поскольку для количественной ПЦР требуется количественное определение интенсивности флуоресцентного сигнала в режиме реального времени, очень необходима чувствительная и точная передача флуоресцентного сигнала. белые ПЦР-планшеты максимизировать отражение флуоресцентных сигналов и уменьшить перекрестное загрязнение сигналов между лунками, что может оптимизировать результаты количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени.
Как купить планшет для ПЦР?
Если вы заинтересованы в нашем Планшет для ПЦР или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.