Сетчатые фильтры
Что такое фильтры для клеток?
Сетчатые фильтры Обычно используются в лабораторных культурах клеток, для фильтрации примесей, диспергирования клеток, разделения образцов и т. д. Клетки фильтр Обычно изготавливается из полипропиленовой рамы и специальной комбинации нейлоновой сетки. Типичные характеристики: клеточный фильтр 40 мкм, клеточный фильтр 70 мкм и клеточный фильтр 100 мкм проемы экрана.
В исследованиях клеточной биологии, будь то физиологические характеристики клеток, клеточная инвазия, апоптоз, фагоцитоз и другие физиологические функции, влияние факторов окружающей среды на экспрессию клеточных маркеров, скрининг лекарств и другие приложения, предварительным условием является получение идеального гомогенизированного одноклеточной жидкости графства, так что последующие эксперименты, такие как проточная сортировка клеток (FACS), могут быть проведены гладко и могут быть получены более точные экспериментальные результаты. Сетчатые фильтры являются наиболее распространенным типом расходных материалов, используемых в клеточных экспериментах. Это наиболее распространенный тип расходных материалов, используемых в клеточных экспериментах, и используется для фильтрации примесей в клеточных экспериментах.
Преимущество клеточных фильтров
а. Доступны три размера для различных типов клеточных образцов: 40 мкм, 70 мкм и 100 мкм.
б. Три цвета для различения различных характеристик: синий, белый и желтый.
c. Равномерное распределение отверстий в сетке, обеспечивающее стабильные и надежные экспериментальные результаты.
d. Верхний выступающий край позволяет проводить асептические манипуляции с помощью хирургических щипцов.
e. Рама из формованного полипропилена может быть окрашена в разные цвета для удобства обращения и различения.
f. Для использования с коническими сосудами JET объемом 50 мл. центробежный трубы.
g. Стерилизация гамма-излучением.
h. Отсутствие ДНКазы/РНКазы, отсутствие источника тепла, отсутствие эндотоксина.
Применение ячеистых фильтров
Цель ячеистые фильтры заключается в разрушении клеточной массы во время первичной культуры для получения одноклеточной суспензии.
а. Суспензия отдельных клеток, полученная путем фильтрации клеток крови, выделенных из костного мозга, поджелудочной железы, тимуса, миндалин и лимфатических узлов.
б. Подготовка образцов для первичной клеточной культуры и иммунизации.
c. Фильтрация глиадина из инактивированной сыворотки.
г. Подготовка замороженных первичных семян.
Перфорация сетчатых фильтров
Отверстия ячеистые фильтры штампуются на специальной машине для лазерной штамповки клеточных фильтров. Принцип работы заключается в том, что лазерный луч над лазером сильно сконцентрирован в пространстве и времени, что может уменьшить диаметр пятна до микронного уровня, таким образом, получив высокую плотность мощности, и может пробивать лазером практически любой материал.
Преимущество лазерной перфорации клеточного фильтра заключается в отсутствии заусенцев, герметизации, отсутствии остатков и плоском срезе. При лазерной перфорации отверстия клеточного фильтра размер перфорации является постоянным, если есть заусенцы или неровная поверхность, следующий процесс будет очень хлопотным, а лазерная обработка делает более позднюю обработку более быстрой и качественной.
Спецификация сетчатых фильтров
| Продукт | Описание | Спецификация пакета |
|---|---|---|
| Сотовый фильтр 40 мкм | 300 меш, синий, стерилизованный | 1 шт./упак., 50 шт./уп. |
| Сотовый фильтр 40 мкм | 200 меш, белый, стерилизованный | 1 шт./упак., 50 шт./уп. |
| Сотовый фильтр 40 мкм | 160 меш, желтый, стерилизованный | 1 шт./упак., 50 шт./уп. |
Выбор клеточных фильтров
Количество ячеек сита клеточного фильтра × размер пор = 15000 (выберите сито ячейки с соответствующим размером ячейки в соответствии с размером требуемого размера пор фильтра экспериментального материала).
Тип сетчатых фильтров
Сетчатые фильтры обычно делятся на два основных материала: один из пластиковых изделий, таких как нейлон, а другой изготовлен из нержавеющей стали.
Сетчатые фильтры из нержавеющей стали
Сетка фильтра из нержавеющей стали изготовлена из нержавеющей стали, имеет гладкую поверхность, красивый внешний вид и прочные характеристики. Сетчатые фильтры из нержавеющей стали имеют различные спецификации от 40 до 800 меш, которые обычно используются в лабораторных клеточных культурах, фильтрации примесей, дисперсии клеток, разделении образцов и т. д. Фильтры для клеток из нержавеющей стали можно использовать повторно, как правило, с использованием ультразвуковой очистки, а затем стерилизации. Ячеистое сито делится на два вида сетчатый фильтр из нержавеющей стали с ручкой и из нержавеющей стали сотовый фильтр без ручки, которая проста и удобна в эксплуатации для научно-исследовательских экспериментов.
Нейлоновые сетчатые фильтры
Образцы для обычных испытаний на текучесть можно использовать с 300-350 меш. нейлоновые сетчатые фильтры, сложенный в форме воронки и используемый с гемостатическими щипцами.
Использование сетчатых фильтров
a. Сетчатые фильтры их нельзя замачивать в кислоте после мытья, их можно стерилизовать непосредственно во влажном состоянии, завернув их в оловянную фольгу. Не перетирайте всухую при использовании. При фильтрации больших тканей необходимо добавлять буфер при измельчении.
б. Разница между 200 меш и 300 меш ячеистые фильтры это размер отверстий. Эта разница не очень велика при проточном типе, но при использовании 300 меш будьте осторожны, чтобы не шлифовать слишком много, чтобы избежать чрезмерной соединительной ткани.
c. Ткань легких крысы, полученная после измельчения клеток на клеточных ситах, представляет собой смесь клеток, включая паренхимальные клетки легких, стромальные клетки, эритроциты, а также небольшое количество лейкоцитов, NK-клеток и макрофагов.
Очистка ячеистых фильтров
a. Одноразовые фильтры для клеток не рекомендуется очищать и дезинфицировать, что может привести к неравномерности фильтра и повлиять на результаты следующего эксперимента.
б. Очистка разбавленным щелочным раствором для удаления остатков клеток и тканей.
c. Замочите и очистите раствором для удаления накипи.
d. Промывка водопроводной водой, 3 раза дистиллированной водой, 3 раза повторно дистиллированной водой, стерилизация упаковки.
Клеточный фильтр для проточной цитометрии
Проточной цитометрии это метод количественного анализа и сортировки отдельных клеток или биологических частиц в суспензии, который имеет преимущества высокой скорости, высокой точности и аккуратности и широко используется для подсчета клеток, сортировки клеток, анализа молекулярного фенотипа, белковой инженерии и других исследовательская работа.
Область применения
А. Выделение спленоцитов
а. Извлеките селезенку мыши и поместите ее в пробирку объемом 15 мл. центрифужная пробирка (без жидкости) и поместите пробирку на лед.
б. Добавьте 5 мл буфера для лизиса эритроцитов в 15 мл центрифужной пробирки, содержащей селезенку.
c. Вылейте буфер для лизиса эритроцитов и селезенку в емкость объемом 10 см³. блюдо для культивирования клеток.
d. Поместите селезенку на шероховатую сторону двухсторонней измельчительной машины для предметных стекол (смоченной буфером для лизиса эритроцитов), тщательно измельчите селезенку в двухсторонней измельчительной машине и измельчайте между двумя измельчителями до полного отделения селезенки.
e. Перенесите лизат эритроцитов, содержащий спленоциты, в центрифужную пробирку объемом 15 мл.
f. Добавьте 10 мл среды в центрифужную пробирку и переверните ее 2-3 раза.
g. Центрифугировать при 1300 об/мин при 4 °C в течение 00:05:00
h. Удалите надосадочную жидкость и ресуспендируйте осадок в 3 мл среды.
i. Отфильтровать 70 мкМ клеточный фильтр через центрифужную пробирку на 50 мл.
j. Разведите клетки в соотношении 1:100 и подсчитайте их количество.
k. Разведите суспензию отдельных клеток до концентрации 1 x 107⁷ клеток/мл в среде RPMI (для проточной цитометрии подсчет клеток не требуется).
l. Поместите спленоциты на лед до тех пор, пока они не попадут в 96-луночный планшет.
Б. Стимуляция спленоцитов
а. Приготовьте одну среду RPMI, содержащую брефелдин А в концентрации 10 мкг/мл.
б. Все исходные растворы ЛПС перемешайте на вихревом смесителе и центрифугируйте, затем обработайте каждый из них ультразвуком в течение 10:00. После обработки ультразвуком снова перемешайте на вихревом смесителе и центрифугируйте.
c. Подготовьте каждый стимул (EC LPS, PA, YP, Lipid IVa) в концентрации, вдвое превышающей желаемую конечную концентрацию (2x), используя среду, содержащую брефелдин А.
d. В соответствующие лунки 96-луночного планшета объемом 2.2 мл добавляют по 100 мкл каждого стимулятора, включая нестимулированные лунки в качестве контрольных.
e. Внесите 100 мкл спленоцитов в соответствующие лунки (внесите еще одну группу спленоцитов для использования в качестве контрольного образца для однократного окрашивания).
f. Затем инкубировать при 37 °C в течение 04:00:00.
C. Иммуноцитохимическое окрашивание
а. После 04:00:00 обработайте планшет с лунками 20 мкл 20 мМ ЭДТА.
б. Перемешайте и выдержите при температуре 37 °C в течение 00:10:00.
c. После инкубации снова перемешать, затем центрифугировать при 1300 об/мин в течение 00:05:00.
d. Отсосать или удалить материал аспирацией.
e. Закройте все лунки 10 мкл разбавленного FcBlock (1:100 FcBloc в PBSA/az).
f. Инкубировать на льду в 00:15:00.
g. Добавить 100 мкл PBSA/az и центрифугировать при 1300 об/мин в течение 00:05:00.
h. Отсосать или удалить среду.
i. Суспендировать/окрасить 10 мкл смеси антител: CD11b PerCP-Cy5.5, CD11c PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 и CD3 APC (1:100Ab в PBSA/az) в образце стимулированных спленоцитов.
j. Добавьте 100 мкл PBSA/az к контрольному образцу для однократного окрашивания, а затем 1 мкл следующих антител для однократного окрашивания: CD8 FITC, CD8 PE, CD4 PerCP-Cy5.5, CD8 PE-Cy7, CD19 APC-Cy7 и CD8 APC.
k. Инкубировать на льду, защищенном от света (или обернутом фольгой), в 00:20:00.
l. Добавить 100 мкл PBSA/az, затем центрифугировать при 1300 об/мин в течение 00:05:00.
м. Отсосать или оторвать предмет.
n. Во все лунки следует добавить 100 мкл раствора BDcytofix/cytoperm для ресуспендирования.
o. Инкубировать на льду, защищенном от света. 00:20:00.
p. Добавьте 100 мкл 1x BD Perm Wash во все лунки.
q. Центрифугировать при 1300 об/мин в течение 00:05:00, затем отсосать или стряхнуть среду.
r. После этого следует повторно суспендировать/промыть 200 мкл 1x BD Perm Wash, несколько раз набирая и выпуская жидкость пипеткой во все лунки.
s. Центрифугировать при 1300 об/мин в течение 00:05:00, затем отсосать или стряхнуть среду.
t. Суспендируйте/окрасьте образцы спленоцитов 50 мкл смеси антител: TNF FITC и IL-12/IL-23p40 PE, чтобы получить стимулированные спленоциты.
u. Инкубировать на льду в 00:30:00, в защищенном от света месте.
v. Добавьте 150 мкл раствора 1xBD Perm wash во все лунки и центрифугируйте при 1300 об/мин в течение 00:05:00.
w. Отсосать или стряхнуть носитель.
x. После этого следует ресуспендировать/промыть 200 мкл 1x BD Perm Wash, несколько раз набирая и выпуская жидкость пипеткой во все лунки.
y. Центрифугировать при 1300 об/мин в течение 00:05:00, затем отсосать или стряхнуть среду.
z. Суспендировать в конечном объеме 200 мкл 1% раствора параформальдегида (разбавить 10% параформальдегид 1xPBS).
аа. Хранить при температуре 4 °C в защищенном от света месте (или завернуть в фольгу) до момента использования. цитометрия анализ – перенос образцов из 96-луночного планшета в бюретка непосредственно перед FACS.
Как выбрать фильтры для клеток?
Если вы заинтересованы в нашем Сетчатые фильтры или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.